Помощь студентам в учебе
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ВЭЖХ
|
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 10
1.1 История открытия иматиниба 10
1.2 Физические и физико-химические свойства иматиниба 12
1.3 Инструментальные методы определения иматиниба в плазме крови
человека 16
1.3.1 Определение иматиниба методом ВЭЖХ/МС 17
1.3.2 Определение иматиниба методом ВЭЖХ-УФ 19
1.4 Методы пробоподготовки образцов плазмы крови человека для
хроматографического определения иматиниба 22
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 28
2.1 Объект исследования 28
2.2 Материалы и реактивы 28
2.3 Оборудование 28
2.3.1 Средства измерений 28
2.3.2 Вспомогательное оборудование 31
2.4 Условия оценки влияния состава подвижной фазы на хроматографические
характеристики пика иматиниба и разработки параметров его хроматографического определения 32
2.5 Условия валидации биоаналитической методики количественного
определения иматиниба в плазме крови человека 34
2.6 Условия анализа образцов плазмы крови добровольцев, содержащих
иматиниб, в клиническом исследовании биоэквивалентности 34
2.6.1 Условия исследования биоэквивалентности 34
2.6.2 Условия хроматографического определения иматиниба в образцах
плазмы крови добровольцев 35
2.6.3 Расчет фармакокинетических параметров 36
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА БИОАНАЛИТИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ КРОВИ
ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ВЭЖХ 37
3.1 Разработка условий хроматографического определения иматиниба 37
3.1.1 Изучение спектральных характеристик иматиниба 37
3.1.2 Обоснование выбора хроматографических параметров определения
иматиниба 38
3.1.3 Влияние состава подвижной фазы на хроматографические параметры
пика иматиниба 39
3.2 Разработка методики пробоподготовки образцов плазмы крови человека
для хроматографического определения иматиниба 47
3.3 Биоаналитическая методика количественного определения иматиниба в
плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием 58
ГЛАВА 4. ВАЛИДАЦИЯ БИОАНАЛИТИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА И РАСЧЕТ МЕТРОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ 62
4.1 Проверка пригодности хроматографической системы 62
4.2 Оценка специфичности методики 65
4.3 Определение предела обнаружения методики 66
4.4 Установление нижнего предела количественного определения методики ... 70
4.5 Изучение линейности методики 71
4.6 Оценка правильности, повторяемости и внутрилабораторной
прецизионности методики 74
4.7 Исследование стабильности анализируемых образцов 84
4.8 Оценка переноса сигнала определяемого вещества 86
4.9 Изучение надежности (устойчивости, робастности) методики 88
ГЛАВА 5. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ
КРОВИ ДОБРОВОЛЬЦЕВ В КЛИНИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ
БИОЭКВИВАЛЕНТНОСТИ 93
ВЫВОДЫ 99
УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ 101
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 102
Приложение 1 115
Приложение 2 116
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 10
1.1 История открытия иматиниба 10
1.2 Физические и физико-химические свойства иматиниба 12
1.3 Инструментальные методы определения иматиниба в плазме крови
человека 16
1.3.1 Определение иматиниба методом ВЭЖХ/МС 17
1.3.2 Определение иматиниба методом ВЭЖХ-УФ 19
1.4 Методы пробоподготовки образцов плазмы крови человека для
хроматографического определения иматиниба 22
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 28
2.1 Объект исследования 28
2.2 Материалы и реактивы 28
2.3 Оборудование 28
2.3.1 Средства измерений 28
2.3.2 Вспомогательное оборудование 31
2.4 Условия оценки влияния состава подвижной фазы на хроматографические
характеристики пика иматиниба и разработки параметров его хроматографического определения 32
2.5 Условия валидации биоаналитической методики количественного
определения иматиниба в плазме крови человека 34
2.6 Условия анализа образцов плазмы крови добровольцев, содержащих
