ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 6
1.1. Молочнокислые пробиотические культуры и их применение в
производстве 6
1.2. Морфофизиологическая характеристика молочнокислых
бактерий 10
1.3. Аутэкология молочнокислых микроорганизмов 21
1.4. Технологические характеристики молочнокислых
микроорганизмов 30
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 40
2.1. Объекты исследования 40
2.2. Условия исследования, оборудование 42
2.3. Статистический метод обработки полученных данных 46
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 48
3.1. Влияние различных сахаров и их концентраций на нарастание
биомассы бифидобактерии в жидкой питательной среде 48
3.2. Влияние кислот и pH среды на рост колоний бифидобактерий 50
3.3. Статистический анализ эксперимента 52
ВЫВОДЫ 54
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Для здоровья человека и поддержания активной жизнедеятельности важным является сбалансированное питание высокого качества, которое необходимо как для нормального функционирования организма в целом, так и для создания устойчивости к воздействию вредных факторов окружающей среды. Важную роль при этом играют молочнокислые пробиотические бактерии. Бифидобактерии входят в группу классических пробиотиков - микроорганизмов кишечного происхождения, регулярный приём которых оказывает благоприятное действие на жизнедеятельность организма человека [34].
Большое значение для пищевой промышленности имеют молочнокислые и пробиотические микроорганизмы, поскольку занимают ключевую позицию в производстве молочнокислых продуктов (простокваши, кефира, йогурта, ацидофилина).
Разнообразные технологические решения в области масштабного промышленного производства и применения натуральных йогуртов и других молочнокислых продуктов - биокорректоров открывают новые этапы научно-технического прогресса не только в нашей стране, но и для всего мирового сообщества. Такая биопродукция обладает высокой конкурентной способностью на мировом рынке благодаря стопроцентной натуральности, гарантии безвредности, высокой биологической и социально-экономической значимости, а также довольно низкой себестоимости [14].
В настоящее время наметилась тенденция в разработке и внедрении кисломолочных продуктов с широким спектром заквасочной микрофлоры, продукты метаболизма которой играют важную роль в профилактике различных заболеваний. Перспективным является конструирование новых функциональных продуктов на основе молочного сырья. Разработка технологий их получения для населения, проживающего в регионах с неблагоприятной экологической обстановкой, а также лиц, предрасположенных к заболеваниям желудочно-кишечного тракта.
Известно, что в толстом кишечнике человека обитают одни из наиболее полезных молочнокислых пробиотических бактерий - бифидобактерии и лактобактерии. Бифидобактерии вырабатывают некоторые ферменты из класса гидролаз, расщепляющие лактоз содержащие вещества, выделяя при этом энергию для их роста и размножения и органические кислоты, в частности молочную, препятствующие развитию многих патогенных микроорганизмов. Функциональные продукты питания, предназначенные для различных групп населения, способствуют сохранению здоровья людей за счет сбалансированного состава пищевых веществ, продуцируемых этими микроорганизмами. Самыми важными и популярными пробиотическими культурами, из которых состоят многие препараты и молочные продукты, являются лактобактерии и бифидобактерии [5].
Положительное влияние на жизнедеятельность человека пробиотиков, содержащих эти микроорганизмы, может быть использовано в промышленных условиях для производства биомассы клеток с последующим использованием молочнокислых бактерий в соответствующих пищевых производствах [52].
Микроорганизмы широко применяются в различных пищевых и производствах, в частности в заквасках кисломолочных продуктов, в том числе и в йогуртовых. В производственных условиях заквасочные культуры подвергаются воздействию различных физико-химических факторов производства и отдельных компонентов изготавливаемой продукции, что вынуждает их к необходимости выработке соответствующих защитных механизмов и адаптации к окружающей среде [22, 54].
Среди наиболее важных факторов, влияющих на эффективность пробиотических штаммов, многие авторы отмечают необходимость сохранения жизнеспособности клеток при прохождении желудочно-кишечного тракта и устойчивость к кислотному стрессу [14].
Актуальность данной работы заключается важности установления влияния различных компонентов йогурта на жизнедеятельность молочнокислых бактерий, их адаптацию и увеличение биомассы в технологической среде. Исследование и результаты выполненного эксперимента актуальны не только для данной работы, но и для различных производств, заинтересованных в улучшении качества выпускаемых ими кисломолочной продукции, содержащие, в качестве закваски молочнокислые микроорганизмы. Наполнители не должны затруднять нормальный рост и развитие микроорганизмов [59].
Учитывая вышесказанное цель нашей работы - изучить влияние широко применяемых компонентов йогуртов - кислот и сахаров на вид Bifidobacterium longum.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
- провести анализ отечественный и зарубежных литературных данных по изучаемой проблеме и определить физиолого-биохимические аспекты вида B. longum;
- выявить влияние концентраций различных сахаров, как одного из самых частых наполнителей йогурта, на накопление биомассы B. longum;
- проанализировать действие различных пищевых кислот и уровня pH среды на рост колоний B. longum.
