
Тип работы:	Предмет:	Язык работы:

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ УПАКОВКЕ (АМПУЛЕ)

Работа №	28071
Тип работы	Диссертация
Предмет	биология
Объем работы	115
Год сдачи	2005
Стоимость	500 руб.
ПУБЛИКУЕТСЯ ВПЕРВЫЕ
Просмотрено	624

Не подходит работа?

Узнай цену на написание

Содержание

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 5
ВВЕДЕНИЕ 6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13
1.1 Современное состояние и перспективы совершенствования 13
эффективности чумных вакцин
1.2 Оптимизация этапов биотехнологии производства вакцины
чумной живой сухой 21
1.2.1 Некоторые вопросы управляемого культивирования
биомассы вакцинного штамма ЕВ 21
1.2.2 Пути совершенствования биологических показателей вакцины чумной живой на этапах сведения, разлива и лиофилизации бактериальной суспензии 26
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 33
2.1 Материалы 33
2.2 Методы исследования 37
Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ПРЕПАРАТА ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ОБЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ МИКРОБОВ И ОБЪЕМА ВАКЦИННОЙ СУСПЕНЗИИ В АМПУЛЕ 44
Глава 4. БИОТЕХНОЛОГИЯ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ
ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В АМПУЛЕ 54
4.1 Приготовление посевной культуры, засев маточной культуры в АКМ- Ш , условия культивирования вакцинного штамма чумного микроба 54
4.2 Смыв бактериальной массы с поверхности агара с
последующим приготовлением необходимой концентрации микробных клеток, разлив, лиофилизация вакцины 58
4.3 Некоторые вопросы стабилизации вакцинной суспензии в
производстве вакцины ЕВ в зависимости от условий лиофилизации 61
4.4 Оптимизация параметров вакцинной суспензии в
биотехнологии производства вакцины чумной живой сухой глубинным методом культивирования 66
Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАРА¬
МЕТРОВ И ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ
ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ СУХОЙ СО
СНИЖЕННЫМ КОЛИЧЕСТВОМ ЧЕЛОВЕКО-ДОЗ В
АМПУЛЕ И КОММЕРЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА 72
5.1 Сравнительная характеристика образцов вакцины чумной
живой сухой в зависимости от параметров вакцинной суспензии по критериям жизнеспособности,
термостабильности, иммуногенности 72
5.2 Изучение реактогенности различных образцов вакцины
чумной живой сухой 77
5.3 Оценка экономической эффективности вакцины чумной жи¬вой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле 80
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 82
ВЫВОДЫ 91
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ
ЛИТЕРАТУРЫ
93

Введение

Многолетний опыт использования вакцинации как средства специфической профилактики особо опасных инфекций свидетельствует о сохранении ее весомой роли (Исупов И.В., Бугоркова С.А., Кутырев В.В., 2004). В практике проведения противоэпидемической работы в нашей стране широко применяют живые вакцины. Один из таких препаратов представляет собой вакцину из штамма ЕВ чумного микроба. Совершенствование специфической профилактики чумы является одной из актуальных задач обеспечения эпидемического благополучия. (А.И. Коротяев, С.А. Бабичев, 2002). Эпидемический потенциал чумной инфекции, оставаясь в настоящее время довольно напряженным, обусловлен существованием в нашей стране и на сопредельных территориях очагов чумы с постоянно протекающими в них эпизоотиями (Сулейманов Б.М., 1995; Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., 2004). Исследования отечественных ученых показали, что наиболее эффективным препаратом противоэпидемического значения является вакцина чумная живая из штамма EV (Борисов Л.Б., 2002).
Наиболее важным вопросом, возникающим при приготовлении живых вакцин, является необходимость сохранения всех свойств микробов в течение длительного времени, то есть стабилизация качества препарата. Тактика совершенствования чумной вакцины осуществляется в направлении разработки и внедрения в производство дополнительных условий стабилизации числа живых микробных клеток в прививочной дозе коммерческой вакцины.
Одним из существенных и принципиально нерешенных вопросов остается значительное снижение количества живых микробных клеток в вакцинирующей дозе, особенно к концу срока годности препарата, что само по себе является свойством закономерным, поскольку, согласно большому литературному материалу и многолетнему опыту изучения свойств чумных вакцин, метод лиофильного высушивания не способен обеспечить полной и длительной стабилизации свойств биообъектов, в том числе и чумной вакцины.
Из факторов, влияющих на выживаемость микроорганизмов в процессе высушивания и дальнейшего хранения, наиболее важную роль играет состав защитной среды и окружающая температура. В настоящее время среды высушивания достаточно хорошо изучены, определен необходимый состав ингредиентов, включающий кристаллоидные, коллоидные вещества и антиокислители, но выбор их осуществляется в основном эмпирически, без достаточного учета современных знаний механизма защиты бактериальных клеток на различных этапах лиофилизации и хранения. Несмотря на то, что основные этапы производства коммерческого препарата строго регламентированы, некоторые количественные параметры вакцины колеблются в значительных пределах. Например, общее число микробных клеток в 1 мл вакцинной суспензии согласно регламентирующей документации составляет от 50 до 100 млрд.
Важным моментом биотехнологии производства чумной вакцины является оптимизация процентного содержания компонентов на единицу взвешенных в среде микробных клеток и отработка режимов лиофилизации, которые позволили бы достигать низкой потери массы при высушивании.
В контексте сказанного следует обратить внимание на разработку биотехнологии изготовления чумной вакцины со сниженным числом человеко-доз в ампуле. Указанная форма является удобной для проведения иммунизации сравнительно небольших по численности коллективов, когда ресуспендированный препарат не может длительно храниться и должен быть сразу же использован. Изменение параметров указанной вакцины касается не только густоты вакцинной суспензии, что отражается на количественном соотношении микробных клеток и стабилизатора, но и уменьшенного объема вакцины в ампуле.
Цель исследования: разработка биотехнологии вакцины чумной живой сухой со сниженным содержанием человеко-доз в производственной упаковке, соответствующей качественным требованиям регламента производства для чумной вакцины (№1542-04) и имеющей экономический эффект при одновременной иммунизации небольших групп людей.
Основные задачи исследования:
1. Экспериментально обосновать оптимальное количество человеко-доз в ампуле с коммерческим препаратом с минимальным показателем поврежденных микробных клеток в нем в процессе хранения.
2. Стабилизировать показатели жизнеспособности и термостабильности бактерий в препарате вакцины чумной живой сухой за счет более оптимального соотношения действующих компонентов стабилизатора на единицу взвешенных в нем живых микробных клеток.
3. Научно обосновать достижение в условиях регламентированного режима лиофилизации состояния более глубокого анабиоза микробных клеток, характеризующегося показателем потери в массе при высушивании,не превышающем 1,5%.
4. Определить в эксперименте качественные преимущества вакцины чумной живой сухой с концентрацией микробных клеток в суспензии V1010- 4Т010, разлитой в объеме 1 мл в ампуле, перед коммерческим препаратом.
5. Разработать и внедрить в производство вакцины чумной живой сухой на этапе сведения и разлива методологию получения препарата с меньшим числом подкожных (внутрикожных) человеко-доз в ампуле (20-50), отвечающей качественным требованиям нормативной документации.
Научная новизна работы.
Экспериментально обосновано, что вакцина со сниженной концентрацией микробов в ампуле вследствие более сбалансированного соотношения микробных клеток и защитной среды, обладает новыми качественными характеристиками, превосходящими стандартные коммерческие образцы (жизнеспособность, термостабильность).
Показано, что в условиях регламентированного режима лиофилизации повышается эффективность стабилизации свойств микробных клеток у препарата с меньшей концентрацией вакцинной суспензии и снижением ее объема в ампуле. Критерием более глубокого анабиоза рекомендован показатель потери в массе при высушивании, не превышающий 1,5%. При индивидуализации режима высушивания для данного препарата длительность сушки сокращается с 28 до 18 часов.
Впервые оптимизировано количество человеко-доз в ампуле с коммерческим препаратом, обладающим преимуществом в области практического применения, заключающемся в удобстве при иммунизации небольших коллективов (от 20 до 50 человек). Препарат наиболее эффективен при использовании в регионах с жарким климатом и специфическими условиями вакцинации, например, в немногочисленных, расположенных на значительном расстоянии друг от друга точках: стойбищах скотоводов, охотников и т. д., а также в относительно ограниченных коллективах: лабораториях, работающих с возбудителем чумы, командах судов, осуществляющих заграничное плавание, и др.
Впервые отработана и внедрена в биотехнологию производства вакцины чумной живой сухой и соответственно в нормативную документацию концентрация микробных клеток в вакцинной суспензии (1-4) • 1010 в объеме 1 мл в ампуле.
Теоретическая и практическая значимость диссертации.
Разработана биотехнология вакцины чумной живой сухой со сниженным содержанием человеко-доз в производственной упаковке, соответствующей документации. Проведенные исследования стандартизировать коммерческий препарат сухой, предназначенной для проведения иммунизации в немногочисленных коллективах (20-50 человек), и обосновать экономический эффект ее использования.
Методология приготовления вакцины с меньшим количеством человеко- доз оптимизирована также к глубинному методу получения биомассы чумных микробов EV, в том числе на иммобилизованных магнитоуправляемых носителях.
