ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ. СИМВОЛОВ И ТЕРМИНОВ
ВВЕДЕНИЕ
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1. Обзор литературы
Влияние экологических факторов на иммунный статус
Методы оценки иммунного статуса
Иммунный статус при микобактериозах
2. Материалы и методы исследования
3. Результаты и их обсуждение
Оценка специфического клеточного иммунитета методом биотестирования гамма-интерферона (IFN-γ) и интерлейкина-2 (IL-2), синтезируемых сенсибилизированными лимфоцитами в ответ на провоцирующее воздействие микобактериальных антигенов
Выявление специфических антител к возбудителю микобактериозов в группах с разным иммунным статусом иммунохроматографическим анализом
Выявление специфических антител к возбудителю микобактериозов в группах с разным иммунным статусом иммуноферментным анализом
Оценка уровня белка в сыворотке и плазме крови в группах с разным иммунным статусом
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
На сегодняшний день актуальна, такая медико-социальная проблема, как инфекционное заболевание - микобактериоз (Михайлова Л.А., Скачкова Е.И., Сон И.М., 2011).
Микобактериозы вызываются большим числом условно-патогенных микобактерий, широко распространенных в окружающей среде. (Зимина В.Н.1, Дегтярева С.Ю., Белобородова Е.Н., Кулабухова Е.И., Русакова Л.И., Фесенко О.В., 2017).
Повсеместное увеличение заболеваемости микобактериозами во всем мире требует тщательного их изучения для разработки алгоритмов диагностики, лечения и наблюдения за такими больными (Гунтупова Л.Д., Борисов С.Е., Макарова М.В., Хачатурьянц Е.Н., 2012.; Iseman M.D., Marras T.K., 2008).
Значительную роль в увеличении заболеваемости микобактериозами играет совершенствование методов лабораторной диагностики (Литвинов В.И., Макарова М.В., Краснова М.А.,2008).
Диагностика микобактериозов значительно затруднена из-за отсутствия характерного клинического симптомокомплекса (Griffith D.E., Aksamit T., Brown-Elliott B.A., Catanzaro A., Daley C., Gordin F., Holland S.M., Horsburgh R., Huitt G., Iademarco M.F., Iseman M., Olivier K., Ruoss S., von Reyn C.F., Wallace R.J. Jr., Winthrop K,2007; Шмелев Е.И., Ковалевская М.Н., Эргешов А.Э., Черноусова Л.Н., Ларионова Е.Е., 2016).
Хотя и эпидемическая ситуация в какой-то мере улучшилась, но Российская Федерация все также входит в группу стран с высоким бременем микобактериоза (Яблонский П.К., 2013). Микобактерия является возбудителем микобактериоза. Данную микобактерию относят к самым сложным в инфекционной патологии.
Рост числа случаев микобактериоза при других иммуносупрессивных состояниях, повышение доли больных микобактериозом, а так же высокий риск внутрибольничного перекрестного инфицирования, способствуют неблагоприятной динамике показателей распространенности микобактериозов с широкой (ШЛУ) и множественной (МЛУ) лекарственной устойчивостью микобактерий (Покровский В.В., Ладная Н.Н., Соколова Е.В., 2014; Фролова, О.П., 2002; Фролова О.П., Шинкарева И.Г., Новоселова О.А., 2013; Михайловский А.М., Чепасов В.И., 2015).
Для того чтобы предотвратить возникновение и распространение микобактериоза, необходимо применять своевременную комплексную диагностику этого заболевания. Для обнаружения микобактериозной инфекции имеется огромное количество методов. Такие методы, как иммуноферметный анализ (ИФА), полимерназная цепная реакция (ПЦР) и микробиологические исследования, занимают особое место.
Целью работы является повышение эффективности методологии оценки иммунного статуса населения при эколого-эпидемиологических исследованиях.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Определить чувствительность и специфичность биотестирования цитокинов методом ELISPOT при оценке специфического клеточного иммунитета;
2. Изучить эффективность иммунохроматографического экспресс-анализа (ИХА) при оценке специфического гуморального иммунитета;
3. Провести сравнительный анализ результатов ИХА и иммуноферментного анализа для оценки иммунного статуса;
4. Изучить влияние антикоагулянтов и активатора свертывания крови на показатели иммунного статуса.
