РЕФЕРАТ
ОГЛАВЛЕНИЕ.... 3
СПИСОК СОКРАЩЕНИ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Особенности строения и жизненного цикла вируса гепатита В
1.2 МСЛ и его роль в восприимчивости организма к вирусу гепатита
1.3 Роль STAT3 в иммунном ответе организма на ВГВ-
инфекцию 18
2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материал исследования 24
2.2 Методы исследования 24
2.2.1 Выделение ДНК термо-коагуляционным методом 24
2.2.2 Анализ полиморфизмов в генах. Проведение ПЦР 25
2.2.3 Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов 27
2.2.4 Электрофоретическое разделение в агарозном геле продуктов
рестрикции
2.3 Методы статистического анализа результатов 31
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 33
3.1 Анализ частот генотипов по полиморфизму rs2293152 гена
STAT3
3.2 Анализ частот генотипов по полиморфизму rs1800451 гена MBL2
3.3 Анализ частот генотипов по полиморфизму rs1800450 гена MBL2
3.4 Анализ межгенного взаимодействия манноз-
связывающего лектина и транскрипционного фактора STAT3 при ВГВ-инфекции
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 44
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
Гепатит В является одним из самых распространенных заболеваний печени. Известно, что около 5,5 млрд. человек имели контакт с ВГВ-инфекцией. По данным ВОЗ около 2 млрд. человек в мире имеют хотя бы один маркер ВГВ (Демиденко Т.П., Неверов В.А., 2011). Ежегодно регистрируется порядка 4¬5 млн. случаев заболевания данной инфекцией и 1-2 млн. смертей, связанных с ВГВ. При этом в РФ и СНГ от ВГВ ежегодно погибает около 5 тыс. человек от острой формы гепатита В (ОГВ) и 4,5 тыс. - от хронического гепатита В (ХГВ). 10% перенесших ОГВ становятся носителями ВГВ. Риск возникновения гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) у инфицированных ВГВ в 223 раза превышает риск развития рака печени при отсутствии вируса в организме (Ратникова Л.И. и др.,2013).
Восприимчивость людей к ВГВ высока. Наиболее чувствительными являются дети первого года жизни. Чаще вирусом гепатита В заражаются мужчины, что можно объяснить очень высоким уровнем экспрессии гена S вируса под воздействием стероидных гормонов, которых у мужчин больше, чем у женщин (Демиденко Т.П., Неверов В.А., 2011). По результатам мониторинга за 2012 г. в России наибольшие показатели заболеваемости ВГВ регистрировались в возрастных группах населения 30-39 лет (22,8 на 100 тыс. населения) и 20-29 лет (18,5 на 100 тыс. населения) (Ющук Н.Д. и др., 2014). В последнее время наблюдается тенденция снижения заболеваемости в России (рис. 1) ОГВ с 35,3 на 100 тыс. в 2001 году до 1,33 на 100 тыс. в 2013 году и ХГВ с 16 на 100 тыс. в 2001 году до 11,71 на 100 тыс. в 2013 году (Еремеева Ж.Г. и др., 2015). По данным Роспотребнадзора наименьшие показатели заболеваемости были зарегистрированы для ОГВ в 2017 году - 0,9 на 100 тыс.
Основными источниками инфекции при гепатите В являются лица с бессимптомными и клинически выраженными острыми и хроническими формами болезни. Однако наибольшее эпидемиологическое значение имеют больные с хроническим течением заболевания. Для заражения достаточно всего 10-6 - 10-7 мл крови, содержащей вирусные частицы (Демиденко Т.П., Неверов В.А., 2011).
Несмотря на то, что экспрессия вируса происходит, в основном, в гепатоцитах, возбудитель не оказывает прямого цитопатического действия на клетки печени. Цитолиз печёночных клеток происходит под действием цитотоксических иммунных механизмов, мишенями для которых служат антигенные детерминанты вируса гепатита В, ассоциированные с антигенами главного комплекса гистосовместимости (HLA) на поверхности гепатоцитов. Они играют существенную роль в развитии внепечёночных поражений, которые при хроническом гепатите В встречаются в 22-35% случаев (Лопатина Е.Ю. и др., 2010; Балабина Н.М., 2017).
Таким образом, полиморфизмы в генах различных факторов иммунитета могут повлечь за собой изменение восприимчивости организма к инфекционным заболеваниям, в том числе, гепатиту В, а также повлиять на течение инфекции. Так, одним из важнейших факторов врождённого иммунитета белковой природы является манноз-связывающий лектин (МСЛ). Он синтезируется в печени и связывается с сахарами на поверхности микроорганизмов, запуская лектиновый путь активации системы комплемента, что способствует удалению патогенов с помощью комплемент-опосредованного фагоцитоза (Eisen D.P., Minchinton R.M, 2003, Scorza M. et al., 2015). Другим важным фактором иммунитета является сигнальный белок и активатор транскрипции STAT3. Он участвует в передаче сигнала при действии широкого спектра цитокинов и факторов роста (Ярилин А.А., 2010, Wake M.S., Watson C.J., 2015).
Целью работы было выявление ассоциации полиморфизмов в генах MBL2и STAT3с риском развития гепатита В у жителей Ростовской области.
Исходя из поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
• исследование частоты регистрации полиморфизмов rs1800451и rs1800450гена MBL2в образцах ДНК людей, инфицированных гепатитом В, и контрольной группы;
• анализ частоты регистрации полиморфизма rs2293152гена STAT3в образцах ДНК, полученных из крови людей, инфицированных гепатитом В, и контрольной группы.
• Проведение анализа межгенного взаимодействия исследуемых аллельных вариантов генов.
1. Выявлены статистически значимые различия в частотах генотипов и аллелей по полиморфизму rs1800450гена MBL2 при сравнении группы инфицированных ВГВ и контрольной группы. Исходя из полученных данных, аллель А (р=0.01; OR=2.63 (1.23 - 5.62)) ассоциирована с высоким риском развития гепатита В, а наличие генотипа GGснижает такой риск, обладая защитным эффектом (OR=0.41 (0.17 - 0.96)).
2. Ассоциации полиморфизма rs2293152гена STAT3с риском развития гепатита В в исследуемых группах выявлено не было.
3. Ассоциации полиморфизма rs1800451гена MBL2с риском развития гепатита В в исследуемых группах выявлено не было. Во всех проанализированных образцах были обнаружены только гомозиготы по нормальной аллели.
4. По результатам анализа межгенных взаимодействий установлено, что взаимодействие полиморфных вариантов гена STAT3с гомозиготным по норме вариантом гена MBL2снижает риск развития гепатита В.