Разработаны условия стабилизации вакцины с густотой вакцинной суспензии (1-4) • 1010 м.к. в объеме 1 мл в ампуле с регламентированным режимом лиофилизации, предполагающим возможность сокращения общего времени отторжения влаги в среднем на 10 часов.
Живая чумная вакцина, полученная по новой схеме, прошла контроль в лаборатории препаратов против чумы и других особо опасных инфекций ГИСК им. Л. А. Тарасевича, в соответствии с этим внесены изменения в нормативную документацию.
Практическая ценность работы подтверждена следующими документами:
Изменениями №1 к регламенту производства №1542-04 дополнительно предусмотрен выпуск вакцины с густотой вакцинной суспензии (1-4) • 1010 м. к. в объеме 1 мл в ампуле.
Разработана и находится на утверждении в Фармакологическом Комитете РФ Фармакопейная статья предприятия (ФСП) «Вакцина чумная живая сухая».
Утверждены директором Ставропольского НИПЧИ «Методические рекомендации по глубинному культивированию вакцинного штамма чумного микроба с использованием магнитоуправляемых иммобилизованных систем», одобренные Ученым Советом института 29.03.2004 г. (Протокол №3).
Диссертационная работа выполнена в рамках государственной темы НИР № ГР 01.2.00402924 «Стабилизация показателей живых микробных клеток в чумной вакцине за счет оптимизации некоторых количественных параметров на этапе приготовления коммерческого препарата».
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Новые условия стабилизации числа живых чумных микробов в прививочной дозе вакцины ЕВ в условиях производства и хранения на этапах сведения, розлива и лиофилизации, что является приоритетом в вопросах совершенствования живых вакцинных препаратов против чумы.
2. Биотехнология производства вакцины чумной живой сухой, использующая более рациональное соотношение «микробная клетка-среда высушивания» при выпуске вакцины со сниженным числом доз в ампуле, обеспечивает повышение качества препарата, позволяет получить экономический эффект при вакцинации ограниченного контингента людей.
3. Разработанная схема лиофилизации живой чумной вакцины с параметрами (1-4) • 1010 м.к. в объеме 1 мл обеспечивает глубокий анабиоз микроорганизмов с показателем потери в массе при высушивании, не превышающем 1,5%, при снижении времени лиофилизации до 18 часов.
4. Полученный по разработанной биотехнологии препарат соответствует требованиям, предъявляемым к вакцине чумной живой сухой, и предназначен для планового практического применения, дополняя арсенал профилактических препаратов против чумы, используемых для массовых иммунизаций в особых условиях.
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены на научных конференциях СтавНИПЧИ 2003, 2004, 2005 гг, научно-практической конференции «Актуальные проблемы эпиднадзора за природно-очаговыми и особо опасными инфекциями в регионе Северного Кавказа» (Ставрополь, 2005), на заседании Ставропольского регионального отделения общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 2005 г.; на VI Межгосударственной научно-практической конференции государств- участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств участников содружества независимых государств: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 2005).
Публикации.
Основное содержание диссертации отражено в 9 опубликованных научных работах (депонирована - 1, в научных сборниках - 8).
Структура и объём работы.
Диссертация изложена на 117 страницах и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 221 источник, в том числе 178 работ отечественных и 43 - зарубежных авторов. Материалы исследований иллюстрированы 16 таблицами и 6 рисунками.

Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Помощь студентам в написании работ!

ДИПЛОМНЫЕ МАГИСТЕРСКИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Курсовые Статьи Диплом Рязань

Заключение

Производство чумной вакцины представляет собой биотехнологический цикл, учитывающий и сохраняющий биологические свойства микробов вакцинного штамма ЕВ, являющихся исходным материалом для накопления биомассы. За многие годы производственного выпуска чумной вакцины хорошо отработана технология ее изготовления.
Совершенствование биотехнологии чумной вакцины развивается преимущественно в направлениях, способствующих наработкам большого количества бакмассы, внедрению эффективных методов аппаратного культивирования, оптимизации и конструированию новых питательных сред, в частности из непищевого сырья, дальнейшей стандартизации коммерческого препарата вакцины ЕВ.
Литературные данные свидетельствуют, что в настоящее время совершенствование технологии производства чумной вакцины развивается в направлении стандартизации живой чумной вакцины по единому числу человеко-доз (Ракитина Е.Л., 1988; Будыка Д.А., 2002), и повышению термостабильности и стабилизации препарата в процессе длительного хранения (Будыка Д.А. с соавт., 2000; Будыка Д.А., 2002).
Но несмотря на то, что почти все этапы производственного цикла четко регламентированы, отмечается очень широкая вариабельность свойств вакцинного препарата, например, жизнеспособности коммерческих серий чумной вакцины - от 25 до 50 % (Ракитина Е.Л., 1988) при оптической концентрации микробных клеток от 50 до 100 млрд/мл. Учитывая, что наиболее важным показателем, характеризующим качество препарата чумной вакцины, является число живых микробов в человеко-дозе, данному критерию уделяют особое внимание. Этот показатель используется, как один из основных, при отработке и совершенствовании различных этапов изготовления препарата.
Биотехнология вакцины чумной живой сухой должна быть призвана наиболее полно сохранить иммуногенные свойства в процессе производства коммерческого препарата, которые, прежде всего, обусловлены живыми клетками вакцинного штамма. Предпринятые исследования были посвящены созданию более оптимальных условий воздействия защитных компонентов стабилизатора на единицу взвешенных в нем микробных клеток за счет уменьшения общего количества микробных клеток в смываемой суспензии и, как следствие, в чумной вакцине (в 10 раз уменьшенной концентрацией по сравнению с регламентированной (50-100 млрд/мл) (Васильева А.А., 2004). Это достигается путем дополнительного внесения расчетного количества стабилизатора в вакцинную суспензию на этапе ее сведения, и возможностью достичь в регламентированных пределах состояния более глубокого анабиоза живых микробных клеток при лиофилизации за счет уменьшения объема вакцинной суспензии с 2 мл до 1 мл в ампуле на этапе разлива, предшествующему процессу замораживания- высушивания.
Из данных литературы известно, что уменьшение объема вакцинной суспензии в ампуле до 1 мл и снижение концентрации микробных клеток не ухудшало качественных показателей препарата, а некоторые из них (термостабильность, повреждаемость) были достоверно лучше по сравнению с контролем (коммерческая вакцина) (Бондаренко А.И., 1995; Будыка Д.А. с соавт., 2000). Бондаренко А.И. и Тинкер А.И. (1991) при помощи электронной микроскопии показали, что существует зависимость между числом поврежденных клеток в вакцине по мере увеличения общей концентрации микробов в суспензии и от ее объема (1 и 2 мл) в ампуле.
Предварительно отработали в эксперименте различные образцы вакцины со сниженным количеством микробных клеток в суспензии. Бактериальную массу для экспериментальных серий получали в процессе производства живой чумной вакцины. Экспериментальные серии (8 серий) готовили путем дополнительного разведения стабилизатором до концентрации 1,9-109 м.к./мл микробных клеток. Приготовленную вакцину разливали в ампулы по 1 мл. В качестве контрольных служили производственные серии с оптической концентрацией около 80 млрд/мл, разлитые по 2 мл. Всю вакцину лиофилизировали в аппарате LZ-45. Пайку ампул проводили под вакуумом.
Провели изучение жизнеспособности, повреждаемости микробных клеток в экспериментальных сериях чумной вакцины с объемом суспензии в ампуле 1 мл и концентрацией 1,9-109 м.к./мл в сравнении с традиционными коммерческими сериями вакцины чумной живой сухой, содержащими в ампуле 2 мл клеточной суспензии с концентрацией 7Т010 м.к./мл.
Показатель повреждаемости клеток, определяемый при электронной микроскопии, в исследуемых препаратах составил (3,4±0,5)% и был статистически достоверно ниже относительно контрольных образцов (9,7±1,2)% и ОСО (8,8±0,8)%.
Сравнительная характеристика жизнеспособности опытных (33,4±1,3)% и контрольных (26,8±0,6)% образцов чумной вакцины показала, что во все исследуемые сроки этот показатель был достоверно выше у вакцины со сниженной концентрацией микробных клеток. При этом жизнеспособность коммерческой вакцины отвечала требованиям документации лишь в течение одного года, в то время как опытные серии даже через три года хранения в большинстве своем превышали регламентированный показатель 25%, причем критерий достоверности различий жизнеспособности между опытными и контрольными сериями в этот срок исследования достиг наибольшей величины.
В дальнейшем, используя электронную микроскопию для оценки состояния микробных клеток, были изучены качественные характеристики экспериментальных серий чумной вакцины с различными показателями общей концентрации (от 50 до 100 млрд/мл) и объема суспензии в ампуле (1 и 2 мл). Одним из критериев оценки качества была повреждаемость микробов после лиофилизации.
Электронной микроскопией было показано, что существует зависимость между числом поврежденных клеток в вакцине по мере увеличения общей концентрации микробов в суспензии: 50, 75, 100 млрд/мл с одной стороны и довольно четкий параллелизм по этому показателю у суспензий с концентрацией 50 и 75 млрд/мл в зависимости от ее объема (1 и 2 мл) в ампуле.
На основании полученных данных сделано заключение о соответствии производственным стандартам (ОСО) по жизнеспособности микробных клеток и превосходству по показателю их повреждаемости в экспериментальных сериях вакцины чумной живой сухой.
