ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 5
ВВЕДЕНИЕ 6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13
1.1 Современное состояние и перспективы совершенствования 13 эффективности чумных вакцин
1.2 Оптимизация этапов биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой 21
1.2.1 Некоторые вопросы управляемого культивирования биомассы вакцинного штамма ЕВ 21
1.2.2 Пути совершенствования биологических показателей вак¬цины чумной живой на этапах сведения, разлива и лиофилизации бактериальной суспензии 26
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 33
2.1 Материалы 33
2.2 Методы исследования 37
Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПРЕПАРАТА ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБОВ И ОБЪЕМА ВАКЦИННОЙ СУСПЕНЗИИ В АМПУЛЕ 44
Глава 4. БИОТЕХНОЛОГИЯ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В АМПУЛЕ 54
2
4.1 Приготовление посевной культуры, засев маточной культуры в АКМ-Ш, условия культивирования вакцинного штамма чумного микроба 54
4.2 Смыв бактериальной массы с поверхности агара с последующим приготовлением необходимой концентрации микробных клеток, разлив, лиофилизация вакцины 58
4.3 Некоторые вопросы стабилизации вакцинной суспензии в производстве вакцины ЕВ в зависимости от условий лиофилизации 61
4.4 Оптимизация параметров вакцинной суспензии в биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой глубинным методом культивирования 66
Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАРА¬МЕТРОВ И ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В АМПУЛЕ И КОММЕРЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА 72
5.1 Сравнительная характеристика образцов вакцины чумной живой сухой в зависимости от параметров вакцинной суспензии по критериям жизнеспособности, термостабильности, иммуногенности 72
5.2 Изучение реактогенности различных образцов вакцины чумной живой сухой 77
5.3 Оценка экономической эффективности вакцины чумной жи¬вой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле 80
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 82
ВЫВОДЫ 91
3
Многолетний опыт использования вакцинации как средства специфической профилактики особо опасных инфекций свидетельствует о сохранении ее весомой роли (Исупов И.В., Бугоркова С.А., Кутырев В.В., 2004). В практике проведения противоэпидемической работы в нашей стране широко применяют живые вакцины. Один из таких препаратов представляет собой вакцину из штамма ЕВ чумного микроба. Совершенствование специфической профилактики чумы является одной из актуальных задач обеспечения эпидемического благополучия. (А.И. Коротяев, С.А. Бабичев, 2002). Эпидемический потенциал чумной инфекции, оставаясь в настоящее время довольно напряженным, обусловлен существованием в нашей стране и на сопредельных территориях очагов чумы с постоянно протекающими в них эпизоотиями (Сулейманов Б.М., 1995; Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., 2004). Исследования отечественных ученых показали, что наиболее эффективным препаратом противоэпидемического значения является вакцина чумная живая из штамма EV (Борисов Л.Б., 2002).
Наиболее важным вопросом, возникающим при приготовлении живых вакцин, является необходимость сохранения всех свойств микробов в течение длительного времени, то есть стабилизация качества препарата. Тактика совершенствования чумной вакцины осуществляется в направлении разработки и внедрения в производство дополнительных условий стабилизации числа живых микробных клеток в прививочной дозе коммерческой вакцины.
Одним из существенных и принципиально нерешенных вопросов остается значительное снижение количества живых микробных клеток в вакцинирующей дозе, особенно к концу срока годности препарата, что само по себе является свойством закономерным, поскольку, согласно большому литературному материалу и многолетнему опыту изучения свойств чумных
6
вакцин, метод лиофильного высушивания не способен обеспечить полной и длительной стабилизации свойств биообъектов, в том числе и чумной вакцины.
Из факторов, влияющих на выживаемость микроорганизмов в процессе высушивания и дальнейшего хранения, наиболее важную роль играет состав защитной среды и окружающая температура. В настоящее время среды высушивания достаточно хорошо изучены, определен необходимый состав ингредиентов, включающий кристаллоидные, коллоидные вещества и антиокислители, но выбор их осуществляется в основном эмпирически, без достаточного учета современных знаний механизма защиты бактериальных клеток на различных этапах лиофилизации и хранения. Несмотря на то, что основные этапы производства коммерческого препарата строго регламентированы, некоторые количественные параметры вакцины колеблются в значительных пределах. Например, общее число микробных клеток в 1 мл вакцинной суспензии согласно регламентирующей документации составляет от 50 до 100 млрд.
