Заказать работу


Тип работы:
Предмет:
Язык работы:


ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ВИРУСОВ ГРИППА МЕТОДОМ АНАЛИЗА КРИВЫХ ПЛАВЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПЦР ВЫСОКОГО РАЗРЕШЕНИЯ (HRM-АНАЛИЗ)

Работа №71458
Тип работыДипломные работы, ВКР
Предметбиология
Объем работы49
Год сдачи2017
Стоимость4225 руб.
ПУБЛИКУЕТСЯ ВПЕРВЫЕ
Просмотрено 3
Не подходит работа?

Узнай цену на написание

Глава I. Введение
Актуальность темы магистерской работы 5
Цель и задачи исследования 6
Научная новизна и практическая значимость 6
Апробация работы 7
Глава II. Обзор литературы
2.1. Эпидемиология гриппа 8
2.2. Строение вируса гриппа 9
2.3. Антигенные изменения 12
2.4. Пандемический вирус гриппаА(НШ1)рйш 09 13
2.5. Вирусы гриппа птиц у человека 13
2.6. Потенциально пандемические вирусы гриппа птиц 14
2.7. Противогриппозная вакцинация 14
2.8. Методы идентификации вируса гриппа 16
2.8.1. Молекулярная идентификация вирусов гриппа 16
2.8.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 17
2.8.3. Секвенирование генома вируса гриппа 17
2.8.4. Методы анализа состава генома кандидатов в вакцинные штаммы 18
Глава III. Материалы и методы 23
3.1. Материалы 23
3.2. Методы работы 23
3.2.2. ПЦР с рестрикционным анализом 24
3.2.3. ОТ-ПЦР в реальном времени с HRM-анализом 26
3.2.4. Секвенирование по Сэнгеру 28
3.2.5. РТГА 28
3.2.6. Изучение репродукции в куриных эмбрионах (КЭ)
3.2.7. Изучение прививочных свойств реассортантного вируса на мышах 29
3.2.8. Нахождение сходства 30
3.2.7. Обработка результатов 30
Глава IV. Результаты и их обсуждение 31
4.1. Результаты ПЦР в режиме реального времени с HRM-анализом 31
4.2. Верификация полученных данных ОТ-ПЦР-рестрикционным методом 33
4.3. Секвенирование и разработка новых праймеров для HRM-анализа генов PB1 и РА
4.4. Подтверждение соответствия генотипа реассортантного вируса
фенотипическим свойствам
4.4.1. Изучение репродукции в куриных эмбрионах (КЭ) 38
4.4.2. Изучение прививочных свойств реассортантного вируса на мышах 39
Глава V. Выводы 40
Литература 42