Полученные результаты показали, что при одинаковых исходных условиях (культивирование, лиофилизация, хранение) вакцина с измененными тактико-техническими параметрами (концентрация микробных клеток в препарате 1-4х1010 м.к./мл) по основным показателям превосходит коммерческие образцы. Это послужило основанием для разработки биотехнологии и получения экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле в условиях производственного цикла.
Были приготовлены 5 экспериментально-производственных серий препарата вакцины чумной живой сухой (для контроля в лаборатории препаратов против чумы и других особо опасных инфекций ГИСК им. Л.А. Тарасевича) с меньшим, по сравнению с регламентированным, количеством доз в ампуле, приготовленных в условиях производства вакцины в АКМ-Ш поверхностным методом выращивания с использованием всех регламентированных технологических этапов (действующая НД), и отличающихся тем, что на этапе сведения вакцинной суспензии концентрация микробных клеток доводится у части суспензии до параметров 1х1010- 4х1010 в 1 мл путем дополнительного внесения расчетного количества стабилизатора. Во время разлива вакцинной суспензии объем ее ограничивается 1 мл в ампуле.
Были изучены параметры жизнеспособности (39,7+1,8)%, термостабильности (8,9+0,7) сут и потери в массе при высушивании (1,02+0,23%) полученных экспериментально-производственных серий вакцины. Результаты показали соответствие по изучаемым параметрам экспериментально-производственных серий вакцины чумной живой сухой действующей НД.
Контроль иммуногенности в соответствии с действующей ФС на вакцину № 42-3877-99. Полученные данные (7254 м.к. для белых мышей и 1360 м.к. для морских свинок) означают, что ED50 экспериментальной вакцины была существенно ниже регламентированных показателей ФС (U104ж.м.к. для морских свинок и 4Т04 ж.м.к. для белых мышей), т.е. иммуногенность ее весьма высока и превышает, как минимум, пятикратно крайние пределы, регламентированные нормативной документацией.
Помимо общепринятой методики, провели сравнительное изучение на белых мышах эффективности экспериментально-производственной и коммерческой вакцин в феномене «переживания», выраженной в LD50 вирулентного штамма и характеризующей иммуногенность вакцинного препарата, использованного для введения в смеси с вирулентным.
Полученные данные отражают четко выраженную тенденцию повышения величины LD50 у животных, иммунизированных экспериментальным препаратом, т.е. напряженность иммунитета при введении данной вакцины увеличилась в два раза по сравнению с контролем (коммерческая вакцина), хотя и не обеспечила статистически достоверную разницу.
Представленные результаты (для серии 1-LD50=7943 м.к., для серии 7 (контроль)-LD50=3162 м.к.) свидетельствуют о том, что и в данной серии опытов защитные свойства разработанной вакцины чумной живой сухой оказались весьма высоки и даже превысили таковые у коммерческого препарата.
Таким образом, иммуногенные свойства экспериментально-производственных образцов, приготовленных по технологии, модифицированной нами, соответствуют требованиям качества для препарата вакцины чумной живой сухой и проявляются высокими показателями.
Провели определение реактогенности по совокупным данным пирогенности и безвредности вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в производственной упаковке (ампуле).
При определении безвредности патологоанатомическая картина внутренних органов морских свинок была характерна для вакцинального процесса, при этом отсутствовали видимые деструктивные изменения в легких (кровоизлияния, очаги воспаления, гранулемы, абсцессы), в посевах крови и легких не зарегистрировано роста чумного микроба. В месте введения нами отмечалось развитие кровоизлияний и инфильтрата подкожной клетчатки.
Пирогенные свойства изучали по методике, описанной в X Государственной Фармакопее.
Полученные результаты свидетельствовали (суммарный подъем температуры у кроликов через 3 часы для вакцины, разлитой по 1 мл составил 3,8 градуса, для вакцины по 2 мл - 3,5 градуса, тиомочевиновая среда - 0,4 градуса, апирогенный 0,9% раствор хлорида натрия - 0,3 градуса), что чумная вакцина обоих образцов обладала выраженными пирогенными свойствами, что согласовалось с данными литературы (Тинкер А.И., Печникова И.В., 1978). В сравнении с производственными сериями, пирогенные свойства вакцины чумной живой сухой, приготовленной по новой технологии, не превышали показатели контрольного образца, а тиомочевиновая среда и разводящий раствор также не вызывали выраженной пирогенной реакции.
При сравнительном анализе результатов сушки около 100 серий чумной вакцины ЕВ в зависимости от ее параметрических особенностей (густота и объем суспензии в ампуле), длительности замораживания, удаления свободной влаги, общего времени высушивания и др. можно сделать вывод, что в процессе лиофилизации происходит существенное снижение выживаемости микробов в коммерческом препарате (52,1±0,4%) до (34,5±1,2%) и в экспериментальных образцах (с 60,7% до 36,8%).
Фактическое количество микроорганизмов колебалось в гораздо более широком диапазоне (от 22,7Т09 до 28,6Т09 м.к./мл) и от (5,95Т09 до 6,99Т09 м.к./мл) соответственно, что объяснялось разницей в общей концентрации микробов в суспензии. Однако в препарате на человеко-дозу (300 млн живых м.к.) колебания в коммерческой вакцине составили около 20-ти человеко-доз, в то время как в экспериментальной вакцине они не превышали 3,5, обусловив высокую стандартность препарата от серии к серии.
Данные, представляющие жизнеспособность коммерческих и экспериментальных образцов (89 и 5 серий соответственно), лиофилизированных в регламентированном режиме, были практически идентичны, однако отмечена достоверная разница во времени удаления свободной влаги и общей длительности сушки. При этом, с пролонгированием процесса сушки для 1,0 мл вакцин до 26±0 часов (регламентированное время) существенно уменьшалась потеря в массе при высушивании таблетки, составив 1,02±0,23% вместо 2,65±0,07% у коммерческой вакцины, но жизнеспособность оставалась на прежнем уровне, не снижаясь.
Анализ лиофилизации указанных препаратов живой чумной вакцины показал, что замораживание-высушивание достаточно идентично влияло на сохранение основных свойств всех исследованных образцов непосредственно после высушивания. При этом отмечено известное укорочение времени удаления свободной влаги и общей длительности сушки в отношении экспериментальных образцов (15 часов и 20 часов) по сравнению с регламентированным процессом сушки коммерческой вакцины (19 часов и 28 часов соответственно), однако жизнеспособность препарата при этом не изменялась. Что касается потери в массе при высушивании, то этот показатель коррелирует с выживаемостью микробов очень незначительно.
На основании полученных результатов, руководствуясь требованиями НД, можно сделать заключение об отсутствии разницы в реактогенности различных экспериментальных и коммерческих образцов вакцины чумной живой сухой.
Параллельно изучили возможность отработки технологии выпуска вакцины с меньшим количеством доз в ампуле при получении биомассы чумных микробных клеток ЕВ методом глубинного культивирования.
Результаты изучения жизнеспособности свидетельствовали, что при глубинном культивировании в электромагнитном поле с использованием иммобилизованного инокулята на магнитном носителе, показатель живых микробных клеток в вакцине достигал не менее (55,4+5,8)%, в то время как в контрольных образцах - не более (30+5)%. Что касается термостабильности, то экспериментальные образцы, полученные из иммобилизованного инокулята, обладали наибольшей устойчивостью к действию неблагоприятной температуры (37 0С)- 19,7 суток; у коммерческой вакцины, содержащей 8х1010 м.к. в объеме 2 мл из этой же биомассы термостабильность была наименьшей (16 сут). Однако все они вполне соответствовали требованиям НД, включая и иммуногенность.
Таким образом, анализ полученных данных показывает, что и в условиях глубинного культивирования при всех его описанных разновидностях при одинаковых исходных моментах биотехнологии вакцины (выращивание, высушивание, хранение) концентрация микробных клеток 1х1010 в объеме 1 мл не сказывается на качестве готового образца в условиях получения биомассы вакцинного штамма методом глубинного выращивании препарата, а по термостабильности даже превышает коммерческие.
Проведен сравнительный анализ стоимости и экономических потерь при подкожной иммунизации небольших коллективов, состоящих из 5, 10 и 20 человек, коммерческой вакциной серии 7-04 и экспериментально-производственной 1-5 серий. При применении экспериментально-производственных серий вакцины для подкожной иммунизации небольших коллективов (когда невозможно создать непрерывную цепочку прививаемых) очевидной становится экономическая и эргономическая выгоды, доказывающие преимущества использования вакцины чумной со сниженным количеством человеко-доз в ампуле для небольших коллективов. Снижение энергетических затрат в сравнении с коммерческим препаратом достигается на этапе лиофилизации, осуществляемой за 18 часов вместо 28 часов, однако, при производстве вакцины чумной живой сухой со сниженным количеством человеко-доз в ампуле увеличивается расход ампул и среды высушивания.
Вышеизложенное свидетельствует о соответствии вакцины чумной живой сухой с уменьшенным количеством человеко-доз в ампуле всем требованиям, предъявляемым к данному препарату, который может быть использован для планового практического применения, дополняя арсенал профилактических препаратов против чумы.

Литература

1. А.с. 2215033 Россия, опубл. 27.10.2003, Бюл. №30. RU Способ получения концентрата микробных клеток в производстве чумных вакцин / Коваленко В.Н., Асяев А.А., Черкасов Н.А., Ежов А.В., Багин С.В., Хонин А.З., Мохов Д.А.