Важным моментом биотехнологии производства чумной вакцины является оптимизация процентного содержания компонентов на единицу взвешенных в среде микробных клеток и отработка режимов лиофилизации, которые позволили бы достигать низкой потери массы при высушивании.
В контексте сказанного следует обратить внимание на разработку биотехнологии изготовления чумной вакцины со сниженным числом человеко-доз в ампуле. Указанная форма является удобной для проведения иммунизации сравнительно небольших по численности коллективов, когда ресуспендированный препарат не может длительно храниться и должен быть сразу же использован. Изменение параметров указанной вакцины касается не только густоты вакцинной суспензии, что отражается на количественном соотношении микробных клеток и стабилизатора, но и уменьшенного объема вакцины в ампуле.
Производство чумной вакцины представляет собой биотехнологический цикл, учитывающий и сохраняющий биологические свойства микробов вакцинного штамма ЕВ, являющихся исходным материалом для накопления биомассы. За многие годы производственного выпуска чумной вакцины хорошо отработана технология ее изготовления.
Совершенствование биотехнологии чумной вакцины развивается преимущественно в направлениях, способствующих наработкам большого количества бакмассы, внедрению эффективных методов аппаратного культивирования, оптимизации и конструированию новых питательных сред, в частности из непищевого сырья, дальнейшей стандартизации коммерческого препарата вакцины ЕВ.
Литературные данные свидетельствуют, что в настоящее время совершенствование технологии производства чумной вакцины развивается в направлении стандартизации живой чумной вакцины по единому числу человеко-доз (Ракитина Е.Л., 1988; Будыка Д.А., 2002), и повышению термостабильности и стабилизации препарата в процессе длительного хранения (Будыка Д.А. с соавт., 2000; Будыка Д.А., 2002).
Но несмотря на то, что почти все этапы производственного цикла четко регламентированы, отмечается очень широкая вариабельность свойств вакцинного препарата, например, жизнеспособности коммерческих серий чумной вакцины - от 25 до 50 % (Ракитина Е.Л., 1988) при оптической концентрации микробных клеток от 50 до 100 млрд/мл. Учитывая, что наиболее важным показателем, характеризующим качество препарата чумной вакцины, является число живых микробов в человеко-дозе, данному критерию уделяют особое внимание. Этот показатель используется, как один из основных, при отработке и совершенствовании различных этапов изготовления препарата.
82
Биотехнология вакцины чумной живой сухой должна быть призвана наиболее полно сохранить иммуногенные свойства в процессе производства коммерческого препарата, которые, прежде всего, обусловлены живыми клетками вакцинного штамма. Предпринятые исследования были посвящены созданию более оптимальных условий воздействия защитных компонентов стабилизатора на единицу взвешенных в нем микробных клеток за счет уменьшения общего количества микробных клеток в смываемой суспензии и, как следствие, в чумной вакцине (в 10 раз уменьшенной концентрацией по сравнению с регламентированной (50-100 млрд/мл) (Васильева А. А., 2004). Это достигается путем дополнительного внесения расчетного количества стабилизатора в вакцинную суспензию на этапе ее сведения, и возможностью достичь в регламентированных пределах состояния более глубокого анабиоза живых микробных клеток при лиофилизации за счет уменьшения объема вакцинной суспензии с 2 мл до 1 мл в ампуле на этапе разлива, предшествующему процессу замораживания- высушивания.
Из данных литературы известно, что уменьшение объема вакцинной суспензии в ампуле до 1 мл и снижение концентрации микробных клеток не ухудшало качественных показателей препарата, а некоторые из них (термостабильность, повреждаемость) были достоверно лучше по сравнению с контролем (коммерческая вакцина) (Бондаренко А.И., 1995; Будыка Д. А. с соавт., 2000). Бондаренко А.И. и Тинкер А.И. (1991) при помощи электронной микроскопии показали, что существует зависимость между числом поврежденных клеток в вакцине по мере увеличения общей концентрации микробов в суспензии и от ее объема (1 и 2 мл) в ампуле.
Предварительно отработали в эксперименте различные образцы вакцины со сниженным количеством микробных клеток в суспензии. Бактериальную массу для экспериментальных серий получали в процессе производства живой чумной вакцины. Экспериментальные серии (8 серий) готовили путем дополнительного разведения стабилизатором до
83
концентрации 1,9-109 м.к./мл микробных клеток. Приготовленную вакцину разливали в ампулы по 1 мл. В качестве контрольных служили производственные серии с оптической концентрацией около 80 млрд/мл, разлитые по 2 мл. Всю вакцину лиофилизировали в аппарате LZ-45. Пайку ампул проводили под вакуумом.