1. В результате проведенных исследований, установлено, что в по- литературным данным наиболее часто встречающимися наполнителями в составе кисломолочных продуктов являются сахара, фруктовые наполнители и органические кислоты. Их влияние на заквасочную культуру молочнокислых пробиотических бактерий не всегда может быть положительным, и довольно часто мало изучено.
2. Нами установлено, что наиболее эффективное накопление биомассы клеток бифидобактерий в полужидкой среде при добавлении концентраций различных сахаров, происходит при добавлении 3% глюкозы и 3% фруктозы в среду при этом наблюдается высокий уровень активности бактерий и значительное накопление их биомассы. Необходимо отметить, что содержание 1% фруктозы в среде почти не уступает по нарастанию биомассы, чем в вариантах с 3% глюкозой и 3% фруктозой. Это показывает, что в три раза более выгодно экономически использовать фруктозу, по сравнению с глюкозой.
3. Исследование влияния пищевых кислот и различного уровня pH культивирование бактерий Bifidobacteriumна твердой питательной среде, показало, что критический уровень кислотности среды для исследованного штамма B. longumк растворам лимонного сока, лимонной и уксусной кислот составляет pH 4,3. При понижении кислотности, ингибирование бактерий уменьшается, и их рост становится более выраженным. Кислотность среды 4,8 не препятствует росту колоний B. longum. Выраженной зависимости от вида исследуемой кислоты нами отмечено не было. Разница в вариантах между растворами лимонного сока, лимонной и уксусной кислот с pH 4,3 несущественна .
1. Ананьева Н.В. Изучение процесса культивирования молочнокислых палочек на питательных средах различного состава / Н.В. Ананьева // Переработка молока. - 2007. - №2. - 221 с.
2. Антипова Л.В. Прикладная биотехнология: учебное пособие / Л.В.Антипова, И.А. Глотова, А.И. Жаренов. - Воронеж, 2000. - 332 с.
3. Банникова Л.А. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности: учебное пособие / Л.А. Банникова. - М.: Пищевая промышленность, 1975. - 255 с.
4. Бадретдинова З. А., Канарский А. В. Влияние углеводов цикория
на накопление биомассы Bifidobacterium bifidum. - Вестник
технологического университета. 2015. Т.18, №13. - с. 202-204.
5. Беспоместных К.В. Исследование биохимических,
морфологических и свойства штаммов бактерий рода Lactobacillus / К.В. Беспоместных, А.Г. Галстян, Е.В. Короткая // Техника и технология пищевых производств. - 2011. - №2. - 198 с.
6. Бондаренко В.М. Пробиотики и механизмы их лечебного действия / В.М. Бондаренко, Р.П. Чупринина, Ж.И. Альдушева // Эксперименты клининга, гастроэнтерологии. - 2000. - №3. - 387с.
7. Бондаренко, В.М. Иммуностимулирующее действие
лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 1998. - №5. - 109 с.
8. Божко О.Ю., Шуваева Г.П., Корнеева О.С. Изучение
пребиотических свойств заменителя сахара изомальтулозы в условиях in vitro // Современные проблемы науки и образования. - 2011. - № 5.
9. Бухарин О.В., Гинцбург А.Л., Романова Ю.М., Эль-Регистан Г.И. Механизмы выживания бактерий. М.: Медицина. 2005. 367 с.
10. Бывайлова Е. А. Разработка технологии обогащенного ацидофильного продукта с повышенной биологической ценностью и пребиотическими свойствами. Автореф. дис. канд. техн. наук.: 05.18.04. - пос. Персиановский, 2014. - 18 с.
11. Глушанова Н.А. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лактобацилл хозяина в условиях совместного культивирования in vitro / Н.А. Глушанова, Б.А. Шендеров // Микробиология. - 2005. - №2. - 153 с.
12. Ганина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии: Монография. М.: МГУПБ, 2001. 122 с
13. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека и необходимость ее оптимизации.- В кн. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. ( ред. Никитин ). М., 2005.- 488 с.
14. Горбатова К.К. Биохимия молока и молочных продуктов: учебник / К.К. Горбатова. - М.: Колос, 1997. - 288 с.
15. Гореликова Г.А. Основы современной пищевой биотехнологии: учебное пособие / Г.А. Гореликова. - Кемерово, 2004. - 100 с.
16. Гиринович, О. О тенденциях в пищевой промышленности [Текст] / О. Гиринович // Молочная промышленность - 2008. -№3. - С. 77.
17. Гринвич А.Г. Молочные бактерии: Монография/ А.Г. Гриневич.- Минск: Высшая школа, 2008, 164 с.