Научная новизна. В ходе исследования впервые проведен сравнительный анализ методов (ELISPOT, иммуннохроматографический экспресс-метод) оценки иммунного статуса населения при микобактериозах.
Теоретическая и практическая значимость работы. В работе предлагается комплексный подход, который позволяет определить уровень микобактериальной нагрузки в изучаемой популяции, что в свою очередь позволит разработать эффективный мониторинг состояния здоровья населения и усовершенствовать комплекс мероприятий по повышению иммунного статуса.
Методы исследования. В работе использовали: сыворотку и плазму периферической крови людей с разным иммунным статусом. В ходе исследования определяли уровень сенсибилизированных к микобактериям Т- клеток (клеточный иммунитет) и специфических антимикобактериальных антител (гуморальный иммунитет). При этом использовали следующие методы:
• метод иммуноферментных пятен ELISPOT;
• иммунохроматография (ИХА);
• иммуноферментный анализ (ИФА);
• метод количественного определения белков (метод Бредфорда).
Положения, выносимые на защиту. Проведенным сравнительным анализом методологии оценки иммунного статуса населения при микобактериозах определена эффективность комплексного подхода определения показателей клеточного и гуморального иммунитета.
Степень достоверности результатов. Результаты исследования получены с помощью современных методов исследования, в результате достаточного количества наблюдений. Научные выводы подкреплены фактическими данными, представленными в виде таблиц и протоколов исследований. Подготовка и интерпретация данных осуществлялась с помощью пакета прикладных программ Microsoft Excel. Применяли t-критерий для независимых выборок, при этом использовали калькулятор «t-Test for Independent Samples» (VassarStats), доступный онлайн (http://vassarstats.net/tu.html).
Апробация результатов и публикации по теме магистерской диссертации. Часть диссертационной работы представлена в публикации "Биотестирование цитокинов при оценке клеточного иммунного ответа на микобактериальные антигены методом ELISPOT" (Юдина А.С. и др., 2018).
Проведенным сравнительным анализом методологии оценки иммунного статуса населения при микобактериозах определена эффективность комплексного подхода определения показателей клеточного и гуморального иммунитета. С этой целью предлагается наряду со стандартными методами оценки иммунного статуса (определение лейкоцитарной формулы, уровня общего белка, количества Т- и В-лимфоцитов, их характеристики и тд.), оценивать дополнительные показатели:
- уровень сенсибилизированных к микобактериям Т-клеток (клеточный иммунитет);
- уровень специфических антимикобактериальных антител (гуморальный иммунитет).
Для оценки показателя специфического клеточного иммунитета при микобактериозах, рекомендуется использовать метод ELISPOT, основанный на количественном определении сенсибилизированных Т-лимфоцитов периферической крови к микобактериальным антигенам.
Для оценки показателя специфического гуморального иммунитета при микобактериозах, предлагается использовать иммуннохроматографический экспресс-метод, основанный на выявлении специфических антител в периферической крови к микобактериальным антигенам.
Преимущество предлагаемого комплексного подхода заключается в том, что он позволяет определить уровень микобактериальной нагрузки в изучаемой популяции, что в свою очередь позволит разработать эффективный мониторинг состояния здоровья населения и усовершенствовать комплекс мероприятий по повышению иммунного статуса.
Анализ результатов проведенных исследований позволил сделать следующие выводы:
1. Биотестирование цитокинов методом ELISPOT с использованием комбинации микобактериальных антигенов, провоцирующих синтез IFN-γ и IL-2 сенсибилизированными лимфоцитами, обладает высокой чувствительностью и специфичностью при оценке специфического клеточного иммунитета;
2. При исследовании групп с подтвержденным статусом микобактериоз в 30-40 % случаев выявлялись специфические антитела методом иммунохроматографического экспресс-анализа, что подтверждает его эффективность при оценке специфического гуморального иммунитета;
3. Установлена корреляция результатов более чувствительного иммуноферментного анализа с иммуннохроматографическим экспресс- методом, но при этом последний проще и быстрее в проведении оценки иммунного статуса;
4. При анализе влияния антикоагулянтов и активатора свертывания крови на концентрацию общего белка статистически значимых различий между разными типами проб выявлено не было. При этом для серологических исследований (ИХА, ИФА) рекомендуется использовать пробирки с активатором свертывания (кремнезем) или антикоагулянтом ЭДТА.
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