Провели изучение жизнеспособности, повреждаемости микробных клеток в экспериментальных сериях чумной вакцины с объемом суспензии в ампуле 1 мл и концентрацией 1,9-109 м.к./мл в сравнении с традиционными коммерческими сериями вакцины чумной живой сухой, содержащими в ампуле 2 мл клеточной суспензии с концентрацией 7-1010 м.к./мл.
Показатель повреждаемости клеток, определяемый при электронной микроскопии, в исследуемых препаратах составил (3,4+0,5)% и был статистически достоверно ниже относительно контрольных образцов (9,7+1,2)% и ОСО (8,8+0,8)%.
Сравнительная характеристика жизнеспособности опытных (33,4+1,3)% и контрольных (26,8+0,6)% образцов чумной вакцины показала, что во все исследуемые сроки этот показатель был достоверно выше у вакцины со сниженной концентрацией микробных клеток. При этом жизнеспособность коммерческой вакцины отвечала требованиям документации лишь в течение одного года, в то время как опытные серии даже через три года хранения в большинстве своем превышали регламентированный показатель 25%, причем критерий достоверности различий жизнеспособности между опытными и контрольными сериями в этот срок исследования достиг наибольшей величины.
В дальнейшем, используя электронную микроскопию для оценки состояния микробных клеток, были изучены качественные характеристики экспериментальных серий чумной вакцины с различными показателями общей концентрации (от 50 до 100 млрд/мл) и объема суспензии в ампуле (1 и 2 мл). Одним из критериев оценки качества была повреждаемость микробов после лиофилизации.
84
Электронной микроскопией было показано, что существует зависимость между числом поврежденных клеток в вакцине по мере увеличения общей концентрации микробов в суспензии: 50, 75, 100 млрд/мл с одной стороны и довольно четкий параллелизм по этому показателю у суспензий с концентрацией 50 и 75 млрд/мл в зависимости от ее объема (1 и
2 мл) в ампуле.
На основании полученных данных сделано заключение о соответствии производственным стандартам (ОСО) по жизнеспособности микробных клеток и превосходству по показателю их повреждаемости в экспериментальных сериях вакцины чумной живой сухой.
Полученные результаты показали, что при одинаковых исходных условиях (культивирование, лиофилизация, хранение) вакцина с измененными тактико-техническими параметрами (концентрация микробных клеток в препарате 1-4х1010 м.к./мл) по основным показателям превосходит коммерческие образцы. Это послужило основанием для разработки биотехнологии и получения экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле в условиях производственного цикла.
Были приготовлены 5 экспериментально-производственных серий препарата вакцины чумной живой сухой (для контроля в лаборатории препаратов против чумы и других особо опасных инфекций ГИСК им. Л.А. Тарасевича) с меньшим, по сравнению с регламентированным, количеством доз в ампуле, приготовленных в условиях производства вакцины в АКМ-Ш поверхностным методом выращивания с использованием всех регламентированных технологических этапов (действующая НД), и отличающихся тем, что на этапе сведения вакцинной суспензии концентрация микробных клеток доводится у части суспензии до параметров 1х1010- 4х1010 в 1 мл путем дополнительного внесения расчетного количества стабилизатора. Во время разлива вакцинной суспензии объем ее ограничивается 1 мл в ампуле.
85
Были изучены параметры жизнеспособности (39,7+1,8)%, термостабильности (8,9+0,7) сут и потери в массе при высушивании (1,02+0,23%) полученных экспериментально-производственных серий вакцины. Результаты показали соответствие по изучаемым параметрам экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой действующей НД.
Контроль иммуногенности в соответствии с действующей ФС на вакцину № 42-3877-99. Полученные данные (7254 м.к. для белых мышей и 1360 м.к. для морских свинок) означают, что ED50 экспериментальной вакцины была существенно ниже регламентированных показателей ФС (1-104 ж.м.к. для морских свинок и 4-104 ж.м.к. для белых мышей), т.е. иммуногенность ее весьма высока и превышает, как минимум, пятикратно крайние пределы, регламентированные нормативной документацией.
