Тип работы:
Предмет:
Язык работы:


МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИНДИКАЦИЯ БИОПАТОГЕНОВ В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Работа №52762

Тип работы

Дипломные работы, ВКР

Предмет

экология и природопользование

Объем работы50
Год сдачи2017
Стоимость4780 руб.
ПУБЛИКУЕТСЯ ВПЕРВЫЕ
Просмотрено
310
Не подходит работа?

Узнай цену на написание


ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. Обзор литературы 6
1.1. Биопатогенное загрязнение водных объектов 6
1.2 Биопатогенное загрязнение почв 8
3 Биопатогены, обнаруживающиеся в организме кровососущих насекомых . 10
1.4 Индикация биопатогенного загрязнения объектов окружающей среды 11
ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 19
2.1 Материалы и методы исследования 19
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 24
3.1. Факторы передачи спорообразующих и аспорогенных биопатогенов 24
3.2. Определение консервативных и специфичных локусов для геноиндикации
возбудителей Vibrio cholerae, Bacillus anthracis и Tick-borne encephalitis 25
3.2.1. Выявление локуса для индикации Vibrio cholerae 25
3.2.2. Выявление локуса для индикации Bacillus anthracis 30
3.2.3. Выявления локуса для индикации Tick-borne encephalitis 32
3.3. Геноиндикация биопатогенов в абиотических и биотических объектах
окружающей среды 33
3.3.1. Отбор проб для индикации возбудителей Vibrio cholerae, Bacillus
anthracis и Tick-borne encephalitis 34
3.3.2. Выделение нуклеиновых кислот 37
3.3.3. Результаты исследования проб на наличие нуклеиновых кислот
биопатогенов методом ПЦР-РВ (ПЦР в режиме реального времени) 40
Заключение 43
Список использованной литературы 45