2. А.с. 2241033 Россия, опубл. 27.11.2004, Бюл.№33. RU Питательная среда для накопления биомассы вакцинного штамма чумного микроба / Смирнова Е.Б., Катунина Л.С., Старцева О.Л., Смирнов С.Е., Головнева С.И., Борздова И.Ю., Борздов А.А.
3. А.с. 2245362 Россия, опубл. 27.01.2005, Бюл. №3. RU Питательная среда для культивирования вакцинного штамма чумного микроба / Смирнова Е.Б., Катунина Л.С., Старцева О.Л., Смирнов С.Е., Головнева С.И.
4. Авдеева Н.Г., Дятлов И.А., Еремин С.А. Разработка технологии производства дрожжевых аутолизатов как основы конструирования питательных сред для чумного микроба и холерного вибриона.- Деп. в ВИНИТИ 10.04.00.- № 925-В00. - Саратов, 2000.- 17 с.
5. Ада Г., Рамсей А. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ. - М: Медици¬на, 2002. - 344 с.
6. Алексеева Н.Ю. Конструирование вакцин нового поколения против сальмонеллезов и чумы на основе структурного объединения антигенов и синтетических полиэлектролитов : Дисс. ... д-ра биол. наук.- Москва, 1997. - 393 с.
7. Анисимов А.П., Никифоров А.К., Еремин С.А., Дроздов И.Г. Конструирование штамма YERSINIA PESTIS с повышенной протективностью // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1995.- №11. - С.532-534
8. Анисимова Т.И., Дроздовская Ф.К., Скачек А.Б., Глушко Л.И., Печникова И.В., Тинкер А.И.. Влияние стабилизаторов и условий хранения на функциональное состояние клеток в чумной живой вакцине // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1978. - Вып. 1 (59). - С. 55 - 58.
9. Анисимова Т.И., Свинцова Е.М., Печникова И.В., Тинкер А.И., Красикова М.А., Щупаев В.В. Сравнительное изучение жизнеспособности и иммуногенности чумной вакцины в зависимости от сред высушивания и сроков хранения // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1970. - Вып 3(13). - С. 106 - 113.
10. Апарин Г.П., Вершинина Т.И. Методические рекомендации по определению степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба для белых мышей. - Иркутск, 1984.-31 с.
11. Апарин Г.П., Голубинский Е.П. Микробиология чумы: Руководство.- Иркутстк: Изд-во Иркутсткогго университета, 1989.- 89 с.
12. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения // Биол. науки.- 1983.- № 4 (232). - С. 93 - 105.
13. Асеева Л.Е., Лопатина Н.В., Бурша О.С. Биохимические подходы к отбору иммуногенных вариантов вакцинных штаммов чумного микроба // Био-технология.- 1994. - №11-12.- С.6-8.
14. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медиц. вузов / Под. ред. Воробьева А.А., Быкова А.С.- М.: Медиц. информационное агенство, 2003. - 236 с.: ил.
15. Аубакиров С.А. О состоянии и перспективе специфической профилактики чумы // Иммунол. и специф. профилакт. особо опасных инф. - Саратов, 1993.-С. 139.
16. Ахапкина И.Г., Блинкова Л.П. Питательные среды как искусственная сре¬да роста и развития микроорганизмов // ЖМЭИ.- 2001.- № 6.- С. 99.
17. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. -180 с.
18. Балинер Л.М. Разработка биолюминесцентного метода определения количества живых бактерий в лиофилизированных вакцинах : Дис. ... канд. биол. наук. - Москва, 2003. - 88 с.
19. Бахрах Е.Э., Вейнблат В.И., Тараненко Т.М,, Дальвадянц С.М., Гольдфарб Л.М. Методы выделения и очистки соматических антигенов чумных бактерий // Профилактики особо опасных инфекций. Эпизоотология, микро-биология и специфическая профилактика чумы. Вып. 1. - Саратов, 1976. - С. 131-139.
20. Бахрах Е.Э., Мартенс Л.А., Соколова Н.М., Обухова З.А. Режим кислотного гидролизата казеина, обеспечивающий получение сред, пригодных для выращивания чумного микроба // Уч. зап. Дагест. н.- и. ин-та пит. сред.- 1964.- Вып.4.- С. 105-120.
21. Бахрах Е.Э., Обухова З.А., Маслова О.П. Усовершенствование технологии приготовления питательных сред для выращивания чумного микроба. Со- общ.1. О режиме гидролиза основных растворов Хоттингера // Тр. ин-та «Микроб», 1960.- Вып. 4.- С. 514-518.
22. Бахрах Е.Э., Тараненко Т.М., Гольдфарб Л.М., Земцова И.Н., Классовский Л.Н., Кондрашин Ю.И., Малинина З.Е., Степанов В.М., Андреева И.П. Особенности строения соматических антигенов чумных бактерий // Пробл. особо опасных инфекций. Генетика, микробиол., патоморфол. - Саратов, 1977. - Вып. 4(56). - С.70-71.
23. Беккер М.Е., Дамберг Б.Э., Рапопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов. - Рига, 1981.
24. Белоус А.М., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении // Наукова думка. - Киев, 1982. - 400 с.
25. Бельская Н.А. Изучение некоторых физико-химических свойств водорастворимых белков чумных бактерий: Автореф. дис. . канд. мед. наук.- Са-ратов. - 1975. - 17 с.
26. Бланков Б.И., Клебанов Д.А. Применение лиофилизации в микробиологии. // Медгиз, М, 1961.- С.209-211.
27 .Богаутдинов З.Ф., Балинер Л.М., Фрунджян В.Г. Методические рекомендации по биолюминесцентному определению жизнеспособности бактерий в лиофилизированных вакцинах. - Москва, 2002. -4 с.
28. Бондаренко А.И. Разработка электронно-микроскопического способа количественного определения поврежденных клеток чумной вакцины ЕВ : Автореф. дис. . канд. мед наук. - Ставрополь, 1995. - 21 с.
29. _Бондаренко А.И., Тинкер А.И. Разработка электронномикроскопического теста количественного определения поврежденных бактериальных клеток. - Деп. ВИНИТИ 07.05.1991. - № 3228-В91. - 16 с.
30. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология./ Учебник,3-е изд.- Москва, 2002. -736 с.
31. Брагинская В.П., Соколова А.Ф. Активная иммунизация и профилактика поствакцинальных осложнений у детей.- М., 1977.
32. Будыка Д.А. (Руководитель) Оптимизация температурного режима выращивания бактериальной массы в технологии производства чумной вакцины: Отчет о НИР (закл.) / СтавНИПЧИ. -1999.- 29 с.
33. Будыка Д.А. Научно-методические основы совершенствования живой чумной вакцины : Дис. . д-ра мед.наук. - Ставрополь, 2002.- 279 с.
34. Будыка Д.А., Васильева А.А. Пути совершенствования биотехнологии изготовления живой чумной вакцины // Сб. научн. работ «Актуальные проблемы медицины». - Томск, 2004. - С.312.
35. Будыка Д.А., Тинкер А.И., Бондаренко А.И. Экспериментально-теоретическое обоснование для выпуска чумной вакцины со сниженным количеством человекодоз. - Деп. в ВИНИТИ 15.08.00, № 2249-В00.- Ставрополь, 2000.- 8 с.
36. Будыка Д.А., Тинкер А.И., Иванова Г.Ф., Гюлушанян К.С., Бондаренко А.И. Стабилизация свойств маточной культуры эталонного вакцинного штамма ЕВ в биотехнологии чумной живой вакцины.- Деп. в ВИНИТИ 18.07.00, № 1987-В00.-Ставрополь, 2000 - 12 с.
37. Васильева А.А. Анализ некоторых показателей биотехнологии изготовления живой чумной вакцины и экспериментально-теоретические аспекты повышения ее качества // Сб. научн. работ «Актуальные проблемы меди-цины». - Томск, 2004. - С.312.
38. Васильева З.В., Трофименко Н.З., Липаева Л.С., Тимофеева Л.А., Головачева В.Я. Сухая дрожжевая питательная среда для диагностики чумного микроба // Проблемы природной очаговости чумы: Тез. докл. к 4 советско- монгольской конф. специалистов противочумных учреждений.- 1980. -ч.3. - С. 60 - 61.
39. Вейнблат В.И. Аллергенные свойства липополисахарида основного соматического антигена и капсульного антигена чумного микроба // Пробл. особо опасных инф. - 1977. - №4, - С.20-23.
40. Вейнблат В.И., Кузьмиченко И.А. К вопросу о механизме накопления и выделения чумным микробом капсульного антигена (роль клеточной структуры) // Журн. микробиол. - 1972. - №11.- С.102-106.
41. Вейнблат В.И., Титенко М.М., Веренков М.С., Щербаков А.А., Киреев М.Н. Видоспецифический поверхностно-соматический антиген возбудителя чумы // Молекул.биол., генетика и иммунология возбудителей особо опасных инфекций : Тез. Докл, представл.на Всесозз.науч.конф. по акту¬альным вопросам молекулярной биологии, генетики и иммунологии возбудителей особо опасных инфекций (Ростов н/Д, 15-17 февр.1984).- Рос¬тов н/Д, 1984. - С.94-96.
42. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и сани-тарная микробиология.- М.: Академия, 2003. - 464 с.
43. Воробьев А.А., Черкасский Б.Л., Степанов А.В., Кюрегян А.А., Федоров Ю.М. Актуальные проблемы борьбы с особо опасными инфекциями// Особо опасные инфекционные заболевания: эпидемиология, экспресс- диагностика и профилактика: Доклады Междунар. симпозиума 16-20 июня, Киров.- Киров,1997.- С. 243-257.
44. Гладус М.А. Биологическая активность сухих бактерийных анатоксинов при различных условиях хранения. Влияние величины остаточной влажности на стабильность биологических свойств. // Вакцины и сыворотки. Материалы по производству. - М., 1994. - В.22. - С. 119-121.
45. Гончарова М.Н. Некоторые аспекты сравнительного изучения чумных
вакцин : Автореф. дис. . канд. биол. наук. - Саратов, 1981. - 22 с.
46. Гончарова М.Н., Шпилевая Э.Г. Использование тиомочевиновой среды высушивания для стабилизации некоторых свойств чумной вакцины //Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез. докл. 4 краевой науч.-практ. конф. по природной очаговости, эпидемиол. и профилакт. особо опасных инфекционных болезней (20 - 22 дек. 1978 г.). - Ставрополь, 1978. - С. 289 - 290.
47. Государственная Фармакопея СССР X. - М: Медицина.- 1968.- 1080 с.: Определение на пирогенность.- С. 953-954.
48. Гремякова Т.А., Анисимов А.П., Захарова Н.М. Взаимосвязь способности к экспрессии различных серовариантов капсульного антигена Yersinia pes- tis со степенью редуцированности липополисахарида бактериальных клеток // Журн. микробиол.- 1995.- №1.- С. 3-6.
49. Гремякова Т.А., Степаншина В.Н., Шулюпин О.К., Негрий В.Ф., Мицевич Е.В. Экспрессия основных антигенов и ростовые свойства клеток Yersinia pestis в средах различного состава при 37 °С // ЖМЭИ.- 1993.- № 1.- С. 16-20.
50. Гусева Н.П. Липосомальные формы иммуногенов чумного микроба: Дис..канд.биол.наук.- Саратов, 1995.- 142 с.
51. Гюлушанян К. С. Использование питательной среды на основе кукурузного экстракта в производстве чумной вакцины ЕВ: Дис. . канд. биол. наук.- Ставрополь, 1994. - 148 с.
52. Гюлушанян К.С., Угримов С.А., Майский В.Г., Воропаева Л.П. Возможность использования аминопептида при приготовлении комбинированного агара на основе кукурузного экстракта для производства чумной вакцины // Актуальные вопросы эпидемиологии, профилактики и диагностики особо опасных инфекций: Тез. докл. итог. науч. конф. (21 - 22 дек. 1989).
- Ставрополь, 1989. - Ч. 1. - С. 77 - 80.
53. Гюсепенко А.А., Шеголев С.Ю., Шендеров Б.А. и др. Спектротурбидиметрический метод определения быстрой оценки чувствительности микроорганизмов к действию антибиотиков. // Антибиотики, 1985, -Т.30, -№3, -С. 208-212.
54. Дальвадянц С.М. Химическая чумная вакцина: конструирование, экспериментальное и клиническое обоснование применения для ревакцинации людей : Автореф. дис.. д-ра мед. наук. - Саратов, 1990.
55. Дальвадянц С.М., Филиппов А.Ф.. Белородов Р.А., Огарев Н.Н. Эффективность сочетанной иммунизации морских свинок против чумы препара-тами фракции 1 и основного соматического антигена // Пробл. особо опасных инф. - 1977.-Вып. 3 (55).- С.105-112.
56. Данилова М.В., Надирова И.М. Жизнеспособность лиофилизированных бактерий в зависимости от температуры охлаждения. // Изв. АН СССР Сер. биол.- 1981.- №2.- С. 307-309.
57. Данилова М.В., Надирова И.М. Зависимость жизнеспособности бактерий после лиофилизации и при длительном хранении от величины остаточной влажности. // Известия АН СССР, Сер. биол. - 1980. - №3. -С.449-451.
58. Данилова М.В., Надирова И.М., Елицева Г.В. Зависимость жизнеспособности бактерий после лиофилизации и при длительном хранении от величины остаточной влажности. // Известия АН СССР, Сер. биол. - 1980. - №3. - С.449-454.
59. Данилова М.В., Надирова И.М., Кудрявцев В.И. Лиофилизация бактерий // Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов: Сборник. науч. тр. - Наука, 1967. - С. 119 - 135.
60. Долинов К.Е. Основы технологии сухих биопрепаратов // М.: Медицина, 1969. - 232с.
61. Домарадский И.В., Башева В.С., Сидорова Н.К. Культивирование чумного микроба на средах известного состава // Изв. Иркутского гос. и.-и. противоч. ин-та Сибири и Дальнего Востока.- Улан-Удэ, 1958.- Т. 18.- С. 55- 63.
62. Домарадский И.В., Голубинский Е.П., Лебедева С.А., Сучков Ю.Г. Био-химия и генетика возбудителей чумы. //М., Медицина, 1974. - 165с.
63. Дорохин В.В. Изучение свойств биомассы вакцинного штамма ЕВ чумно¬го микроба, выращенного посредством многократных пересевов на плот¬ной питательной среде в АКМ-Ш : Дис. . канд. мед наук. - Саратов, 1980. - 191 с.
64. Дорохин В.В., Филиппов А.Ф. Изучение чумной живой сухой вакцины, приготовленной из культур штамма ЕВ, многократно пересеваемых в АКМ-Ш // Тез. докл. на Всесоюз. конф. "Иммунология и иммунопрофилактика чумы и холеры". - Саратов, 1980а. - С. 134 - 135.
65. Дорохин В.В., Филиппов А.Ф. Протективная активность сывороток кроликов, иммунизированных чумной живой вакциной, приготовленной из культур штамма ЕВ, выращенных многократным пассажным способом // Мед. реф. журн., 1980б, разд. 3. - № 7. - С. 16.
66. Дорохин В.В., Филиппов А.Ф., Сергеева Г.М. Изучение стрессорного действия на морских свинках чумной живой сухой вакцины из культур штамма ЕВ, выращенных многократным пассажным способом на твердых питательных средах // Специфическая профилактика чумы и холеры. - Са-ратов, 1980. - С. 51 - 54.
67. Дроздов И.Г., Анисимов А.П. (Руководители): Разработка экспериментальных чумных рекомбинантных вакцинных штаммов для перорального способа аппликации: Отчет о НИР (заключит.) / Фед. гос. учреждение науки РосНИПЧИ «Микроб».- 2001 г.- 52 с.- ГР 01970000639
68. Дятлов И.А. Разработка новых технологий экспериментального и производственного культивирования чумного микроба : Автореф дис. . д-ра мед. наук. - Саратов, 1992. - 42 с.
69. Дятлов И.А. (Руководитель) Изучение биофизических свойств и роли в иммунопатогенезе антигенных компонентов чумного, туляремийного и сибиреязвенного микробов, экспрессируемых на клеточную поверхность : Отчет о НИР (закл.) / РосНИПЧИ «Микроб».- 2001 г.- 100 с. - ГР 01970000640
70. Дятлов И.А., Волох О.А. Получение S-слоя чумного микроба и возможности его применения // Биотехнология.- 2004.- № 1- С. 20-25.
71. Дятлов И.А., Смирнова Н.И. (Руководители) Изучение биокинетических особенностей условий культивирования возбудителей чумы и холеры, перспективных для внедрения в производство МИБП : Отчет о НИР (закл.) / РосНИПЧИ «Микроб».- 2004. - 54 с.- ГР 01200010635.
72. Ефременко В.И. Молекулярная организация и функции белковых токсинов - возбудителей холеры и чумы // ЖМЭИ.- 1983. - №11. - С.7-13.
73. Жемчугов В.Е., Филиппов А.Ф. Некоторые данные об иммуногенности культур чумных микробов, выращенных в двухфазной системе. // Саратов, 1982. - 8 с. Деп. в ВНИИМИ МЗ СССР № 5469 - 82. - Мед. реф. журн., 1982. - 111, № 12. - С. 81 - 82.
74.Звягин И.В., Хорьков И.А., Товарик Э.Ф., Нежута А.А. и др. // Методич. рекомендации по разработке режимов замораживания-высушивания биологических препаратов.- М., 1981.- 34 с.
75.Земсков В.М. Неспецифические иммуномодуляторы // Успехи современной биологии.- 1991.- №5.- С. 707-721.
76. Иванов М.М., Малахова Т.И., Складчиков Р.В., Климанов А.И. Значение остаточной влажности для сохранения иммуногенных свойств бруцеллез¬ной вакцины. // Труды ГНКИ ветпрепаратов. - 1974. - Т.20. - С.156-161.
77. Иванова Г.Ф., Будыка Д.А., Тинкер А.И., Шпилевая Э.Г., Гюлушанян К.С., Юрлова Е.И., Фомина Г.Д., Дурченкова И.Б. Изучение жизнеспособности микробных клеток штамма ЕВ в динамике роста в бульоне при температуре культивирования (21±1)°С и (27±1)°С // Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария: Матер. юбил. науч. конф., посвящ., 70-летию НИИ микробиологии МО РФ (30 ноября-1декабря, 1998 г.).- Киров, 1998.- С. 299.