Помимо общепринятой методики, провели сравнительное изучение на белых мышах эффективности экспериментально-производственной и коммерческой вакцин в феномене «переживания», выраженной в LD50 вирулентного штамма и характеризующей иммуногенность вакцинного препарата, использованного для введения в смеси с вирулентным.
1. А.с. 2215033 Россия, опубл. 27.10.2003, Бюл. №30. RU Способ получения концентрата микробных клеток в производстве чумных вакцин / Ковален¬ко В.Н., Асяев А.А., Черкасов Н.А., Ежов А.В., Багин С.В., Хонин А.З., Мохов Д.А.
2. А.с. 2241033 Россия, опубл. 27.11.2004, Бюл.№33. RU Питательная среда для накопления биомассы вакцинного штамма чумного микроба / Смир¬нова Е.Б., Катунина Л.С., Старцева О.Л., Смирнов С.Е., Головнева С.И., Борздова И.Ю., Борздов А.А.
3. А.с. 2245362 Россия, опубл. 27.01.2005, Бюл. №3. RU Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба / Смирнова Е.Б., Катунина Л.С., Старцева О.Л., Смирнов С.Е., Головнева С.И.
4. Авдеева Н.Г., Дятлов И.А., Еремин С.А. Разработка технологии производ¬ства дрожжевых аутолизатов как основы конструирования питательных сред для чумного микроба и холерного вибриона.- Деп. в ВИНИТИ
10.04.0. - № 925-В00. - Саратов, 2000.- 17 с.
5. Ада Г., Рамсей А. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ. - М: Медици¬на, 2002. - 344 с.
6. Алексеева Н.Ю. Конструирование вакцин нового поколения против саль-монеллезов и чумы на основе структурного объединения антигенов и син-тетических полиэлектролитов : Дисс. ... д-ра биол. наук.- Москва, 1997. - 393 с.
7. Анисимов А.П., Никифоров А.К., Еремин С.А., Дроздов И.Г. Конструиро¬вание штамма YERSINIA PESTIS с повышенной протективностью // Бюл¬летень экспериментальной биологии и медицины - 1995.- №11. - С.532-534
8. Анисимова Т.И., Дроздовская Ф.К., Скачек А.Б., Глушко Л.И., Печникова И.В., Тинкер А.И.. Влияние стабилизаторов и условий хранения на функ¬циональное состояние клеток в чумной живой вакцине // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1978. - Вып. 1 (59). - С. 55 - 58.
93
9. Анисимова Т.И., Свинцова Е.М., Печникова И.В., Тинкер А.И., Красикова М. А., Щупаев В.В. Сравнительное изучение жизнеспособности и иммуно- генности чумной вакцины в зависимости от сред высушивания и сроков хранения // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1970. - Вып 3(13). - С. 106 - 113.
10. Апарин Г.П., Вершинина Т.И. Методические рекомендации по определению степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба для белых мышей. - Иркутск, 1984.-31 с.
11. Апарин Г.П., Голубинский Е.П. Микробиология чумы: Руководство.- Иркутстк: Изд-во Иркутсткогго университета, 1989.- 89 с.
12. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства мик-роорганизмов при различных методах хранения // Биол. науки.- 1983.- №
4 (232). - С. 93 - 105.
13. Асеева Л.Е., Лопатина Н.В., Бурша О.С. Биохимические подходы к отбору иммуногенных вариантов вакцинных штаммов чумного микроба // Био-технология.- 1994. - №11-12.- С.6-8.
14. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медиц. вузов / Под. ред. Воробьева А. А., Быкова А.С.- М.: Медиц. информационное агенство, 2003. - 236 с.: ил.
15. Аубакиров С. А. О состоянии и перспективе специфической профилактики чумы // Иммунол. и специф. профилакт. особо опасных инф. - Саратов, 1993.-С. 139.
16. Ахапкина И.Г., Блинкова Л.П. Питательные среды как искусственная сре¬да роста и развития микроорганизмов // ЖМЭИ.- 2001.- № 6.- С. 99.
17. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологиче¬ских исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. -180 с.
18. Балинер Л.М. Разработка биолюминесцентного метода определения коли¬чества живых бактерий в лиофилизированных вакцинах : Дис. ... канд. биол. наук. - Москва, 2003. - 88 с.