В нашей стране и во всем мире существует проблема природно-очаговых заболеваний, которые представляют серьезную проблему для здравоохранения в большинстве территорий Российской Федерации.
Природно-очаговые инфекции — особая группа болезней, имеющих эволюционно возникшие очаги в природе. Природный очаг — биотоп на территории конкретного географического ландшафта, заселённый животными, видовые или межвидовые различия которых обеспечивают циркуляцию возбудителя за счёт его передачи от одного животного другому, обычно через кровососущих членистоногих-переносчиков.
Природно-очаговые заболевания связаны не только с циркуляцией возбудителей в биотических компонентах (таких как грызуны, членистоногие), но и в абиотических - вода, почва. Заболевания природно-очаговыми инфекциями протекают в средних и тяжелых формах, вплоть до летальных (смертельных) исходов.
Наиболее актуальной является проблема природно-очаговых инфекций, такие как холера, сибирская язва, туляремия, брюшной тиф и другие (Коренберг, 2010). ф
Огромный ущерб здоровью людей и экономике государств причиняют заболевания, общие для человека и животных, среди которых одной из наиболее опасных является сибирская язва. На территории Российской Федерации имеется примерно 38 тыс. неблагополучных пунктов по сибирской язве, где находятся сибиреязвенные захоронения. В России ежегодно регистрируются случаи заболевания этой инфекцией людей, что доказывает о действие почвенных очагов.
По всему миру заболевания сибирской язвой широко распространено среди сельскохозяйственных животных чаще в развивающихся странах и редко встречается в развитых. Возбудитель сибирской язвы, Bacillus anthracis, является
одним из основных микроорганизмов, которые могут использоваться в целях
биотерроризма. B. anthracis привлёк огромное внимание общественности как
3
средство биологического террора в Соединённых Штатах Америки в 2001 г. (Бурма и др., 2014).
Кроме сибирской язвы тревогу вызывает и активизация холеры в разных частях мира. С осени 2010 г. на острове Гаити наблюдалась эпидемия, которая имеет потенциал для пандемического распространения. Это свидетельствует о том, что у России есть угроза, связанная с опасными инфекционными болезнями и обеспечением санитарно-эпидемиологического благополучия населения в целом (Онищенко, 2012).
Ситуация по заболеваемости холерой в мире на начало 2013 г. остается [ятной. В России и странах СНГ ситуация по заболеваемости холерой
характеризуется как нестабильная. Это связно с постоянно существующей опасностью завоза инфекции из неблагополучных по холере стран, а также с риском распространения возбудителей холеры водным, пищевым и контактно-бытовым путем при снижении уровня санитарно-эпидемиологического благополучия. (Бекова и др., 2014).
Актуальным остается вопрос индикации и идентификации биопатогенов в воде (холера), почве (сибирская язва).
Индикация патогенных биологических агентов представляет собой комплекс мероприятий, направленных на обнаружение в объектах окружающей среды (воздух, вода, почва, поверхности сооружений и предметов) микроорганизмов, патогенных для людей и животных (Германчук и др., 2015г.).
Арсенал методов индикации возбудителей заболеваний, имеющийся в настоящее время в распоряжении эпидемиологов обширен - от традиционных бактериоскопических и бактериологических методов, постановки биопроб на животных, до метода флуоресцирующих антител (МФА), реакции непрямой гемагглютинации (РИГА), твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА), до молекулярно-генетических методов, например полимеразной цепная реакции (ПЦР).
Из существующих методов определения различных природно-очаговых инфекций, самым чувствительным и универсальным методом диагностики
инфекционных заболеваний является метод ПЦР (полимеразная цепная реакция). Для проведения ПЦР - анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные геном эквиваленты бактерий или вирусов попавшие в реакционную смесь. ПЦР-анализ обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10-100 клеток в пробе.
работы явилась индикация биопатогенов в объектах окружающей
среды.
В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:
1. Выяснить факторы передачи спорообразующих и аспорогенных биопатогенов.
2. Определить максимально консервативные и специфичные локусы для геноиндикации холерного вибриона, вируса клещевого энцефалита и патогенной бациллы.
3. Провести геноиндикацию биопатогенов в абиотических и биотических объектах окружающей среды.
Предмет исследования - три биопатогена: ”
- Bacillus anthracis - Гр (+), спорообразующий, факультативный анаэроб
- Vibrio cholerae - Гр (-), аспорогенный, аэроб
- Tick-borne encephalitis - арбовирус.
Объект исследования - абиотические объекты окружающей среды (вода, почва) и биотические (клещи). 


Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Помощь студентам в написании работ!


Актуальность работы заключалась в индикации и идентификации биопатогенов, в отобранных пробах из абиотических (вода, почва) и биотических (клещи) объектов окружающей среды, самым чувствительным и универсальным методом диагностики инфекционных заболеваний - ПЦР. Пробы исследовали на наличие ДНК - Vibrio cholerae, Bacillus anthracis и РНК - Tick-borne encephalitis.
Вывод 1
1. Выяснили наиболее основные факторы передачи аспорогенного биопатогена Vibrio cholerae - инфицированные продукты питания, вода и предметы обихода.
2. Факторы передачи спорообразующего биопатогена Bacillus anthracis - инфицированное мясо, не подвергшееся достаточной термической обработке, контакт с больным животным и его трупом.
Вывод 2
1. В результате подбора оптимального локуса с максимально консервативным и специфичным генетическим кодом для индикации Vibrio cholerae методом ПЦР-РВ показал ген hlyA.
2. В результате подбора оптимальное
консервативным и специфичным генетическим кодом для индикации патогенной бациллы Bacillus anthracis, показал ген BA5345.
В результате подбора оптимального локуса максимальные
показатели по консервативности и специфичности генетического кода

накопление флуоресцентного сигнала лишь в пробах положительного контроля.
Преодоление пороговой линии флуоресценции происходило на 22 цикле амплификации.
2. В процессе проведения геноиндикации биопатогенов в абиотических и биотических объектах окружающей среды методом ПЦР-РВ, с выделенными ранее НК магнитно-сорбционным методом показал, что в анализируемых пробах не наблюдается ДНК и РНК искомых биопатогенов, все пробы отрицательны.