78. Исупов И.В., Бугоркова С.А., Кутырев В.В. Патоморфологические аспекты доклинических испытаний различных вакцин против чумы, сибирской язвы и холеры.- Саратов, 2004.-180 с.
79. Кадетов В.В. Криоконсервирование и лиофилизация холерных фагов : Автореф. дис. . канд. биол. наук. - Саратов, 1994. - 24 с.
80. Канчурин А.Х. Характеристика аллергических реакций организма на введение вакцинных препаратов // В кн.: Критерии оценки иммунологиче¬ской эффективности и безопасности бактерийных вакцин. - М.: Медици¬на, 1976.- С.38-39.
81. Карташева Л.Д. (Руководитель) Разработка приемов управления ростом и биосинтетическими процессами периодических агаровых культур чумного микроба: Отчет о НИР (закл.) / РПЧИ.- 2000 г. - 86 с.- ГРО 01950003540.
82. Кветков В.П. Методические рекомендации по определению остаточной влажности в лиофилизированных препаратах. - Омск, 1972.
83. Кокушкин А.М. Социальные и биологические аспекты эпидемиологии чумы: Автореф. дис. . д-ра мед.наук.- Саратов, 1995. - 46 с.
84. Комоско Г.В., Ежов А.В., Мохов Д.А., Тетерин В.В. Оптимизация прописи питательной среды для глубинного культивирования вакцинного штамма ЕВР2 Y. pestis // Сб. науч. трудов, посвящ. 75-летию НИИ микробиологии МО РФ.- Киров, 2003.- С. 149-150.
85. Комоско Г.В., Рогожин А.В., Маслов С.А., Бирюков В.В., Черкасов Н.А., Ежов А.В. Разработка технологии производства сухих питательных сред, полученных методом распылительной сушки, пригодных для выращивания вакцинного штамма ЕВ чумного микроба // Матер. науч.- практ. конф., посвящ. 100-летию образования противочумной службы России (16-18 сент.1997 г.).- Т.2.- Саратов, 1997.- С. 263.
86. Кондрашин Ю.И., Щербаков А.А., Видяева Н.А. Влияние температуры выращивания на состав внешних и внутренних мембран // Регуляция биохимических процессов у микроорганизмов. Материалы симпозиума. Пущино, 1978. - Пущино, 1979. - С. 110 - 111.
87. Кондрашкова Т.В., Кузнецова Л.И.., Узенцов С.А., Курилова Л.С. Казеи-новая среда для выращивания чумного микроба // Профилактика особо опасных инфекций. Эпизоотол., микробиол. и специфическая профилактика чумы. - Саратов, 1976. - Вып. 1. - С. 115 - 117.
88. Кондрашкова Т.В., Никитин Г.А. Производственное приготовление кислотных гидролизатов белковых субстратов с использованием ионообменной смолы // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1969. - Вып. 2 (6). - С. 129 - 133.
89. Коробов В.И., Копырзов В.Н. Выделение и очистка V и W-антигенов чумного микроба методами ионообменной и гель-проникающей хроматографии // Иммунохимия и лабораторная диагностика особо опасных инфекций: Тр. противочумн. учр. СССР.- Саратов, 1985.- С.31-35.
90. Коробкова Е.И. Живая противочумная вакцина.- М., 1956. - 208 с.
91. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.- Санкт-Петербург, 2002.- 591 С.
92. Кравцов А.Н., Тынянова В.И., Зюзина В.И. и др. Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций: Тез. докл. конф. - Волгоград, 1992. - С.104.
93. Красикова М.А. Влияние длительного хранения на основные свойства микробов в чумной вакцине ЕВ, приготовленной с различными средами высушивания // Материалы 6 науч. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана. - Вып. I. - Алма-Ата, 1969. - С. 47 - 49.
94. Криваченко К.Б. Биосинтез некоторых антигенов при лимитировании рос¬та Yersinia pestis // ЖМЭИ.- 2000.- №1. - С.86-88.
95. Криваченко К.Б., Мазрухо А.Б., Черепахина И.Я., Фецайлова О.П., Ка-минский Д.И., Рожков К.К., Булахова О.Г. Изучение возможности использования питательной среды ЧДС-37 для культивирования чумного микроба при 37 °С // Природно-очаговые особо опасные инфекции на юге России, их профилактика и лаб. диагностика.- Астрахань, 2001.- С.240.
96. Кузьмиченко И.А., Наумов А.В., Борисова Н.П., Коровкин С.А. Участие углеводов в регуляции биосинтеза капсульного антигена чумного микроба. // Пробл. биотехн., микробиол. и иммунол. особо оп. инф. - Саратов, 1984. - С.26-30.
97. Лешкович Л.И. Длительность противочумного иммунитета у морских свинок, привитых химическими, убитой и живой вакцинами // Пробл. осо¬бо опасных инф.- 1975.- Вып. 1 (41).- С. 129-130.
98. Лопатина Н.В., Наталич Л.А. Применение метода «ускоренного хранения» в лиофилизации живой чумной вакцины // Современные достижения био-технологии: Мат. Первой конференции Северо-Кавказского региона. - Ставрополь, 1995. - С. 103-104.
99. Лопатина Н.В., Терентьев А.Н., Наталич Л.А., Шермет О.В. Питательная среда для культивирования вакцинного штамма Y. pestis - 76 // Реф. мед. журн. микробиол. сан. и мед. - 1991.- 6 Ц393П.
100. Лопатина Н.В., Янгулов Ш.У., Михайлова Н.Н., Наталич Л.А. Оптимизация защитной среды для лиофилизации культур вакцинного штамма EV чумного микроба // Пробл. особо опас. инфекций.- 1994. - №4. - С. 122¬128.
101. Лухнова Л.Ю., Сержанов О.С., Дубянский В.М., Нмавар Р.А., Айким- баев А.М., Сомсиков В.М., Шейкин А.О. О характере взаимосвязи солнечной активности и жизнеспособности вакцины чумной живой сухой ЕВ на протяжении двух солнечных циклов (1971-1995). // Тез. Междунар. конгр. «Слаб. и Сверхслаб. поля и излуч. в биол. и мед.» (16-19 июня 1997).- Санкт-Петербург,1997 - С.261-262.
102. Молдаван И.А. Экспериментальное обоснование преимуществ сочетанной специфической и экстренной профилактики чумы: Автореф.
дис. . канд.мед.наук.- Ростов-наДону, 2005.- 22 с.
103. Медицинская микробиология / Учебник. Гл. редакторы В.И. Покровский, О.К. Поздеев.- Москва, 1998. - 1200 с.
104. Методические рекомендации по глубинному культивированию вакцинного штамма чумного микроба с использованием магнитоуправляемых иммобилизованных систем / Тюменцева И.С., Жарникова И.В., Жданова Е.В., Афанасьев Е.Н., Грядских Д.А., Иванова Г.Ф., Васильева А.А. - Ставрополь, 2004.-10 с.
105. Милютин В.Н., Касаткин Н.Ф., Елисова Е.Б. Дрожевкина М.С., Канчух А.А., Ованесова Н.Г., Кириллова Н.Л., Уралева В.С., Сагатовский В.Н., Винидченко Н.Н., Орлова Г.М., Копылов В.А., Родионова А.В., Шеремет О.В. Новая питательная среда из углеводородных дрожжей для выращивания патогенных микробов // Проблемы особо опасных инфекций. Иммунология.- Саратов, 1975.- С. 30-34.
106. Мишанькин Б.Н., Лопатина Н.В. Противочумная вакцина: прошлое, настоящее, будущее // Биотехнол.- 1996.- №4.- С.3-9.
107. Муравьева Н.К., Крайнова А.Н., Маслова О.П. Применение казеиновых сред в вакцинном производстве // Особо опасные и природноочаговые инфекции. Сб. науч. работ противочумных учреждений - М., 1962. - С. 207 - 211.
108. Наркевич М.И., Онищенко Г.Г., Наумов А.В. и др. Роль противочумной службы в предупреждении и ликвидации эпидемических проявлений инфекционных заболеваний в стране // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1991. - №10. - С.22-25.
109. Наумов А.В. (Руководитель) Выделение и структурно-функциональное изучение антигенных компонентов и факторов патогенности возбудителей чумы и холеры и конструирование на их основе новых профилактических и диагностических препаратов: Отчет о НИР (закл.) / РосНИПЧИ «Микроб».- 1999 г.- 131 с.-ГР 01910022413
110. Наумов А.В., Ледванов М.Ю., Дроздов И.Г. Иммунология чумы, - Саратов, 1992.
111. Никитин Е.В., Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов. - М.: Колос, 1971.
112. Николаев И.И., Чебрикова Е.В., Филиппов А.Ф., Алтухов М.В., Бахрах Е.Э. Опыт применения бульона из кислотного гидролизата казеина в производстве сухой живой чумной вакцины // Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1969.- Т.1.- С. 175-181.
113. Николаев Н.И. Чума. - М.: Медицина, 1968. - 239 с.
