Тема: РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА КОРИ В МОДЕЛЬНЫХ И РЕАЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ

Инфекционные болезни во все времена были главными врагами человека. В поисках средств против инфекционных заболеваний люди испробовали многое — от заклинаний и заговоров до дезинфицирующих средств и карантинных мер. Однако только с появлением вакцин началась новая эра борьбы с инфекциями.
Разработка новых вакцин пошла полным ходом в начале XX века, когда появились методы стабильной аттенуации (ослабления) микроорганизмов, исключающие риск развития болезни, и была открыта возможность использовать для вакцинации обезвреженные бактериальные токсины и вирусы [1].
В связи с большой конкуренцией на фармацевтическом рынке и фальсификацией препаратов, контроль выпускаемых вакцин очень важен. Одними из перспективных и экспрессных подходов к качественному и количественному определению бактериальных и вирусных компонентов вакцин являются методы с использованием биосенсоров, а именно иммуносенсоров.
Химические и биосенсоры - аналитические устройства, включающие взаимодействующий с определяемым веществом рецепторный слой, тесно связанный или интегрированный с физическим преобразователем. Каждый из известных сегодня типов сенсоров (электрохимические, полупроводниковые, оптические, масс-чувствительные и т. д.) обладает своими достоинствами и недостатками, поэтому представляет интерес не только совершенствование рецепторов известных типов, но и разработка новых селективных высокочувствительных сенсорных систем, раскрытие их потенциальных возможностей и преимуществ.
Селективность сенсора определяется наличием на поверхности преобразователя прочно зафиксированного слоя функциональных групп или молекул, способных специфично и, желательно, обратимо взаимодействовать с определяемым веществом - аналитом. Создание такого рецепторного слоя - необходимое, но не достаточное условие эффективности сенсора [2].
Иммуносенсоры - аналитические устройства для качественного и количественного анализа биологических компонентов проб, основанные на выявлении специфических антигенов и антител посредством образования иммунокомплекса.
В настоящее время магнитные наночастицы (МЧ) широко применяются в иммуноанализе. С помощью МЧ возможно увеличение чувствительности и сокращение времени анализа за счет манипуляции частицами внешним магнитным полем, магнитной отмывки и магнитной сепарации. Кроме того, в качестве детектируемых меток, МЧ обладают преимуществами по сравнению с традиционными флуоресцентными и ферментными маркерами, применение которых в непрозрачных или сильно рассеивающих биологических средах имеет ряд серьезных ограничений [3].
Актуальность темы
Инфекционные болезни во все времена были главными врагами человека. Весьма актуальной задачей является разработка методов специфической диагностики заболеваний, заключающихся в определение антигена и антител к вирусу в организме больного.
В поисках средств против инфекционных заболеваний люди испробовали многое, однако только с появлением вакцин началась новая эра борьбы с инфекциями.
С другой стороны, в настоящее время большая конкуренция на фармацевтическом рынке вызвала фальсификацию препаратов. Следовательно, актуальной задачей является контроль выпускаемых вакцин.
Целью данной работы является разработка методики определения антигена вируса кори в модельных и реальных объектах (вакцина коревая живая).
Достижение поставленной цели требует решения ряда задач:
• Зарегистрировать электрохимический аналитический сигнал от аминированных наночастиц 1;с3С).|. выступающих в качестве прямой метки в разрабатываемом методе иммуноанализа, конъюгатов наночастиц магнетита с антителами в апротонной среде.
• Осуществить выбор рабочих условий для получения аналитического сигнала от метки (магнитных наночастиц) в составе иммунокомплекса, получаемого в процессе реализации процедуры иммуноанализа.
• Оценить применимость разработанной методики для определения антигена вируса кори в модельных и реальных (вакцина коревая живая) объектах.
• Осуществить метрологическую обработку полученных результатов.
Купить

• Синтезированы наночастицы 1;с3О4 покрытые
аминопропилтриэтоксисиланом; для полученных наночастиц зарегистрирован прямой сигнал в апротонной среде.
• Синтезированы конъюгаты наночастиц магнетита с антителами к вирусу кори, для полученных конъюгатов зарегистрирован прямой сигнал в апротонной среде.
• Получен прямой аналитический электрохимический сигнал от иммунокомплекса «антитело - антиген - конъюгат антитела с наночастицами магнетита».
• Разработаны методики анализа модельных и реальных объектов (на примере вакцины коревой культуральной живой) с использованием конкурентной схемы иммуноанализа и схемы «двойной сэндвич».
• Получена линейная зависимость прямого аналитического сигнала наночастиц, включенных в иммунокомплекс от концентрации антигена вируса кори при реализации схемы неконкурентного гетерогенного иммуноанализа:
I (мкА) = -0.437Сат(мкг/мл)+30.023.
• Получена линейная зависимость прямого аналитического сигнала наночастиц, включенных в иммунокомплекс от концентрации антител при реализации схемы конкурентного гетерогенного иммуноанализа:
1(А) = 2-10-51дСантигена(г/л)+1-10-4.
• Проведена метрологическая обработка полученных результатов.
Перспективы дальнейшей разработки темы исследования заключаются в модификации методики с целью снижения предела обнаружения, увеличения чувствительности и расширения линейного диапазона определяемых концентраций антигенов и антител в модельных и реальных объектах. Одним из путей решения данной задачи может являться разработка методики ориентированной иммобилизации антител на рабочей поверхности электрода.
Также необходима проверка применимости разработанного способа для обнаружения вирусов других видов, оценка специфичности и селективности разработанной методики.
Таким образом, полученные результаты могут стать основой для создания электрохимического экспрессного метода для обнаружения вирусов/антигенов вирусов, а также антител в объектах различной природы.
Купить