На сегодняшний день вирус гриппа является основной причиной заболеваний у людей любого возраста, ежегодно приводящей к смерти и экономическому ущербу по всему миру. Круглогодичный мониторинг является важным ключевым элементом эпидемиологического надзора, который включает в себя раннее обнаружение и идентификацию сезонных (циркулирующих) вирусов гриппа, а также вирусов гриппа новых подтипов, которые могут вызывать пандемии. Необходима информация, включающая в себя молекулярно-генетический анализ вирусов гриппа, уровень коллективного иммунитета, изучение чувствительности к противовирусным препаратам, антигенные характеристики вируса. Разработка эффективной вакцины против гриппа является приоритетной задачей, в связи с этим необходимо ежегодное обновление состава вирусов в вакцинах, так как циркулирующие вирусы гриппа постоянно эволюционируют.
Актуальность темы магистерской работы
Актуальность работы определяется тем, что особое внимание уделяется разработке методов молекулярно-генетического анализа штаммов вируса гриппа, которые будут включены в ежегодную вакцину. На протяжении многих лет Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) дважды в год обновляет свои рекомендации в отношении состава вакцины. На промежуточных этапах подготовки вакцинного штамма, когда нужно быстро проанализировать значительное число реассортантов (провести первичный скрининг), возникает потребность в разработке быстрых и недорогих методов первичного скрининга.
На сегодняшний день известны молекулярные методы, которые используют в лабораторном надзоре за гриппом. К ним относятся качественные и количественные анализы в режиме реального времени с обратной транскрипции. Центр по контролю и профилактике заболеваний (CDC) рекомендует протокол пиросеквенирования который является наиболее точным, тем не менее, этот метод является слишком дорогим для рутинного, широкомасштабного использования в диагностических лабораториях. Данная работа посвящена разработке эффективной и экономичной методики генотипирования реассортантных вирусов гриппа, включаемых в состав живой гриппозной вакцины
(ЖГВ).
Цель и задачи исследования
Целью данного исследования являлась разработка метода анализа кривых плавления продуктов ПЦР высокого разрешения (HRM анализ) для генотипирования реассортантных вакцинных вирусов, разрабатываемых для защиты против птиц.
Для ее выполнения потребовалось решение следующих задач:
1. Изучить состав генома реассортантного вируса гриппа А/17/серебристая чайка/
Сарма/2006/887 (H6N1) методом ПЦР в режиме реального времени с HRM- анализом. Подтвердить полученные результаты методом полиморфизма фрагментов рестрикции в агарозном геле и частичным секвенированием.
2. Разработать и апробировать праймеры для амплификации с помощью ПЦР в
реальном времени генов внутренних и неструктурных белков реассортантных вирусов гриппа птиц, полученных на основе донора аттенуации А/Ленинград/ 134/17/57 (H2N2).
3. Подтвердить соответствие генотипа реассортантного вируса фенотипическим
свойствам.
Научная новизна и практическая значимость
Научная новизна работы заключается в разработке метода определения генома реассортантных вакцинных штаммов на основе донора аттенуации А/Ленинград/ 134/17/57 (H2N2) с использованием HRM-анализа. Впервые получен холодоадаптированный реассортантный штамм вируса гриппа А/17/Серебристая чайка/ Сарма/2006/887 (H6N1). Впервые выявлены уникальные нуклеотидные позиции в генах РВ1 и РА вируса птичьего гриппа А17/Серебристая чайка/Сарма/06/887 (H6N1). В данной работе впервые были разработаны и апробированы универсальные праймеры для генов внутренних и неструктурных белков(РВ2, PB1, PA, NP, M, NS) донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и вирусов птичьего гриппа.
Научно-практическая значимость исследования.
Разработан метод экспресс-анализа, которым можно идентифицировать олигонуклеотидные и однонуклеотидные различия в генах вируса гриппа, что позволяет применять этот метод для скрининга вакцинных кандидатов.
Апробация работы
Результаты работы представлены на конференции отдела вирусологии им. А.А. Смородинцева федерального государственного бюджетного научного учреждения Института Экспериментальной Медицины 22 марта 2016 г.
Результаты работы представлены на XIX Молодежной конференции-школе по органической химии «ОргХим-2016», Санкт-Петербург 27 июня - 1 июля 2016 г. Название работы «Анализ кривых плавления высокого разрешения продуктов ПЦР для изучения нуклеотидных замещений в геноме реассортантного штамма вируса гриппа А (H6N1)».
Результаты работы опубликованы в «Microbiology Independent Research Journal»: Дешева Ю.А., Смолоногина ТА., Ландграф Г.О., Руденко Л.Г. Разработка холодоадаптированного реассортантного вируса гриппа А/ЖШ на основе донора аттенуацииA/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и его генотипирование методом анализа кривых плавления высокого разрешения (HRM-анализ). Microbiology Independent Research Journal. 2016. Т. 3. № 1. С. 42-48.

Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Помощь в написании студенческих
и аспирантских работ!


1. Результаты анализа генома кандидата в вакцинные штаммы А/17/ серебристая чайка/Сарма/2006/887 (H6N1) (Лен17/Н6), полученные методом ПЦР в режиме реального времени с HRM-анализом, совпадают с результатами, полученными классическим методом ОТ-ПЦР- рестрикционного анализа.
2. Анализ нуклеотидных последовательностей выявил значительные различия в генах внутренних и неструктурных белков донора аттенуации А/ Ленинград/134/17/57 (H2N2) и вируса птичьего гриппа А/Серебристая чайка/Сарма/51с/2006(Н6Х1).
3. Вновь разработанные праймеры для генов PB1, PA, NP, M, NS вируса гриппа
А позволяют проводить анализ реассортантов подтипа А(Н6Ш) на основе донора аттенауции А/Ленинград/134/17/57(Н2№) методом HRM анализа. НИМ-анализ позволяет обнаружить не только олигонуклеотидные, но и однонуклеотидные замещения в геноме вируса гриппа.
4. Данные генотипирования реассортанта Лен17/Н6 соответствуют
требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам ЖГВ (ts-, ca-, att- фенотип).