114. Носков А.Н. (Руководитель) Изучение молекулярно-биологических ос-нов вирулентности и иммуногенности возбудителей эпидемически значимых бактериальных инфекций человека и животных: Отчет о НИР (закл.) / Гос.науч.центр прикладной микробиологии. - 2001 г.- 65 с. - ГР 01200117848
115. Онищенко Г.Г. , Федоров Ю.М., Тихонов Н.Г., Липницкий А.В., Алексеев В.В. Противодействие биотерроризму как новая проблема эпидемиологии // Эпидемиология и инфекц. болезни.- 2003.- №2.- С.4-6
116. Опарин Ю.Г. Подходы к определению оптимального режима лиофилизации биопрепаратов. // Биотехнология.-1997. - №7-8.- С.69-74.
117. Опарин Ю.Г., Богаутдинов З.Ф., Пивоварова И.Р. и др. Совершенствование технологии лиофильного высушивания производственного штамма Salmonella typhimurium. // Биотехнология.- 1996.- №9.- С.29-31.
118. Петров Р.В., Хаитов Р.М. Искусственные антигены и вакцины. - М., Медицина, 1986. - 287 с.
119. Печников Н.Е. Оптимизация режимов лиофильного высушивания чумной живой вакцины ЕВ : Дис. . канд. мед. наук. - Ставрополь, 1991 - 157с.
120. Печникова И.В. Влияние состава среды высушивания на выживаемость микробов в сухой живой противочумной вакцине // Микробиология, иммунология особо опасных инфекций. - Саратов, 1964. - С. 283 - 287.
121. Печникова И.В. Влияние состава среды высушивания на термоустойчивость чумной живой сухой вакцины ЕВ в процессе длительного хранения: Автореф. дис.. канд. мед. наук. - Саратов, 1967. - 19 с.
122. Печникова И.В. Характеристика чумной живой вакцины ЕВ, приготовленной на молибденовой и глютаминовой средах высушивания, после длительного хранения при комнатной температуре // Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез. докл. 3 краевой науч.-практ. конф. противочумных учреждений. Кавказа по природной очаговости, эпидемиол. и профилакт. особо опасных инфекций (14 - 16 мая 1974 г.). - Вып. 1. - Ставрополь, 1974. - С. 229 - 231.
123. Печникова И.В., Орлова А.Н. Среды высушивания, способствующие сохранению сухой живой противочумной вакцины ЕВ при неблагоприятной температуре хранения // Материалы межинститут. науч. конф. памяти Л.А. Тарасевича. - Москва, 1966. - С. 235 - 236.
124. Плешакова Т.В. Лиофилизация и реактивация возбудителя мелиоидоза: Дис. ... канд. мед. наук. - Волгоград, 1992. - 184 с.
125. Приказ № 1179 от 10 октября 1983 г. "Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения". - М., 1983.
126. Приказ Министра здравоохранения РФ №7, 2004
127. Природные очаги чумы Кавказа, Прикаспия, Средней Азии и Сибири / Под. ред. Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева. - ОАО «Издательство «Медицина», 2004. - 192 с.: ил.
128. Пучков Е.О., Говорунов И.Г. Общая характеристика методов хранения бактериальных культур. // Проблемы криоконсервации бактериальных культур. Консервация генетических ресурсов. - Пущино, 1983.- 23 с.
129. Пушкарь Н.С., Белоус А.М. Введение в криобиологию.- К.: Наукова думка, 1975. - С.115-122.
130. Пушкарь Н.С., Белоус А.М., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования - К.: Наукова думка, 1984. - 264 с.
131. Ракитина Е. Л. Оптимизация доз чумной вакцины ЕВ по количеству живых микробных клеток: // Дис. . канд. мед. наук. - Ставрополь, 1988. - 194с.
132. Регламент производства "Вакцина чумная живая сухая" № 1542-04.
133. Рыбкин В.С., Фарбер С.М. (Руководители) Изучение возможности использования актопротекторов для повышения эффективности специфической профилактики чумы: Отчет о НИР (закл.) / ВолгНИПЧИ.-1998 г.- 35 с.- ГР 01950001338.
134. Салтыков Р.А., Анисимова Т.И., Тинкер А.И., Свинцова Е.М., Прядки¬на В.И., Верховцева Г.Н., Печникова И.В., Лобанова И.В. Стабильность сухой живой вакцины в глютаминовой среде высушивания при различных условиях ее хранения // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1964. - № 4. - С. 130 - 134.
135. Свиридов Л. П., Степанов А. В. О пролонгировании эффекта иммуностимуляторов как средств повышения устойчивости организма к возбудителям инфекции // Антибиотики и химиотерапия.- 1990.- Т.35, №5.- С.32¬35.
136. Сидякина Т.М. Консервация микроорганизмов. // Сер. Консервация генетических ресурсов.- Пущино: Изд. ОНТВ НЦ БИ АН СССР.- 1985.- 63 с.
137. Смирнов Г.Б. (Руководитель) Молекулярная генетика иерсиний. Изучение аспектов профилактики иерсиниозов: Отчет о НИР (закл.) / НИИ ЭМ РАМН.- 2000 г.- 11 с. - ГР 01960007454
138. Смирнова Е. Б. Биохимический анализ мясного гидролизата, используемый в приготовлении микробиологических сред // Тез. докл. Х итого¬вой науч. конф. молодых ученых и студентов.- Ставрополь, 2002.- С. 413¬414.
139. Старцева О.Л., Катунина Л.С., Смирнова Е.Б., Головнева С.И. Разработка технологии приготовления плотной питательной среды на основе ферментативного гидролизата сои (бобов) для роста чумного микроба // Разработки и стандартизация микробиологических питательных сред и тест-систем: Матер. 4-й Междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 50- летию НПО «Питательные среды» МЗ РФ (15-17 сент., 2003 г.).- Махачкала, 2003.- С. 36.
140. Старцева О.Л., Катунина Л.С., Смирнова Е.Б., Головнева С.И. Экономический эффект применения соевых питательных основ // Разработки и стандартизация микробиологических питательных сред и тест-систем: Матер. 4-й Междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 50-летию НПО «Питательные среды» МЗ РФ (15-17 сент., 2003 г.).- Махачкала, 2003.- С. 41.
141. Степанов А.В., Старицин Н.А. Концепции мониторинга инфекций бактериальной природы и выбор проектов для сотрудничества // Особо опасные инфекционные заболевания: эпидемиология, экспресс-диагностика и профилактика: Доклады Междунар. симпозиума. (16-20 июня, 1997)- Ки-ров, 1997.- С. 264-271.
142. Степаншина В.Н., Гремякова Т.А., Анисимов А.П., Потапов В.Д. Физико-химическая и биологическая характеристика рН 6 - антигена Yersinia pestis, выделенного иммуносорбционным методом // ЖМЭИ. - 1993. -№3.- С.12-17.
143. Сулейманов Б.М. Трансмиссия возбудителя чумы «неблокированны- ми» блохами : Автореф. дис. ... д-ра мед.наук. - Алматы, 1995. - 48 с.
144. Султанов Г.В., Козлов М.П. Чума: микробиология, патогенез, диагностика.- Махачкала: Дагкнигоиздат, 1995.- 146 с.
145. Таран Т.В. Биотехнология получения лекарственных и иммуногенных липосомальных композиций, используемых в лечении экспериментальных особо опасных инфекций и получения сырья для производства медицинских иммунобиологических препаратов: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.- Ставрополь, 2004.- 36 с.
146. Тараненко Т.М., Филиппов А.Ф., Жемчугов В.Е., Андреева И.П. Иммунохимическая и иммунобиологическая характеристика бифазных "культур" штамма ЕВ чумного микроба // Актуальные вопросы лабораторной диагностики и биохимии возбудителей чумы и холеры. - Саратов, 1984. - С. 47 - 53.
147. Тараненко Т.М., Вейнблат В.И. Современные представления о структуре О-соматического антигена чумного микроба // Иммунохимия и лабораторная диагностика особо опасных инфекций: Тр. противочумных учр. СССР. - Саратов, 1985. - С.10-17.
148. Терентьев А.Н., Зинченко А.В., Зинченко В.Д. Влияние некоторых криопротекторов на состояние воды в клетках Y. pestis 76 при замораживании-оттаивании // Проблемы криобиологии. - 1992. - № 3. - С. 27 - 30.
149. Терентьева Л.И., Апсатарова Р.А., Орел Л.Л., Алманиязова К.К. Влияние поверхностно-активных веществ на рост чумного микроба // Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии: Тез. конф. (29 - 30 мая 1990) - Махачкала, 1990. - Ч. 2 . - С. 17 - 18.
150. Тинкер А.И. Влияние сублимационного (лиофильного) высушивания на штамм ЕВ чумного микроба: Дис.. д-ра мед.наук.- Ставрополь, 1971.¬351 с.
151. Тинкер А.И., Будыка Д.А., Гребенюк А.В., Проскурина В.А., Саркисьян Н.А., Шпилевая Э.Г., Иванова Г.Ф., Гюлушанян К.С. Показатели качества отраслевого и стандартного образца чумной вакцины ЕВ в процессе длительного применения. - Деп. в ВИНИТИ 22.05.96.- №1627-В96.- Ставрополь, 1996. -15 с.
152. Тинкер А.И., Дудукалова Т.Н., Гончарова М.Н., Быкова З.А., Чернова Э.А., Верховцева Г.Н., Щапова В.Ф., Лечников И.В., Шпилевая Э.Г., Но-вицкая Г. Выживаемость микробов в производственных сериях чумной вакцины ЕВ, приготовленных на плотных и жидких питательных средах //Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1971. - Вып. 4 (20). - С. 71 - 76.