18. Дзержинская И.С. Питательные среды для выделения и культивирования молочнокислых микроорганизмов: учебное пособие / И.С. Дзержинская. - Астрахан. гос. техн. ун-т. - Астрахань: Изд-во АГТУ, 2008. - 348 с.
19. Блинов Н.П. Основы биотехнологии: Учебник для студентов институтов, аспирантов и практических работников. - СПб.: Наука, 1995. - 600 с.
20. Емельяненко В.А., Королюк А.М. Зависимость
жизнедеятельности бифидобактерий от кислотности среды культивирования // Наука и современность. - 2010, -№ 2-1. - с 23-28.
21. Емцев В.Т., Мишустин Е.Н - 8-е изд., испр. и доп. - М.: Издательство Юрайт,2014 - 445 с.
22. Еремина И.А. , Кригер О.В./ Общая микробиология: учебное пособие Кемеровский технологический институт пищевой промышленности Кемерово, 2002.- 112 с.
23. Квасников Е.И., Нестеренко О.А.: «Наука», 1975,
Молочнокислые бактерии и пути их использования - 254 с.
24. Конькова Н.К. Пути усовершенствования питательных сред, используемых в технологии производства медицинских и ветеринарных пробиотиков / Автореф. дисс. канд. биол. наук. - Н. Новгород, 2002. - 21 с.
25. Крючкова, В.В. Функциональный ацидофильный продукт на основе растительных компонентов [Текст] / В.В. Крючкова, Е.А. Бывайлова, Г.Д. Фирсова, А.В. Черкашин // Пищевая промышленность №11. - 2012. - С. 54- 56
26. Кусь Г.Н. Методы исследования молока и молочных продуктов: учебник для вузов / Г.Н. Крусь, А.М. Шалыгина, З.В. Волокитина. - М.: Колос, 2000. - 368 с.
27. Лянная А.М., Интизаров М.М., Донских Е.Е. Биологические и экологические особенности рода Bifidobacterium.- В кн.: Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве (ред. Никитин). М.,2006.- 875 с.
28. Лысенко, Ю.А. Подбор оптимальной питательной среды для культивирования, концентрирования и высушивания клеток Lactobacillus acidophilus/ Ю.А. Лысенко, А.В. Лунева // КубГАУ. - 2014. - №102(8). - С. 2¬3.
29. Младзиевская Ю.А. Совершенствование биотехнологического производства и методов контроля качества пробиотиков на основе бифидобактерий и лактобацилл: автореф. дисс. ... канд. биол. н. / Ю.А. Младзиевская. - СПб., 2005. - 22 с.
30. Манвелова М.А., Плясунова Н.Г., Чешева В.В. Лечебно¬диетические кисломолочные продукты питания. - В кн.: Медицинские аспекты микробной экологии (ред. Б.А.Шендеров). М.,1992. т.6.- 169 с.
31. Марьин В.А. Исследование схем последовательности фаз роста периодической культуры бифидобактерий или лактобактерий / В.А. Марьин, Д.В. Харитонов // Техника и технология пищевых производств. - 2010. - №4. - 103 с.
32. Мирошникова Е.П. Микробиология молока и молочных продуктов: электронное учебное пособие - Оренбург: ГОУ ОГУ, 2005. - 135 с.
33. Нетрусов А.И., Котова, И.Б.. - микробиология учебник для студ. высших учебных заведений: издательский центр «Академия». 2006 -352 с.
34. Новомлинская В.Н., Серикова Н.В. Зависимость устойчивости бифидобактерий от pH среды в условиях in vitro [Электронный ресурс]. Вопросы науки и образования. - № 6 (7) -2017 URL:
http:// scientificpublication.ru/h/arkhiv-zhurnala-voprosy-nauki-i obrazovaniya.html
35. Овсянников Ю. С. Изучение биологических свойств
лактобактерий / Ю. С. Овсянников, В. Е. Романов, И. В. Дармов // Современные научные тенденции в животноводстве. Ч. 2. Ветеринарная медицина: Сб. статей Межд. научно-практической конференции,
посвящённой 100- летию со дня рождения П. Г. Петского. - Киров, 2009. - С. 194-197.
36. Овсянников Ю. С. Оценка биологических свойств культур лактобактерий и сенной палочки /Ю. С. Овсянников //Ветеринарная медицина№ 1-2. - 54 с.
37. Остроумов Л.А. Питательные среды для бифидобактерий / Л.А. Остроумов, А.Ю. Просеков, М.Г. Курбанова, О.В. Козлова // Молочная промышленность. - 2010. - №1. - 121 с.
38. Палладина О.К. Биология возбудителей молочнокислого брожения. - Л.: Пищепромиздат, 2006.-120 с.