иматиниб, в клиническом исследовании биоэквивалентности 34
2.6.1 Условия исследования биоэквивалентности 34
2.6.2 Условия хроматографического определения иматиниба в образцах
плазмы крови добровольцев 35
2.6.3 Расчет фармакокинетических параметров 36
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА БИОАНАЛИТИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ КРОВИ
ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ВЭЖХ 37
3.1 Разработка условий хроматографического определения иматиниба 37
3.1.1 Изучение спектральных характеристик иматиниба 37
3.1.2 Обоснование выбора хроматографических параметров определения
иматиниба 38
3.1.3 Влияние состава подвижной фазы на хроматографические параметры
пика иматиниба 39
3.2 Разработка методики пробоподготовки образцов плазмы крови человека
для хроматографического определения иматиниба 47
3.3 Биоаналитическая методика количественного определения иматиниба в
плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием 58
ГЛАВА 4. ВАЛИДАЦИЯ БИОАНАЛИТИЧЕСКОЙ МЕТОДИКИ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА И РАСЧЕТ МЕТРОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ 62
4.1 Проверка пригодности хроматографической системы 62
4.2 Оценка специфичности методики 65
4.3 Определение предела обнаружения методики 66
4.4 Установление нижнего предела количественного определения методики ... 70
4.5 Изучение линейности методики 71
4.6 Оценка правильности, повторяемости и внутрилабораторной
прецизионности методики 74
4.7 Исследование стабильности анализируемых образцов 84
4.8 Оценка переноса сигнала определяемого вещества 86
4.9 Изучение надежности (устойчивости, робастности) методики 88
ГЛАВА 5. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИМАТИНИБА В ПЛАЗМЕ
КРОВИ ДОБРОВОЛЬЦЕВ В КЛИНИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ
БИОЭКВИВАЛЕНТНОСТИ 93
ВЫВОДЫ 99
УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ 101
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 102
Приложение 1 115
Приложение 2 116
Актуальность работы. В современном лечении раковых заболеваний крови и кожи важное место занимает химиотерапия, обеспечивающая подавление роста опухолевых клеток и усиление процесса их естественной гибели. Лучшим из таргетных (целевых) препаратов, применяемых при меланоме и миелолейкозе, является иматиниб [1-5]. Он впервые был разработан компанией Novartis и реализуется под торговым наименованием Гливек®, объемы продаж которого на рынке России составляют более чем 150 млн долларов США в год. Иматиниб включен в Список стратегически значимых лекарственных средств и входит в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов (ЖНВЛП) [6-7]. В связи с тем, что одной из важнейших задач Стратегии развития фармацевтической промышленности до 2020 г является импортозамещение лекарственных средств, в том числе иматиниба, а также с истечением срока патентной защиты на производство Гливека® и большим объемом рынка его продаж, этот препарат представляет интерес для отечественных производителей дженериков.
Для государственной регистрации в РФ воспроизведенного лекарственного препарата на основе иматиниба согласно Российскому законодательству необходимо подтверждение его эффективности и безопасности оригинальному препарату, которое устанавливается путем клинического исследования биоэквивалентности [8]. Обязательным этапом на пути проведения такого исследования является разработка биоаналитической методики определения лекарственного средства в плазме крови человека с предварительным подбором условий выделения исследуемого вещества из биологической среды.
В качестве методов определения иматиниба в плазме крови применяют ВЭЖХ с УФ-детектированием и ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием. Использование высокочувствительного метода ВЭЖХ/МС весьма затруднительно, ввиду высокой стоимости оборудования. Преимуществами ВЭЖХ-УФ метода являются простота и доступность, что делает его незаменимым в большинстве фармакокинетических исследований.
