РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА КОРИ В МОДЕЛЬНЫХ И РЕАЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ

ВВЕДЕНИЕ 7
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 10
1 Биосенсоры 10
1.1 Ферментные сенсоры 12
1.2 ДНК-сенсоры 13
1.3 Иммуносенсоры 14
2. Иммуноанализ 16
2.1 Антитела 17
2.2 Антигены 20
2.2.1 Свойства антигенов 20
2.2.2 Антигены вирусов 22
2.3 Методы иммуноанализа 23
3. Применение магнитных наночастиц в иммуноанализе 24
4. Методы синтеза магнитных наночастиц 27
4.1 Метод соосаждения 28
4.2 Синтез в обратных мицеллах с использованием ПАВ 29
4.3 Термолиз металлсодержащих соединений в высококипящих
некоординирующих растворителях 30
ГЛАВА 2. АППАРАТУРА И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА 32
2.1 Оборудование и средства измерений 32
2.2 Реактивы, рабочие растворы 35
ГЛАВА 3. МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА 36
3.1 Синтез наночастиц магнетита 36
3.2 Синтез аминированных наночастиц магнетита и их конъюгатов с антителами 36
3.4 Методика регенерации рабочей поверхности электродов 38
3.5 Процедура гетерогенного неконкурентного иммуноанализа
(сэндвич-схема) 39
3.6 Процедура гетерогенного неконкурентного иммуноанализа 41
3.7 Процедура гетерогенного конкурентного иммуноанализа 42
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 43
4.1 Регистрация прямого электрохимического сигнала от наночастиц
магнетита и аминированных наночастиц магнетита 43
4.2 Регистрация прямого электрохимического отклика от конъюгатов
наночастиц магнетита с антителами 45
4.3 Определение концентрации антигена вируса кори в модельном растворе методом гетерогенного неконкурентного иммуноанализа (сэндвич схема) 49
4.4 Определение концентрации вируса кори в вакцине методом
гетерогенного неконкурентного иммуноанализа (сэндвич схема) 50
4.5 Определение концентрации антигена вируса кори в модельном
растворе методом гетерогенного неконкурентного иммуноанализа 52
4.6 Конкурентный иммуноанализ 52
4.5 Метрологическая обработка результатов 54
ВЫВОДЫ 56
Список используемых источников 58
Купить

Инфекционные болезни во все времена были главными врагами человека. В поисках средств против инфекционных заболеваний люди испробовали многое — от заклинаний и заговоров до дезинфицирующих средств и карантинных мер. Однако только с появлением вакцин началась новая эра борьбы с инфекциями.
Разработка новых вакцин пошла полным ходом в начале XX века, когда появились методы стабильной аттенуации (ослабления) микроорганизмов, исключающие риск развития болезни, и была открыта возможность использовать для вакцинации обезвреженные бактериальные токсины и вирусы [1].
В связи с большой конкуренцией на фармацевтическом рынке и фальсификацией препаратов, контроль выпускаемых вакцин очень важен. Одними из перспективных и экспрессных подходов к качественному и количественному определению бактериальных и вирусных компонентов вакцин являются методы с использованием биосенсоров, а именно иммуносенсоров.
Химические и биосенсоры - аналитические устройства, включающие взаимодействующий с определяемым веществом рецепторный слой, тесно связанный или интегрированный с физическим преобразователем. Каждый из известных сегодня типов сенсоров (электрохимические, полупроводниковые, оптические, масс-чувствительные и т. д.) обладает своими достоинствами и недостатками, поэтому представляет интерес не только совершенствование рецепторов известных типов, но и разработка новых селективных высокочувствительных сенсорных систем, раскрытие их потенциальных возможностей и преимуществ.
Селективность сенсора определяется наличием на поверхности преобразователя прочно зафиксированного слоя функциональных групп или молекул, способных специфично и, желательно, обратимо взаимодействовать с определяемым веществом - аналитом. Создание такого рецепторного слоя - необходимое, но не достаточное условие эффективности сенсора [2].
Иммуносенсоры - аналитические устройства для качественного и количественного анализа биологических компонентов проб, основанные на выявлении специфических антигенов и антител посредством образования иммунокомплекса.
В настоящее время магнитные наночастицы (МЧ) широко применяются в иммуноанализе. С помощью МЧ возможно увеличение чувствительности и сокращение времени анализа за счет манипуляции частицами внешним магнитным полем, магнитной отмывки и магнитной сепарации. Кроме того, в качестве детектируемых меток, МЧ обладают преимуществами по сравнению с традиционными флуоресцентными и ферментными маркерами, применение которых в непрозрачных или сильно рассеивающих биологических средах имеет ряд серьезных ограничений [3].
Актуальность темы
Инфекционные болезни во все времена были главными врагами человека. Весьма актуальной задачей является разработка методов специфической диагностики заболеваний, заключающихся в определение антигена и антител к вирусу в организме больного.
В поисках средств против инфекционных заболеваний люди испробовали многое, однако только с появлением вакцин началась новая эра борьбы с инфекциями.
С другой стороны, в настоящее время большая конкуренция на фармацевтическом рынке вызвала фальсификацию препаратов. Следовательно, актуальной задачей является контроль выпускаемых вакцин.
Целью данной работы является разработка методики определения антигена вируса кори в модельных и реальных объектах (вакцина коревая живая).
Достижение поставленной цели требует решения ряда задач:
• Зарегистрировать электрохимический аналитический сигнал от аминированных наночастиц 1;с3С).|. выступающих в качестве прямой метки в разрабатываемом методе иммуноанализа, конъюгатов наночастиц магнетита с антителами в апротонной среде.
• Осуществить выбор рабочих условий для получения аналитического сигнала от метки (магнитных наночастиц) в составе иммунокомплекса, получаемого в процессе реализации процедуры иммуноанализа.
• Оценить применимость разработанной методики для определения антигена вируса кори в модельных и реальных (вакцина коревая живая) объектах.
• Осуществить метрологическую обработку полученных результатов.
Купить