РЕФФЕРАТ 2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4
ОГЛАВЛЕНИЕ 5
ВВЕДЕНИЕ 6
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1 Общая характеристика цитокинов 8
1.2 Взаимосвязь цитокинов с процессом сперматогенеза 11
1.3 Активные формы кислорода и сперматогенез 14
1.4 Антиоксидантная система сперматозоидов 17
1.5 Связь цитокинов с окислительным стрессом 21
2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 26
2.1 Материал исследования 26
2.2 Методы исследования 26
2.2.1 Выделение ДНК сорбентным методом 26
2.2.2 Анализ полиморфизма в генах методом аллель-специфичной ПЦР 28
2.2.3 Анализ продуктов амплификации методом горизонтального
электрофореза 29
2.3.3 Методы статистического анализа 31
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 33
3.1 Анализ частот генотипов и аллелей по полиморфизму О1п192Агдгена PON1 33
3.2 Анализ частот генотипов и аллелей по полиморфизму -174О>Сгена IL6 37
3.3 Анализ частот генотипов и аллелей по полиморфизму -308G>Aгена
TNF-a 41
3.4 Анализ межгенного взаимодействия генов иммунной регуляции и
антиоксидантов при нарушениях сперматогенеза 45
ВЫВОДЫ 54
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
В России сохраняется один из самых высоких показателей семейного бесплодия, достигающий примерно 19-20 % от общего количества супружеских пар. В Европе данный показатель составляет около 15 %. Данная ситуация может привести к сокращению численности населения страны в ближайшие десятилетия, именно поэтому проблемы репродуктивного здоровья населения имеют актуальность на данный момент (Калинченко, Тюзиков, 2017). На протяжении многих лет считалось, что бесплодие в большей степени связано с проблемами в репродуктивной системе женщины, однако современные исследования показали, что мужской фактор имеет не менее значимую роль (Долгушина, Глинкина, 2015). В настоящий момент вклад мужского фактора в структуру семейного бесплодия достигает около 50 %.
В числе причин мужского бесплодия рассматриваются (Тавокина, 2014):
1. эндокринные расстройства;
2. иммунологический фактор;
3. нарушения сперматогенеза;
4. факторы внешней среды и т.д.
В настоящее время актуально проводить изучение генетических факторов мужского бесплодия, так как по данным исследований известно, что генетические факторы обусловливают около 30-50 % всех случаев тяжелых форм бесплодия у мужчин (Тавокина, 2014). Сперматогенез является очень сложным биологическим процессом, который регулируется каскадом активации и деактивации определенных генов. В результате работы этих генов происходит процесс созревания сперматозоидов из клеток- предшественников. У человека в процесс регуляции сперматогенеза вовлечено более 2000 генов. По причине генетических нарушений могут возникнуть разные по своей этиологии и степени тяжести формы бесплодия: от незначительных нарушений сперматогенеза до полной дисфункции гонад (Тавокина, 2014). Среди генетических факторов мужского бесплодия выделяются три основные:
1. хромосомные аберрации;
2. генные мутации;
3. дисперсия хроматина и фрагментация ДНК.
Широко распространенные в геноме человека точечные замены одного нуклеотида в цепи ДНК (SNP), как правило, не являются непосредственной и обязательной причиной развития патологического процесса, однако они могут обуславливать больший или меньший риск его развития при действии различных факторов. Именно поэтому при мужском бесплодии актуально применять молекулярно-генетические методы, благодаря которому возможно произвести оценку состояния генетического аппарата у мужчин (Тавокина, 2014).
Таким образом, целью данной работы было изучить ассоциацию полиморфизма генов антиоксидантов, а также генов цитокинов с нарушениями сперматогенеза.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1. исследовать ассоциацию полиморфизма -308G>Aгена TNF-aс нарушениями сперматогенеза;
2. исследовать ассоциацию полиморфизма Gln192Argгена PON1с нарушениями сперматогенеза;
3. исследовать ассоциацию полиморфизма -174G>Cгена IL6с нарушениями сперматогенеза;
4. провести анализ межгенных взаимодействий аллельных вариантов генов PON1, IL6, TNF-aпри нарушениях сперматогенеза.
1. Однонуклеотидный полиморфизм Gln192Argгена PON1 не
ассоциирован с нарушениями сперматогенеза.
2. Однонуклеотидный полиморфизм -174G>Cгена IL6 не
ассоциирован с нарушениями сперматогенеза.
3. Выявлены статистически значимые различия в частотах аллелей по полиморфизму -308G>Aгена TNF-aсреди мужчин с олигозооспермией и контрольной группой. Для аллели -308Gвыявлена ассоциация с повышенным относительным риском развития олигозооспермии (p=0,04; OR=2,41; CI 1.10 - 5.27).
4. Выявлена тенденция к статистически значимым различиям в распределении частот аллелей по полиморфизму -308G>Aгена TNF-aдля мужчин с астенотератозооспермией по сравнению с контрольной группой (p=0,07).
5. При анализе межгенного взаимодействия исследуемых локусов выявлен генотип высокого риска развития астенотератозооспермии (OR=5,0 (1,13 -22,19; p=0,059, /2=3,57)): -308GG TNF-a/ -174GG IL6/ Gln192Gln PON1.
6. Повышенный риск развития олигозооспермии возможен для генотипа -308GG TNF-a/ -174GC IL6/ Gln192Gln PON1 (p=0,077, /2=3,12; OR=4,14 CI 1,01- 6,18).