1. Агафонов В.М. Эпидемиологические особенности и клиническая картина клещевого энцефалита на европейском севере России / В.М. Агафонов, В.М. Котцов, Г.С. Пащенко, И.В. Попова// Экология человека. 2007. -№8. -с. 15¬18.
2. Аммосов А.Д. Клещевой энцефалит. Методы и средства лабораторной диагностики клещевого энцефалита и их применение в клинической практике: инф.-метод. пособие. / - Кольц: Вектор-Бест, 2006. -116 с.
3. Андреев В.П. Медицинская паразитология с энтомологией: Учебн. пособие / С.А. Павлович- Мн.: Вектор-Бест, 2002, -С. 311.
4. Андреевская Н.М. Иммуно- и физико-химическая характеристика экстракта поверхностных антигенов Bacillus anthracis / Н.М. Андреевская, В.И. Дубровина, К.Ю. Козулина, О.Б. Колесникова, А.В. Корнева, Е.В. Кравец, С.В. Лукьянова, О.В. Юрьева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2011. -№3. -209 с.
5. Анисимов А.П. Капсульный антиген чумного микроба / А.П. Анисимов, С.В. Дентовская, Л.А. Кадникова // Инфекция и иммунитет. 2015. - №3. -с. 201-218.
6. Анцилевич Л.М. Практическое применение иммуноферментного анализа в диагностике заболеваний / Л.М. Анцилевич, Л.А. Ягудина // Практическая медицина, 2014. -с. 28-34.
7. Ахмадбекова С. Сибирская язва зооантропонозное заболевание / С. Ахмадбекова, А.А. Муминов, Ш.Р. Мирзахметов // Ученые записи Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2012. -Т.
12. -с. 115-120. Ах
8. Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для вузов / С.А. Бабичев, А.П. Коротяев-СПб.: СпецЛит, -2008. -с. 780.
9. Балашов Ю.С. Кровососущие насекомые и клещи - переносчики трансмиссивных инфекций человека и домашних животных / Ю.С. Балашов // Энтомологическое обозрение. -2005. -Т.84. -№3. -с.677-700.
10. Бекова М.В. Разработка набора реагентов в формате ДНК-чипа для генотипирования штаммов Vibrio cholerae / М.В. Бекова, А.А. Девяткин, В. Г. Дедков // Клиническая лабораторная диагностика. -2014. -№ 5. -с.47-52.
11. Бровкина А.Н. Ускоренная индикация Legionella pneumophila на основе ПЦР-РВ / А.Н. Бровкина // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета. -2011. - №72. -с. 560-567.
12. Бургасов П.Н. Инструктивно-методические указания по обнаружению возбудителей кишечных инфекций бактериальной и вирусной природы в воде. -М. 2014. -с. 29.
к*
13. Бурма А.Х. Эпидемиологическая характеристика распространения сибирской язвы среды людей и животных / А.Х. Бурма, А.Г. Дава, А.М. Дарма // Дальневосточный журнал инфекционной патологии. -2014. -№24. -с. 105-106.
14. Бурова С.В. Диагностика инфекционных заболеваний. Лабораторные специальные методы / С.В. Бурова, М.П. Онухова, Т.Я. Чернобровкин // Международный медицинский журнал. -2009. -№2. -с.115-119.
15. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: учебн. для вузов / Ж.И. Возианова - Здоров'я, -2000. -Т.1, -с.214-230.
16. Волох О.А. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях / О.А. Волох, С.А. Еремин, С.П. Заднова // Проблемы особо опасных инфекций. - 2007. -№ 1. -С. 51-55.
17. Гапонов Г.Г. Иксодовые клещи на урбанизированных территориях Воронежской области в 2003-2009 / Г.Г. Гапонов, С.П. Солодовникова, О.Г. Федорук // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. -2011. -№2. - С. 45-51.