1. Александрова Г. И., Климов А. И. (1994) Живая вакцина против гриппа, Изд-во «Наука», СПб, 151 с.
2. Пиневич А.В., Сироткин А.К., Гаврилова О.В., Потехин
А.А. (2012). Вирусология. Изд-во: Санкт Петербургский Государственный Университет. 388c.
3. Филдс Б., Найп Д., Ченок Р., Ройзман Б., Мелкин Дж., Шоуп Р. (1989) Вирусология: в 3-х томах, т. 2: пер. с англ., М.: Мир, 496 с
4. Abolnik C, BisschopS, GerdesT, Olivier A, Horner R. Outbreaksofavian influenza H6N2 viruses in chickens arose by a reassortment of H6N8 and H9N2 ostrich viruses. VirusGenes 2007;34(January (1)). p.37-45.
5. Alonso-Caplen, F. V., Nemeroff, M. E., Qiu, Y. & Krug, R. M. Nucleocytoplasmic transport: the influenza virus NS1 protein regulates the transport of spliced NS2 mRNA and its precursor NS1 mRNA. GENES & DEVELOPMENT 1992. 6. p.255-267
6. ANN H. REID, THOMAS G. FANNING, JOHAN V. HULTIN, AND JEFFERY K. TAUBENBERGER: The origin and virulence of the 1918 “Spanish” influenza virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 96, February 1999 Microbiology; p.1651-1656
7. Baker MG, Wilson N, Huang QS. Pandemic influenza A(H1N1)v in New Zealand: the experience from April to August 2009. Euro Surveill. 2009; 14(34). p.1-6.
8. Biswas S K, Nayak D P. Mutational analysis of the conserved motifs of influenza A virus polymerase basic protein 1. J Virol. 1994;68. p.1819-1826
9. Bright RA, Shay DK, Shu B, Cox NJ, Klimov AI Adamantane resistance among influenza A viruses isolated early during the 2005-2006 influenza season in the United States. JAMA 295. p. 891-894.
10. Catherine Gerdil, Aventis Pasteur S.A., The annual production cycle for influenza vaccinea France Vaccine 21 (2003) p.1776-1779
11. Cannell JJ, Zasloff M, Garland CF. On the epidemiology of influenza. Virol J 2008; p. 5-29.
12. Centers for Disease Control and Prevention. H1N1 flu (swine flu): resources for laboratories. Centers for Disease Control and Prevention Web site. http://www.cdc.gov/ h1n1flu/lab/. Accessed June 2, 2009.
13. ChenZ,WangW, ZhouH, SuguitanJrAL, ShambaughC,Kim. Generation of live attenuated novel influenza virus A/California/7/09 (H1N1) vaccines with high yield in embryonated chicken eggs. J Virol 2010;84(January (1)). p.44-51.
14. Chin PS, Hoffmann E, Webby R, Webster RG, Guan Y, Peiris M. Molecular evolution of H6 influenza viruses from poultry in Southeastern China: prevalence of H6N1 influenza viruses possessing seven A/Hong Kong/156/97 (H5N1)-like genes in poultry. J Virol 2002;76(January (2)). p.507-16
15. Curd E, Pollinger J, Toffelmier E, Smith T. Rapid influenza A detection and quantitation in birds using a one-step real-time reverse transcriptase PCR and High Resolution Melting. J virol methods 2011; 176(1), p.125-30.
16. Dai-Lun Shin, Bastian Hatesuer Silke Bergmann, Tatiana Nedelko, Klaus Schugharta Protection from Severe Influenza Virus Infections in Mice Carrying the Mx1 Influenza Virus Resistance Gene Strongly Depends on Genetic Background , Journal of Virology October 2015 Volume 89, p. 9998 - 10009
17. DANIEL R. PEREZ AND RUBEN O. DONIS «Functional Analysis of PA Binding by Influenza A Virus PB1: Effects on Polymerase Activity and Viral Infectivity» JOURNAL OF VIROLOGY, Sept. 2001, p. 8127-8136
18. Dauber B, Heins G, Wolff T. The influenza B virus nonstructural NS1 protein is essential for efficient viral growth and antagonizes beta interferon induction. J Virol 2004;78(Feb (4)) p.1865-72.
19. de la Luna, S., Fortes, P., Beloso, A. Ortin, J. Influenza virus NS1 protein enhances the rate of translation initiation of viral mRNAs. 1995. J Virol 69, p. 2427-2433.