94
19. Бахрах Е.Э., Вейнблат В.И., Тараненко Т.М,, Дальвадянц С.М., Гольдфарб Л.М. Методы выделения и очистки соматических антигенов чумных бак¬терий // Профилактики особо опасных инфекций. Эпизоотология, микро¬биология и специфическая профилактика чумы. Вып. 1. - Саратов, 1976. - С. 131-139.
20. Бахрах Е.Э., Мартенс Л.А., Соколова Н.М., Обухова З.А. Режим кислотно¬го гидролизата казеина, обеспечивающий получение сред, пригодных для выращивания чумного микроба // Уч. зап. Дагест. н.- и. ин-та пит. сред.- 1964.- Вып.4.- С. 105-120.
21. Бахрах Е.Э., Обухова З.А., Маслова О.П. Усовершенствование технологии приготовления питательных сред для выращивания чумного микроба. Со- общ.1. О режиме гидролиза основных растворов Хоттингера // Тр. ин-та «Микроб», 1960.- Вып. 4.- С. 514-518.
22. Бахрах Е.Э., Тараненко Т.М., Гольдфарб Л.М., Земцова И.Н., Классовский Л.Н., Кондрашин Ю.И., Малинина З.Е., Степанов В.М., Андреева И.П. Особенности строения соматических антигенов чумных бактерий // Пробл. особо опасных инфекций. Генетика, микробиол., патоморфол. - Саратов, 1977. - Вып. 4(56). - С.70-71.
23. Беккер М.Е., Дамберг Б.Э., Рапопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов. - Рига, 1981.
24. Белоус А.М., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении // Наукова думка. - Киев, 1982. - 400 с.
25. Бельская Н.А. Изучение некоторых физико-химических свойств водорас-творимых белков чумных бактерий: Автореф. дис. ... канд. мед. наук.- Са¬ратов. - 1975. - 17 с.
26. Бланков Б.И., Клебанов Д.А. Применение лиофилизации в микробиоло¬гии. // Медгиз, М, 1961.- С.209-211.
27. Богаутдинов З.Ф., Балинер Л.М., Фрунджян В.Г. Методические рекомен¬дации по биолюминесцентному определению жизнеспособности бактерий в лиофилизированных вакцинах. - Москва, 2002. -4 с.
95
28. Бондаренко А.И. Разработка электронно-микроскопического способа ко-личественного определения поврежденных клеток чумной вакцины ЕВ : Автореф. дис. ... канд. мед наук. - Ставрополь, 1995. - 21 с.
29. Бондаренко А.И., Тинкер А.И. Разработка электронномикроскопического теста количественного определения поврежденных бактериальных клеток.
- Деп. ВИНИТИ 07.05.1991. - № 3228-В91. - 16 с.
30. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология./ Учебник,3-е изд.- Москва, 2002. -736 с.
31. Брагинская В.П., Соколова А.Ф. Активная иммунизация и профилактика поствакцинальных осложнений у детей.- М., 1977.
32. Будыка Д.А. (Руководитель) Оптимизация температурного режима выра-щивания бактериальной массы в технологии производства чумной вакци¬ны: Отчет о НИР (закл.) / СтавНИПЧИ. -1999.- 29 с.
33. Будыка Д.А. Научно-методические основы совершенствования живой чумной вакцины : Дис. ... д-ра мед.наук. - Ставрополь, 2002.- 279 с.
34. Будыка Д.А., Васильева А.А. Пути совершенствования биотехнологии из-готовления живой чумной вакцины // Сб. научн. работ «Актуальные про¬блемы медицины». - Томск, 2004. - С.312.
35. Будыка Д.А., Тинкер А.И., Бондаренко А.И. Экспериментально¬теоретическое обоснование для выпуска чумной вакцины со сниженным количеством человекодоз. - Деп. в ВИНИТИ 15.08.00, № 2249-В00.- Став¬рополь, 2000.- 8 с.
36. Будыка Д. А., Тинкер А.И., Иванова Г.Ф., Гюлушанян К.С., Бондаренко А.И. Стабилизация свойств маточной культуры эталонного вакцинного штамма ЕВ в биотехнологии чумной живой вакцины.- Деп. в ВИНИТИ
18.07.0, № 1987-В00.-Ставрополь, 2000 - 12 с.
37. Васильева А.А. Анализ некоторых показателей биотехнологии изготовле¬ния живой чумной вакцины и экспериментально-теоретические аспекты повышения ее качества // Сб. научн. работ «Актуальные проблемы меди¬цины». - Томск, 2004. - С.312.