18. Германчук В.Г. Применение madli масс-спектрометрии в диагностике особо опасных инфекционных болезней: современное состояние и перспективы / В.Г. Германчук, В.Е. Куклев, А.Н. Спицын, Д.В. Уткин // Проблемы особо опасных инфекций. -2015. №3. -с. 77-82.
19. Гинцбург А.Л. Индукция иммунного ответа к Bacillus anthracis при интраназальном введении рекомбинантного аденовируса, экспрессирующего протективный антиген, слитый с Fc-фрагментом антитела IgG2a / А.Л. Гинцбург, И.Б. Есмагамбетов, Д.Ю. Логунов, И.Б. Носков, Ю.О. Селянинов, И.Л. Тутыхина, М.М. Шмаров, А.Н. Щербинин // Экспериментальные статьи. -2013. -Т.6. -№1. - С. 82-90.
20. Голева О.В. Методы вирусологической диагностики герпевирусных инфекций / О.В. Голева, Е.А. Мурина, З.А. Осипова // Медицинаэкстремальных ситуаций. -2015. -№1. -С.27-40.
21. Дроздова Т.М. Санитария и гигиена питания: Учебн. пособие / Т.М. Дроздова. -К.: Кемеровский технологический институт пищевой промышленности, 2005. -с. 108.
22. Жилина Н.Я. Лабораторная диагностика холеры: Метод, указания. / Н.Я. Жилина, Ю.М. Федоров. -М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 2007. -С.106
23. Коренберг Э.И. Природная очаговость инфекций: современные проблемы и перспективы исследований / Э.И. Коренберг // Зоологический журнал. - 2010. -Т. 89. №1. -С. 5-17.
24. Ключников А.Г. Диагностика эймероза методом ПЦР / А.А. Миронова, Л.П. Миронова, Т.В. Молокова // Вестник Донского государственного аграрного университета. -2016. №4. - С. 5-9.
25. Кривуля С.Д. Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы: Метод, указания / Н.Д. Пакскина. -М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2009. -69 с.
26. Луковкина А. Полный курс за 3 дня. Микробиология: учебн. для вузов / А. Луковкина: Научная книга. 2009. -с. 25.
27. Макаров В.В. Мировой нозоареал сибирской язвы / В.В. Макаров, О.И. Сухарев // Вестник Российской сельскохозяйственной науки. -2014. -№1. - с. 28-30.
28. Нурмагомаева З.С. Влияние биологических загрязнителей на заболеваемость человека / З.С. Нурмагомаева, М.С. Нурмагомаев, З.С. Магомедова// Успехи современного естествознания. -2008. -№11. -с. 25.
29. Онищенко Г. Г. Объединение усилий в борьбе с эпидемиями - приоритетная задача сотрудничества России и Казахстана / Онищенко Г. Г. // Гигиенаи санитария. -2012. -№3. -с. 4.
30. Профилактика клещевого вирусного энцефалита: Постановление от 20.12.2013. -№ 19 II Санитарно-эпидемиологические правила. -2008. -с. 10.
31. Прозоркина Н.В. Основы микробиологии, вирусологии и
иммунологии: учебн. пособие для средних специальных медицинских учебных заведений / Н.В. Прозоркина, П.А Рубашкина. -Ростов нД.: Феникс, 2002. -с. 168. ХА
32. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник для средних медицинских учебных заведений / В.Б. Сбойчаков. -СПб.: СпецЛит, 2011. -С. 23-23. OL
33. Токаревич Н.К. Эпидемиология и клинико-морфологические особенности хронических эндокардитов коксиеллезной этиологии / Н.К. Токаревич, О.А Фрейлихман. // Трансляционная медицина. -2014. -№3. - с. 39-43.
34. Цыркунов В.М. Инфекционные болезни и профилактика внутрибольничных инфекций: Учебн. пособие/Под ред. В.М. Цыркунсвг. - Мн.: Асар, 2006. -с. 262.


Работу высылаем на протяжении 30 минут после оплаты.



Подобные работы


©2024 Cервис помощи студентам в выполнении работ