20. Deng YM, Caldwell N, Hurt A, Shaw T, Kelso A. A comparison of pyrosequencing and neuraminidase inhibition assays for the detection of oseltamivir-resistant pandemic influenza A(H1N1) 2009 viruses. Antiviral Res 90. p.87-91.
21. Deyde VM, Okomo-Adhiambo M, Sheu TG, Wallis TR, Fry A. (2009) Pyrosequencing as a tool to detect molecular markers of resistance to neuraminidase inhibitors in seasonal influenza A viruses. Antiviral Res 81 p.16-24.
22. Duwe S, Schweiger. A new and rapid genotypic assay for the detection of neuraminidase inhibitor resistant influenza A viruses of subtype H1N1, H3N2, and H5N1. 2008, J Virol Methods 153. p.134-141
23. Eischeid AC. SYTO dyes and EvaGreen outperform SYBR Green in real-time PCR. BMC research notes 2011; 4(1) p.263.
24. Ellis, J. S., D. M. Fleming, and M. C. Zambon. 1997. Multiplex reverse transcription- PCR for surveillance of Influenza A and B viruses in England and Wales in 1995 and 1996. J. Clin. Microbiol. 35. p.2076-2082.
25. Erich Hoffmann, Gabriele Neumann, Yoshihiro Kawaoka, Gerd Hobom, and Robert G. A DNA transfection system for generation of influenza A virus from eight plasmids PNAS May 23, 2000 vol. 97 no. 11 p.6108-6113
26. Fauci AS. 2006. Seasonal and pandemic influenza preparedness: science and countermeasures. J Infect Dis 194(Suppl 2). p.73-S76
27. Garaigorta, U. & Ortin, J. (2007). Mutation analysis of a recombinant NS replicon shows that influenza virus NS 1 protein blocks the splicing and nucleo-cytoplasmic transport of its own viral mRNA. Nucleic Acids Res 35 p.4573-4582.
28. Garcia-Sastre A. Inhibition of interferon-mediated antiviral responses by influenza A viruses and other negative-strand RNA viruses. Virology 2001;279(Jan (2). p.375-84.
29. Garten RJ, Davis CT, Russell CA. Antigenic and genetic characteristics of swine- origin 2009 A(H1N1) influenza viruses circulating in humans. Science 2009; 325.p. 197-201
30. James R. Gill; Zong-Mei Sheng, Susan F. Ely, Donald G. Guinee Jr, Mary B. Beasley, James Suh, Charuhas Deshpande,Daniel J. Mollura, David M. Morens, Mike Bray, William D. Travis, Jeffery K. Taubenberger, “Pulmonary Pathologic Findings of Fatal 2009 Pandemic Influenza A/H1N1 Viral Infections “Arch Pathol Lab Med-Vol 134, February 2010 p 235 - 243
31. Jeffery K. Taubenberger, and John C. Kash “Influenza Virus Evolution, Host Adaptation, and Pandemic Formation” Cell Host & Microbe 7, June 17, 2010 . p.440-451
32. Halperin SA, Smith B, Clarke K, Treanor J, Mabrouk T, Germain M. Randomized, controlled trial to study the reactogenicity and immunogenicity of a nasal, inactivated trivalent influenza virus vaccine in healthy adults. Hum Vaccin 2005; (January-February (1)). p.37-42.
33. Hampson AW, Cox NJ. Global surveillance for pandemic influenza: are we prepared? In: Brown LE, Hampson AW, Webster RG, editors. Options for control of influenza, Part III. Amsterdam: Elsevier; 1996, p. 50-9.
34. Hatta M, Kawaoka Y. The NB protein of influenza B virus is not necessary for virus replication in vitro. JVirol 2003;77(May (10). p.6050
35. HoffmannE, StechJ, LenevaI, KraussS, ScholtissekC,ChinPS.Characterization of the influenza A virus gene pool in avian species in southern China: was H6N1 a derivative or a precursor of H5N1 J Virol 2000;74(July (14)). p.6309-6315
36. Kawsar R. Talaat, Ruth A. Karron, Catherine J. Luke, Bhagvanji Thumar, Bridget A. McMahon, Grace L. Chen, Elaine W. Lamirande, Hong Jin, Kathy L. Coelingh, George Kemble, Kanta Subbarao An open label Phase I trial of a live attenuated H6N1 influenza virus vaccine in healthy adults Vaccine 29 (2011) p.3144-3148