96
38. Васильева З.В., Трофименко Н.З., Липаева Л.С., Тимофеева Л.А., Голова¬чева В.Я. Сухая дрожжевая питательная среда для диагностики чумного микроба // Проблемы природной очаговости чумы: Тез. докл. к 4 советско- монгольской конф. специалистов противочумных учреждений.- 1980. - ч.3.- С. 60 - 61.
39. Вейнблат В.И. Аллергенные свойства липополисахарида основного сома-тического антигена и капсульного антигена чумного микроба // Пробл. особо опасных инф. - 1977. - №4, - С.20-23.
40. Вейнблат В.И., Кузьмиченко И.А. К вопросу о механизме накопления и выделения чумным микробом капсульного антигена (роль клеточной структуры) // Журн. микробиол. - 1972. - №11.- С.102-106.
41. Вейнблат В.И., Титенко М.М., Веренков М.С., Щербаков А.А., Киреев М.Н. Видоспецифический поверхностно-соматический антиген возбуди¬теля чумы // Молекул. биол., генетика и иммунология возбудителей особо опасных инфекций : Тез. Докл, представл.на Всесозз.науч.конф. по акту¬альным вопросам молекулярной биологии, генетики и иммунологии воз¬будителей особо опасных инфекций (Ростов н/Д, 15-17 февр.1984).- Рос¬тов н/Д, 1984. - С.94-96.
42. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и сани¬тарная микробиология.- М.: Академия, 2003. - 464 с.
43. Воробьев А.А., Черкасский Б. Л., Степанов А.В., Кюрегян А. А., Федоров Ю.М. Актуальные проблемы борьбы с особо опасными инфекциями// Особо опасные инфекционные заболевания: эпидемиология, экспресс- диагностика и профилактика: Доклады Междунар. симпозиума 16-20 ию¬ня, Киров.- Киров,1997.- С. 243-257.
44. Гладус М. А. Биологическая активность сухих бактерийных анатоксинов при различных условиях хранения. Влияние величины остаточной влаж¬ности на стабильность биологических свойств. // Вакцины и сыворотки. Материалы по производству. - М., 1994. - В.22. - С. 119-121.
45. Гончарова М.Н. Некоторые аспекты сравнительного изучения чумных
97
вакцин : Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Саратов, 1981. - 22 с.
46. Гончарова М.Н., Шпилевая Э.Г. Использование тиомочевиновой среды высушивания для стабилизации некоторых свойств чумной вакцины //Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез. докл. 4 краевой науч.-практ. конф. по природной очаговости, эпидемиол. и профилакт. особо опасных инфекционных болезней (20 - 22 дек. 1978 г.). - Ставрополь, 1978. - С. 289 - 290.
47. Государственная Фармакопея СССР X. - М: Медицина- 1968.- 1080 с.: Определение на пирогенность.- С. 953-954.
48. Гремякова Т. А., Анисимов А.П., Захарова Н.М. Взаимосвязь способности к экспрессии различных серовариантов капсульного антигена Yersinia pes¬tis со степенью редуцированности липополисахарида бактериальных кле¬ток // Журн. микробиол.- 1995.- №1.- С. 3-6.
49. Гремякова Т.А., Степаншина В.Н., Шулюпин О.К., Негрий В.Ф., Мицевич Е.В. Экспрессия основных антигенов и ростовые свойства клеток Yersinia pestis в средах различного состава при 37 °С // ЖМЭИ.- 1993.- № 1.- С. 16-20.
50. Гусева Н.П. Липосомальные формы иммуногенов чумного микроба: Дис..канд.биол.наук.- Саратов, 1995.- 142 с.
51. Гюлушанян К.С. Использование питательной среды на основе кукурузно¬го экстракта в производстве чумной вакцины ЕВ: Дис. ... канд. биол. наук.
- Ставрополь, 1994. - 148 с.
52. Гюлушанян К.С., Угримов С.А., Майский В.Г., Воропаева Л.П. Возмож¬ность использования аминопептида при приготовлении комбинированно¬го агара на основе кукурузного экстракта для производства чумной вакци¬ны // Актуальные вопросы эпидемиологии, профилактики и диагностики особо опасных инфекций: Тез. докл. итог. науч. конф. (21 - 22 дек. 1989).