Существующий ряд отечественных и зарубежных методик определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием не отвечает должным образом поставленным задачам, в частности, чувствительность таких методик не превышает 50 нг/мл. В большинстве случаев на получаемых хроматограммах наблюдаются широкие и асимметричные пики иматиниба, что свидетельствует о недоработке методики или отсутствии оптимизации хроматографических условий. Помимо этого, в процессе применяемых методов пробоподготовки происходит перенос эндогенных веществ матрицы в анализируемую пробу, что отражается наличием большого числа посторонних пиков на хроматограммах и, следовательно, потерей разрешения между пиками и специфичности анализа. В связи с этим возникает необходимость создания новой более чувствительной биоаналитической методики определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ с обоснованным выбором условий анализа и условий пробоподготовки.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение хроматографического поведения иматиниба и разработка новой методики его количественного определения в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
- оценить влияние модификаторов подвижной фазы на хроматографические параметры пика иматиниба;
- разработать хроматографические условия для количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием;
- разработать методику пробоподготовки образцов плазмы крови человека для хроматографического определения иматиниба;
- валидировать разработанную методику хроматографического определения иматиниба в плазме крови человека и рассчитать метрологические характеристики;
- провести анализ образцов плазмы крови добровольцев, содержащих иматиниб, в клиническом исследовании биоэквивалентности.
Научная новизна.
1. Предложен новый состав подвижной фазы для хроматографического определения иматиниба в плазме крови человека. Установлено, что разработанный состав динамически модифицированной подвижной фазы А и Б способствует уменьшению размывания хроматографической зоны иматиниба и получению на хроматограммах его узкого и симметричного пика .
2. Впервые разработаны хроматографические условия определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием, способствующие снижению его нижнего предела количественного определения до 40 % по сравнению с известными.
3. Предложен новый способ пробоподготовки образцов плазмы крови человека методом жидкостно-жидкостной экстракции ацетонитрилом по принципу QuEChERS для хроматографического определения иматиниба. Благодаря данному способу увеличена степень извлечения иматиниба из плазмы крови человека до 92 % и увеличена селективность его определения.
4. Разработан алгоритм пробоподготовки образцов плазмы крови человека для хроматографического определения иматиниба.
Практическая значимость работы. Разработана новая биоаналитическая методика количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Данная методика не требует дорогостоящих реактивов и позволяет быстро получать результаты с требуемой правильностью и прецизионностью, что очень важно для практического применения в медицинских целях. Разработанная методика внедрена в практику работы Лаборатории аналитической химии Отдела фармацевтических разработок ООО «Ифар» (г. Томск, Россия) для различных фармакокинетических исследований иматиниба, в том числе исследований биоэквивалентности его препаратов.
С помощью разработанной методики проведено сравнение воспроизведенного препарата IMB, капсулы 100 мг и оригинального препарата Гливек®, капсулы 100 мг (Novartis Pharma Stein AG, Швейцария) в клиническом исследовании их биоэквивалентности. На основании полученных результатов анализа рассчитаны важнейшие фармакокинетические параметры, позволяющие судить о всасывании, распределении и выведении лекарственного средства. Благодаря проведенному исследованию воспроизведенный лекарственный препарат зарегистрирован Минздравом РФ и выведен на рынок под названием Иглиб®, капсулы 100 мг (ЗАО «ФармФирма Сотекс», Россия).
Основные положения, выносимые на защиту:
1) Результаты оценки влияния модификаторов подвижной фазы на хроматографические параметры пика иматиниба.
2) Хроматографические условия для количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием.
3) Методика пробоподготовки образцов плазмы крови человека методом жидкостно-жидкостной экстракции ацетонитрилом по принципу QuEChERS для хроматографического определения иматиниба.
4) Результаты валидации разработанной методики хроматографического определения иматиниба в плазме крови человека и расчета метрологических характеристик.
5) Результаты анализа образцов плазмы крови добровольцев в клиническом исследовании биоэквивалентности препаратов иматиниба.