37. Kelly HA, Grant KA, Williams S, Fielding J, Smith D. Epidemiological characteristics of pandemic influenza H1N1 2009 and seasonal influenza infection. Med J Aust. 2009;191(3). p.146-149.
38. Kobayashi M, Toyoda T, Ishihama A. Influenza virus PB1 protein is the minimal and essential subunit of RNA polymerase. Arch Virol. 1996;141. p.525-539.
39. Kochs G, Garcia-Sastre A, Martinez-Sobrido L. Multiple anti-interferon actions of the influenza A virus NS1 protein. J Virol 2007;81(Jul (13)).p. 7011-7021.
40. Klimov A.I., Сох N.J. PCR restriction analysis of genome composition and stability of cold-adapted reassortant live influenza vaccines // J. Virol. Methods. 1995. Vol.52. №1-2. P.41-49
41. Krafft AE, Duncan BW, Bijwaard KE, Taubenberger JK, Lichy JH. Optimization of the isolation and amplification of RNA from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue: the Armed Forces Institute of Pathology experience and literature review. Mol Diagn. 1997;2(3). p.217-230.
42. Krafft AE, Russell KL, Hawksworth AW, et al. Evaluation of PCR testing of ethanol- fixed nasal swab specimens as an augmented surveillance strategy for influenza virus and adenovirus identification. J Clin Microbiol. 2005;43(4) p. 1768- 1775.
43. Lackenby A, Democratis J, Siqueira MM, Zambon MC (2008) Rapid quantitation of neuraminidase inhibitor drug resistance in influenza virus quasispecies. AntivirTher 13: p. 809-820.
44. Lamb RA, Lai CJ, Choppin PW. Sequences of mRNAs derived from genome RNA segment 7 of influenza virus: colinear and interrupted mRNAs code for over- lapping proteins. Proc Natl Acad Sci USA 1981;78(Jul (7)). p.4170-4174.
45. LaForce FM, Nichol KL, Cox NJ: Influenza: Virology, epidemiology, disease, and prevention. Am J Prev Med 1994; 10(Suppl) p.31-44
46. Lazarus, P., and S. Caruana. 1996. Typing of common human papilloma virus strains by multiplex PCR. Anal. Biochem. 243. p.198-201.
47. Lin JH, Tseng CP, Chen YJ, Lin CY, Chang SS, Wu HS, Cheng JC. Rapid differentiation of influenza A virus subtypes and genetic screening for virus variants by high-resolution melting analysis. J clin microbiol 2008; 46(3) p.1090-1097.
48. Liew M, Pryor R, Palais R, Meadows C, Erali M, Lyon E, Wittwer C. Genotyping of single-nucleotide polymorphisms by high-resolution melting of small amplicons. Clin chem 2004; 50(7) p. 1156-1164.
49. Michael Liew, Robert Pryor, Robert Palais, Cindy Meadows, Maria Erali, Elaine Lyon, and Carl WittwerGenotyping of Single-Nucleotide Polymorphisms by High-Resolution Melting of Small Amplicons Clinical Chemistry (2004) 50:7 p.1156-1164
50. Monto AS: Epidemiology of influenza. Vaccine 2008; 26(Suppl 4):D45-D48 ) Vaccine 2005; 23. p. 5133-5143
51. Morgulis A, Coulouris G, Raytselis Y, Madden TL, Agarwala R, Schaffer AA. Database indexing for production MegaBLAST searches. Bioinform 2008; 24(16). p.1757-64.
52. Muller R, Poch O, Delarue M, Bishop D H, Bouloy M. Rift Valley fever virus L segment: correction of the sequence and possible functional role of newly identified regions conserved in RNA-dependent polymerases. J Gen Virol. 1994;75. p.1345-1352.
53. Murti K G, Webster R G, Jones I M. Localization of RNA polymerases on influenza virala ribonucleoproteins by immune gold labeling. Virology. 1988;164 p.562-566.
54. Medcalf L, Poole E, Elton D, Digard P, Medcalf L, Poole E, Elton D, Digard P. Temperature-sensitive lesions in two influenza A viruses defective for replicative transcription disrupt RNA binding by the nucleoprotein. JVirol. 1999;73. p.7349-7356.
55. McMichael A.J., Gotch F.M., Dongworth D.W., Clark A., Potter C.W. Declining T-cell immunity to influenza, 1977-1982. Lancet. 1983;2 p.762-764.