153. Печникова И.В., Тинкер А.И. Выживаемость микробов в живой сухой чумной вакцине ЕВ в зависимости от их оптической плотности до лиофилизации// Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1974. - Вып. 5(39). - С. 64-68.
154. Тинкер А.И., Печникова И.В. Пирогенные свойства чумной живой сухой вакцины ЕВ и К1, приготовленной на различных средах выращивания // Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез. научн.-практич. конф. по природной очаговости, эпидемиол. и профилактике особо опасных инфекц. болезней (20-22 декабря 1978 г.). -Ставрополь, 1978. -С.318-321
155. Трофимченко Н.З., Васильева З.И., Домарадский И.В., Перевалова Л.Г. Изменение среды при глубинном выращивании вакцинных штаммов чумного микроба // Тез. докл. конф. Иркутского противочум. ин-та Сибири и Дальнего Востока.- Улан-Удэ, 1958.- Вып. 3.- С. 138-140.
156. Тутов И.К., Ситьков В.И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов/ Учебное пособие для студентов высших учебных заведений. - Ставрополь, 1997.- 253 с.
157. Ульянова О. В. Влияние живых чумной и туляремийной вакцин на показатели пуринового обмена и перекисного окисления липидов у экспериментальных животных: Дис. . канд.мед.наук..- Саратов, 1999.-172 с.
158. Ураков Н.Н., Волков В.Я., Боровик Р.В. Функциональное состояние и механизмы повреждения микроорганизмов в процессе приготовления бактериальных препаратов // Биотехнология. - 1988. - Т. 4, № 4. - С. 420 - 432.
159. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях // М.: Медицина, 1975. - 296 с.
160. Файбич М.М. Стабилизация вакцинных препаратов в процессе высушивания и хранения // Успехи микробиологии. - М., Наука, 1983. - № 18. - С. 193 - 215.
161. Фатеева М.В., Никитина Т.Н. Изучений условий лиофилизации дрожжей с применением методов планирования эксперимента. // Микробиология.- 1976.- Т.45, №5.- С. 905-909.
162. Федорова В.А., Голова А.Б., Девдариани З.Л., Дроздов И.Г. Влияние условий культивирования на пролиферативную и антигенную активность штаммов Yersinia pestis с различным плазмидным составом // Природно-очаговые особо опасные инфекции на юге России, их профилактика и лабораторная диагностика: Сб. науч. трудов, посвящ. 100-летию Астраханской противочумной станции МЗ РФ.- Астрахань, 2001.- С. 165-167.
163. Фецайлова О.П., Мазрухо А.Б., Черепахина И.Я., Криваченко К.Б., Бурлакова О.С., Помухина О.И., Каминский Д.И., Балахнова В.В., Рожков К.К., Булахова О.Г. Использование среды ЧДС-37 для выделения чумного микроба // Актуал. аспекты природноочаговых болезней: Матер. межрегион. научно.-пркт. конф., посвящ. 80-летию Омского НИИПЧИ (16-17 окт., 2001).- Омск, 2001.- С. 169-170.
164. Филиппов А.Ф., Жемчугов В.Е. Многофазные питательные среды и перспективы их применения для выращивания чумного микроба // Мик-робиология и биохимия возбудителей особо опасных инфекций. - Саратов, 1982. - С. 36 - 41.
165. Филиппов А.Ф., Кондрашкова Т.В., Муравьева Н.К., Павлова Л.П., Огарев Н.Н. Свойства культур чумного микроба, выращенных на средах из аутолизатов рыбы // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1974. - Вып. 3 (37). - С. 62 - 66.
166. Филиппов А.Ф., Лискина И.В., Муравьева Н.К., Крайнова А.Н., Павлова Л.П. Изучение влияния рН среды на жизнеспособность и иммуногенность микробов в процессе сушки и длительного хранения чумной вакцины ЕВ // Производство бактерийных препаратов для профилактики и диагностики особо опасных инфекций. - Саратов, 1966. - С. 40 - 44.
167. Хазан М.А. Конструирование из непищевого сырья плотных питательных сред для диагностики и накопления бактериальной массы чумного микроба: Автореф. дис. . канд. биол. наук. - Саратов, 1987. - 24 с.
168. Хаитов Р.М., Пинегин Б.П. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения // Иммунология.- 2000.- №5.- С.4-7.
169. Чернова Э.А. Возможность оценки качества сухой живой чумной вакцины ЕВ в процессе хранения по количеству содержащегося в ней живых микробов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. - Ставрополь, 1967. - 20 с.
170. Чернова Э.А., Верховцева Г.Н., Саркисьян Н.А., Печникова И.В., Дмитриева В.И. Свойства живой сухой чумной вакцины ЕВ в зависимости от использованной среды высушивания и газовой среды в ампулах и флаконах // Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез. докл. 4 краевой науч.- практ. конф., по природной очаговости, эпидемиол. и профилакт. особо опасных инфекционных болезней (20 - 22 дек. 1978). - Ставрополь, 1978. - С. 332 - 335.
171. Шеремет О.В. Зависимость скорости роста и выхода бактериальной массы Y. pestis EB при 37 °С от концентрации некоторых питательных веществ // Диагностика и профилактика особо опасных инфекций. - Сара¬тов, 1983. - С. 48 - 53.
172. Шеремет О.В., Милютин В.Н., Терентьева А.И., Морозова Л.Н. Иммуногенность чумного микроба, выращенного на некоторых питательных средах при 28°С // Журн. микробиол. - 1987. - № 7. - С. 63 - 68.
173. Шиманек Н.Я., Мишанькин Б.Н. Влияние температуры культивирова¬ния на ферменты метаболизма сиаловых кислот у чумного микроба // Микробиологический журнал. - 1982. - Т. 44. - № 6. - С. 49 - 53.
174. Шмеркевич Д.Л. Иммуногенные свойства комбинированной вакцины из живых микробов и химических фракций чумного микроба : Автореф. дис.. канд. мед.наук. - Саратов, 1967.- 25 c.
175. Шмутер М.Ф., Красикова М.А., Липатова Е.С. Свойства чумной вакцины ЕВ - НИИЭГ и К-I, приготовленной на разных средах высушивания // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 1971. - №. 5. - С. 118 - 122.
176. Шпилевая Э.Г. Культивирование чумного микроба аппаратным способом на агаре из сухих кормовых дрожжей : Дис. . канд. биол. наук. - Ставрополь, 1983. - 220 с.
177. Шпилевая Э.Г., Тинкер А.И., Гончарова М.Н., Таран Т.В. Культивирование чумного микроба на средах из непищевого сырья в производственных условиях.- Деп в ВИНИТИ. 26.02.93. - № 478 В93. - Ставрополь, 1993. - 155 с.
178. Шустер Б.Ю., Малахов Ю.А., Кириллова В.В. Вакцина против сальмонеллеза водоплавающих птиц. // Новое в борьбе с болезнями птиц.- Ленинград, 1984.- С.24-26.
179. Aaby P., Bukh Y., Haff G., Lisse J.M., Smith A.Y. Humoral immunity in measles infection. A criyical factor.// Med. Hypotheses.- 1987. - V.23. - N3.- p.287-301.
180. Aaron R., Levi R. Synthetic recombinant vaccine induces anti-influenza long-term immunity and cross-strain protection // In: Novel strategies in the de¬sign and production of vaccines (Edited by S.Cohen and A.Shafferman), - Ple¬num Press, New York, 1996.-p.23-29.
181. Antheunisse J. et al. Viability of microorganisms after drying and storage. // Antonie van Leeuwenhoek, 1981.- V.47.- N6.- p. 539-545.
182. Ashwood-Smith M.J., Grant E. Mutations by freeze-drying. // Cryobiology.- 1976.- V.13.- N2.- p.206-213.
183. Beachy E.H., Seyer G.M., Dale J.B., Simpson W.A., Kang A.H. Type¬specific protective immunity evoked by synthetic peptide of Streptococcus pyogenes M protein. // Nature-1981. -Vol.292. - N.5822.- р.457-459.
184. Bernasconi C. Immunomodulatori nella practica clinica // Riv. emoter. ed immunohematol.- 1989.- Vol.36, №1.- P.7-11.
185. Bousfield I.J., Mackenzie A.R. Inactivation of bacteria by freeze-drying // In: Inhibition and inactivation of vegetative microbes.- Ed. by F.A. Skinner and W.B. Hugo. Acad. Press, N.Y.- 1976.- p. 329-344.
186. Bossi P., Bricaire F. La peste, acte possible de bioterrorisme // Presse Medi-cale.- Issue 17.- 17 May 2003.- р. 804-807.
187. Calcott P.H., Lee S.K., Mac Leod R.A. The effect of cooling and warming rates on the survival of a variety of bacteria. // Canad. J. Microbiology.- 1976.- V.22.- N1.- p.106-109.
188. Cavanaugh D.C., Elisberg B.L., Llewellyn C.H. et al. Plague immunization. I. Inderect evidence for the efficacy of plague vaccine. // J. Infect. Dis 1974. - 129 (appl): S37-S40
189. Cornelis G., Laroche Y., Balligand G., Sory M.P. Wauters G. Yersinia en- terocolitica, a primary model for bacterial invasiveness // Rev. Infect. Dis.- 1987.- Vol. 9