Апробация работы. Основные результаты диссертации докладывались и обсуждались на Международной научно-практической конференции «Интеграция науки, образования и производства - основа реализации Плана нации (Сагиновские чтения № 7)» (Караганда, Казахстан, 2015), Международной
научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов- 2016» (Москва, 2016), 54-й Международной научной студенческой конференции МНСК-2016 (Новосибирск, 2016), XVII Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых имени профессора Л.П. Кулева, посвященной 120-летию Томского политехнического университета «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2016), X Всероссийской научной конференции с международным участием «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» (Барнаул, 2016), XX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Екатеринбург, 2016).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Личный вклад автора. Основные экспериментальные результаты, представленные в диссертации, получены самим автором или при его непосредственном участии. Автором выполнены исследования по разработке и валидации биоаналитической методики количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ, разработаны хроматографические условия и условия пробоподготовки для извлечения иматиниба из биологической матрицы. Проведен анализ образцов плазмы крови добровольцев после приема тестируемого и референтного препаратов в клиническом исследовании биоэквивалентности, рассчитаны фармакокинетические параметры и проведена их статистическая обработка. Автором проведено обобщение всех полученных результатов и формулирование выводов.
Структура и объём работы: Диссертационная работа выполнена на 116 страницах машинописного текста и включает 32 рисунка, 29 таблиц и список литературы из 115 наименований.
Для государственной регистрации в РФ воспроизведенного лекарственного препарата на основе иматиниба согласно Российскому законодательству необходимо подтверждение его эффективности и безопасности оригинальному препарату, которое устанавливается путем клинического исследования биоэквивалентности [8]. Обязательным этапом на пути проведения такого исследования является разработка биоаналитической методики определения лекарственного средства в плазме крови человека с предварительным подбором условий выделения исследуемого вещества из биологической среды.
В качестве методов определения иматиниба в плазме крови применяют ВЭЖХ с УФ-детектированием и ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием. Использование высокочувствительного метода ВЭЖХ/МС весьма затруднительно, ввиду высокой стоимости оборудования. Преимуществами ВЭЖХ-УФ метода являются простота и доступность, что делает его незаменимым в большинстве фармакокинетических исследований.
Существующий ряд отечественных и зарубежных методик определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием не отвечает должным образом поставленным задачам, в частности, чувствительность таких методик не превышает 50 нг/мл. В большинстве случаев на получаемых хроматограммах наблюдаются широкие и асимметричные пики иматиниба, что свидетельствует о недоработке методики или отсутствии оптимизации хроматографических условий. Помимо этого, в процессе применяемых методов пробоподготовки происходит перенос эндогенных веществ матрицы в анализируемую пробу, что отражается наличием большого числа посторонних пиков на хроматограммах и, следовательно, потерей разрешения между пиками и специфичности анализа. В связи с этим возникает необходимость создания новой более чувствительной биоаналитической методики определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ с обоснованным выбором условий анализа и условий пробоподготовки.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение хроматографического поведения иматиниба и разработка новой методики его количественного определения в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
- оценить влияние модификаторов подвижной фазы на хроматографические параметры пика иматиниба;
- разработать хроматографические условия для количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием;
- разработать методику пробоподготовки образцов плазмы крови человека для хроматографического определения иматиниба;
- валидировать разработанную методику хроматографического определения иматиниба в плазме крови человека и рассчитать метрологические характеристики;
- провести анализ образцов плазмы крови добровольцев, содержащих иматиниб, в клиническом исследовании биоэквивалентности.
Научная новизна.
1. Предложен новый состав подвижной фазы для хроматографического определения иматиниба в плазме крови человека. Установлено, что разработанный состав динамически модифицированной подвижной фазы А и Б способствует уменьшению размывания хроматографической зоны иматиниба и получению на хроматограммах его узкого и симметричного пика .
2. Впервые разработаны хроматографические условия определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием, способствующие снижению его нижнего предела количественного определения до 40 % по сравнению с известными.
3. Предложен новый способ пробоподготовки образцов плазмы крови человека методом жидкостно-жидкостной экстракции ацетонитрилом по принципу QuEChERS для хроматографического определения иматиниба. Благодаря данному способу увеличена степень извлечения иматиниба из плазмы крови человека до 92 % и увеличена селективность его определения.
4. Разработан алгоритм пробоподготовки образцов плазмы крови человека для хроматографического определения иматиниба.