56. Nicole M. Bouvier, Peter Palesea THE BIOLOGY OF INFLUENZA VIRUSES Vaccine 26S (2008). p.49-53
57. Nguyen-Van-Tam JS, Hampson AW: The epidemiology and clinical impact of pandemic influenza. Vaccine 2003; 21.p.1762-1768
58. Philippe R. S. Lagace'-Wiens, MD, DTM&H, FRCPC; Ethan Rubinstein, LLB; Abba Gumel, Influenza epidemiology—past, present, and future Crit Care Med 2010 Vol. 38,
_ N°. 4. (Sup.pl.) p1.- 9 ...........
59. ReedLJ, MuenchH. Asimple method ofestimatingfifty percent endpoints. Am J Epidemiol 1938; 27(3).p. 493-7.
60. Read, S. J., K. J. M. Jeffery, and C. R. M. Bangham. 1997. Aseptic meningitis and encephalitis: the role of PCR in the diagnostic laboratory. J. Clin. Mi- crobiol. 35. p.691¬696.
61. Runstadler JA, Happ GM, Slemons RD. Using RRT-PCR analysis and virus isolation to determine the prevalence of avian influenza virus infections in ducks at Minto Flats State Game Refuge, Alaska, during August 2005. Arch Virol. 2007;152(10). p.1901-1910
62. RoweT,AbernathyRA,Hu-PrimmerJ,ThompsonWW, LuX, LimW, FukudaK, CoxNJ, KatzJM. Detection of antibody to avian influenza A (H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assays. J clin microbiol. 1999; 37(4).p. 937-943.
63. Samdal HH, Bakke H, Oftung F, Holst J, Haugen IL, Korsvold GE, et al. A non-living nasal influenza vaccine can induce major humoral and cellular immune responses in humans without the need for adjuvants. Hum Vaccin 2005;1(March-April (2). p.85-90.
64. Saranya Sridhar,Karl A. Brokstad, andRebecca J. CoxSarah Gilbert, Comparing Inactivated and Live Attenuated Influenza VaccinesVaccines (Basel). 2015 Jun; 3(2). p
... 373-389.
65. Stephenson I, Zambon M: The epidemiology of influenza. OccupMed (Lond) 2002; 52. p 241-247
66. Susana de Lucas,Joan Peredo,Rosa Maria Marion,Carmen Sanchez, andJuan OrtinHuman Staufenl Protein Interacts with Influenza Virus Ribonucleoproteins and Is Required for Efficient Virus Multiplication J Virol. 2010 Aug; 84 p.15.
67. SCHWEIGER. B., I. ZADOW, R. HECKLER, H. TIMM, AND G. PAULI Application of a Fluorogenic PCR Assay for Typing and Subtyping of Influenza Viruses in Respiratory Samples JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Apr. 2000, p. 1552-1558
68. Untergasser A, Cutcutache I, Koressaar T, Ye J, Faircloth BC, Remm M, Rozen SG. Primer3 - new capabilities and interfaces. Nucl Acid Res 2012; 40(15), p.115
69. Vaillant L, La Ruche G, Tarantola A, Barboza P. Epidemiology of fatal cases associated with pandemic H1N1 influenza 2009. Euro Surveill. 2009; 14(33). p.1-6.
70. Wittwer CT, Reed GH, Gundry CN, Vandersteen JG, Pryor RJ High resolution genotyping by amplicon melting analysis using LCGreen, Clin Chem 2003; 49. p. 853-860.
71. Woolcock PR, Suarez DL, Kuney D. Low-pathogenicity avian influenza virus (H6N2) in chickens in California, 2000-02. Avian Dis 2003;47(3 Suppl). p.872-81
72. Yi Sun, Raghuram Dhumpa, Dang Duong Bang, Jonas Hpgberg, Kurt Handbergc and Anders Wolff A lab-on-a-chip device for rapid identification of avian influenza viral RNA by solid-phase PCR This journal is a The Royal Society of Chemistry 2011 ,11, p. 1457¬1463
73. Zheng Wang, Luke T Daum, Gary J. Vora, David Metzgar, Elizabeth A. Walter,^ Linda C. Canas, Anthony P Malanoski, Baochuan Lin, and David A. Stenger Identifying Influenza Viruses with Resequencing Microarrays Emerging Infectious Diseases • www.cdc.gov/eid • Vol. 12, No. 4, April 2006, p.638-636.


Работу высылаем на протяжении 30 минут после оплаты.

Пожалуйста, укажите откуда вы узнали о сайте!



© 2008-2021 Cервис помощи студентам в выполнении работ
.