Практическая значимость работы. Разработана новая биоаналитическая методика количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Данная методика не требует дорогостоящих реактивов и позволяет быстро получать результаты с требуемой правильностью и прецизионностью, что очень важно для практического применения в медицинских целях. Разработанная методика внедрена в практику работы Лаборатории аналитической химии Отдела фармацевтических разработок ООО «Ифар» (г. Томск, Россия) для различных фармакокинетических исследований иматиниба, в том числе исследований биоэквивалентности его препаратов.
С помощью разработанной методики проведено сравнение воспроизведенного препарата IMB, капсулы 100 мг и оригинального препарата Гливек®, капсулы 100 мг (Novartis Pharma Stein AG, Швейцария) в клиническом исследовании их биоэквивалентности. На основании полученных результатов анализа рассчитаны важнейшие фармакокинетические параметры, позволяющие судить о всасывании, распределении и выведении лекарственного средства. Благодаря проведенному исследованию воспроизведенный лекарственный препарат зарегистрирован Минздравом РФ и выведен на рынок под названием Иглиб®, капсулы 100 мг (ЗАО «ФармФирма Сотекс», Россия).
Основные положения, выносимые на защиту:
1) Результаты оценки влияния модификаторов подвижной фазы на хроматографические параметры пика иматиниба.
2) Хроматографические условия для количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием.
3) Методика пробоподготовки образцов плазмы крови человека методом жидкостно-жидкостной экстракции ацетонитрилом по принципу QuEChERS для хроматографического определения иматиниба.
4) Результаты валидации разработанной методики хроматографического определения иматиниба в плазме крови человека и расчета метрологических характеристик.
5) Результаты анализа образцов плазмы крови добровольцев в клиническом исследовании биоэквивалентности препаратов иматиниба.
Апробация работы. Основные результаты диссертации докладывались и обсуждались на Международной научно-практической конференции «Интеграция науки, образования и производства - основа реализации Плана нации (Сагиновские чтения № 7)» (Караганда, Казахстан, 2015), Международной
научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов- 2016» (Москва, 2016), 54-й Международной научной студенческой конференции МНСК-2016 (Новосибирск, 2016), XVII Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых имени профессора Л.П. Кулева, посвященной 120-летию Томского политехнического университета «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2016), X Всероссийской научной конференции с международным участием «Аналитика Сибири и Дальнего Востока» (Барнаул, 2016), XX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Екатеринбург, 2016).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Личный вклад автора. Основные экспериментальные результаты, представленные в диссертации, получены самим автором или при его непосредственном участии. Автором выполнены исследования по разработке и валидации биоаналитической методики количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ, разработаны хроматографические условия и условия пробоподготовки для извлечения иматиниба из биологической матрицы. Проведен анализ образцов плазмы крови добровольцев после приема тестируемого и референтного препаратов в клиническом исследовании биоэквивалентности, рассчитаны фармакокинетические параметры и проведена их статистическая обработка. Автором проведено обобщение всех полученных результатов и формулирование выводов.
Структура и объём работы: Диссертационная работа выполнена на 116 страницах машинописного текста и включает 32 рисунка, 29 таблиц и список литературы из 115 наименований.
Разработана новая биоаналитическая методика количественного
определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ- детектированием и проведен анализ образцов плазмы крови добровольцев в клиническом исследовании биоэквивалентности препаратов, содержащих иматиниб.
1. Оценено влияние модификаторов подвижной фазы на хроматографические параметры пика иматиниба. Показано, что использование калия фосфорнокислого однозамещенного, ортофосфорной кислоты и триэтиламина в качестве модификаторов подвижной фазы А и Б приводит к уменьшению размывания хроматографической зоны иматиниба.
2. Разработаны хроматографические условия для количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ- детектированием. Выбраны оптимальные параметры состава подвижной фазы, скорости потока, температуры, объема вводимой пробы и условий градиентного элюирования, позволяющие разделять иматиниб и компоненты биологической матрицы. Показано, что разработанный состав динамически модифицированной подвижной фазы А и Б способствует получению на хроматограммах узкого и симметричного пика иматиниба, что привело к увеличению чувствительности методики и снижению предела количественного определения иматиниба в плазме крови человека с 50 до 30 нг/мл.
3. Разработана новая методика пробоподготовки образцов плазмы крови для хроматографического определения иматиниба методом жидкостно-жидкостной экстракции по принципу QuEChERS. Данная процедура пробоподготовки позволила увеличить степень извлечения иматиниба из плазмы крови человека с 84 до 92 %.
4. Разработанная методика валидирована и доказана ее пригодность к количественному определению иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Установлено, что методика является линейной в диапазоне концентраций 30-4200 нг/мл, доказана специфичность определения иматиниба в многокомпонентной биологической матрице. Погрешность при определении иматиниба в плазме крови человека составляет от 6,47 до 18,98 %, СКО повторяемости составляет от 2,01 до 6,86 %, а СКО внутрилабораторной прецизионности - от 3,17 до 9,75 %. Определена стабильность анализируемых образцов при различных условиях хранения. Доказано отсутствие переноса сигнала аналита в холостой образец плазмы крови после анализа образца с высокой концентрацией иматиниба. Выявлены характеристики методики, критически влияющие на параметры пригодности хроматографической системы.
5. С помощью разработанной и валидированной методики количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием проведен анализ образцов плазмы крови добровольцев в клиническом исследовании биоэквивалентности препаратов иматиниба. Рассчитаны фармакокинетические параметры и проведен их статистический
определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ- детектированием и проведен анализ образцов плазмы крови добровольцев в клиническом исследовании биоэквивалентности препаратов, содержащих иматиниб.
1. Оценено влияние модификаторов подвижной фазы на хроматографические параметры пика иматиниба. Показано, что использование калия фосфорнокислого однозамещенного, ортофосфорной кислоты и триэтиламина в качестве модификаторов подвижной фазы А и Б приводит к уменьшению размывания хроматографической зоны иматиниба.
2. Разработаны хроматографические условия для количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ- детектированием. Выбраны оптимальные параметры состава подвижной фазы, скорости потока, температуры, объема вводимой пробы и условий градиентного элюирования, позволяющие разделять иматиниб и компоненты биологической матрицы. Показано, что разработанный состав динамически модифицированной подвижной фазы А и Б способствует получению на хроматограммах узкого и симметричного пика иматиниба, что привело к увеличению чувствительности методики и снижению предела количественного определения иматиниба в плазме крови человека с 50 до 30 нг/мл.
3. Разработана новая методика пробоподготовки образцов плазмы крови для хроматографического определения иматиниба методом жидкостно-жидкостной экстракции по принципу QuEChERS. Данная процедура пробоподготовки позволила увеличить степень извлечения иматиниба из плазмы крови человека с 84 до 92 %.
4. Разработанная методика валидирована и доказана ее пригодность к количественному определению иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Установлено, что методика является линейной в диапазоне концентраций 30-4200 нг/мл, доказана специфичность определения иматиниба в многокомпонентной биологической матрице. Погрешность при определении иматиниба в плазме крови человека составляет от 6,47 до 18,98 %, СКО повторяемости составляет от 2,01 до 6,86 %, а СКО внутрилабораторной прецизионности - от 3,17 до 9,75 %. Определена стабильность анализируемых образцов при различных условиях хранения. Доказано отсутствие переноса сигнала аналита в холостой образец плазмы крови после анализа образца с высокой концентрацией иматиниба. Выявлены характеристики методики, критически влияющие на параметры пригодности хроматографической системы.
5. С помощью разработанной и валидированной методики количественного определения иматиниба в плазме крови человека методом ВЭЖХ с УФ-детектированием проведен анализ образцов плазмы крови добровольцев в клиническом исследовании биоэквивалентности препаратов иматиниба. Рассчитаны фармакокинетические параметры и проведен их статистический