39. Панова Н.В. Разработка нового стимулятора роста микроорганизмов и изучение его влияния на их биологические свойства на примере некоторых вакцинных штаммов бактерий: дис...канд.биол. наук: 03.00.23, 03.00.07 / Н.В.Панова. - Ставрополь, 2006. - 173 с.
40. Перфильев Г. Д. Бактериальные закваски и концентраты в биотехнологии сыроделия. Научные и практические аспекты // Сб. материалов международного специализированного научно-практического семинара «Бактериальные закваски и биологические средства, применяемые в производстве ферментированных молочных продуктов в России». - Углич, 2005. - С. 9-14.
41. Полищук П.К. Микробиология молока и молочных продуктов: учебник, П.К. Полищук, Э.С. Дербинова, Н.Н. Казанцева. - М.: Пищевая промышленность, 2001. 236 с.
42. Рамонова Э.В. Характеристика штаммов лактобактерий / Э.В Рамонова Р.Г. Кабисов, Б.Г. Цугкиев // Молочная промышленность. - 2009. - №2. - 43 с.
43. Раскошная Т.А. Питательные среды для культивирования ацидофильной молочной палочки / Т.А. Раскошная, В.Ф. Семенихина // Молочная промышленность. - 2010. - №11. - 139 с.
44. Сборник инструкций по селекции молочнокислых бактерий и подбору заквасок для молочнокислых продуктов. М.: ВНИМИ, 2009. 145 с.
45. Светлакова Е.В., Ожередова Н.А., Веревкина М.Н., Кононов А.Н. использование молочнокислых бактерий в биотехнологических процессах // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 3 - 158 с.
46. Серебренников В.М., Кисриева Ю.С., Загустина Н.А. и др. Образование диацетила и ацетоина производственными штаммами лактококков в различных условиях выращивания //Прикладная биохимия и микробиология.-2003.-Т.34, №3.-280 с.
47. Сиротин А.А. Практикум по биологии. - Белгород.: Изд. БелГУ. 2003.с 6 - 9.
48. Скородумова А.М. Практическое руководство по технической микробиологии молока и молочных продуктов: / А.М. Скородумова. - М.: Пищепромиздат, 2006. 306 с.
49. Сорокина Н. П. Ассортимент бактериальных концентратов «Экспериментальной биофабрики» ВНИИМС // Сб. материалов международного специализированного научно -практического семинара «Бактериальные закваски и биологические средства, применяемые в производстве ферментированных молочных продуктов в России». - Углич, 2005. - с.76-79.
50. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов / П.П. Степаненко. - М.: Лира, 2002. - 413 с.
51. Технология получения посевных культур лактобактерий / И.В. Тихонов, Ю. С. Овсянников, В. Г. Комоско и др. // Ветеринарная медицина. - 2009.- № 1-2. - 54 с.
52. Функ И.А., Иркитова А.Н. Биотехнологический потенциал бифидобактерий // Acta Biologica Sibirica. - 2016. - Т. 2. № 4. - С. 67-79.
53. Харченко Н.В. Выделение бифидобактерий и изучение их пробиотических свойств при длительном хранении.
54. Шурыгин А.Я, Злищева Э.И. Использование молочнокислых микроорганизмов и продуктов их метаболизма. - Краснодар: Совет. Кубань, 2007. -297 с.
55. Garro Marisa S., De Valdez Graciela F., Oliver Guillermo, de Giori Graciela S. Purification of a-galactosidase from Lactobacillus fermentum //
J.Biotechnol. 1996. - 45, № 2. - 109 Р.
56. Goderska K. Comparison of the growth of Lactobacillus Acidophilus and Bifidobacterium bifidum species in media supplemented with selected saccha¬rides including prebiotics Goderska K., Nowak J., Czarnecki Z. // Acta Sci. Pol., Technol. Aliment. - № 7(2), 2008. - P.5-20
57. Vlasenko V.V., Kryzhak L.M. Forming of probiotic properties of yo¬gurt byusing of syrup based on extracts of Echinacea Науковий тсник HbeiBCbKoro нацюнального ушверситету ветеринарно! медицини та бютехнологш iменi С.З. Гжицького. 2014. Т. 16. № 2-4 (59). С. 26-32.
58. Laere, K.M. Transglycosidase activity of Bifidiobacterium adolescen- tis DSM 20083 galactosidase / K.M. Laere et al // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1999. - V. 52. -P. 681-688
59. Tower, W.L. The mechanism of evolution Leptinotarsie Copn / W.L. Tower // Inst. Publ. - 1918. - № 263. - 384 p.
60. Zhang, S. Toxic Effects of Ag(I) and Hg(II) on Candida albicans and C.maltosa: a Flow Cytometric Evaluation / S. Zhang, A.Jr. Crow // Applied and Environmental Microbiology. - 2001. - № 9. - Р. 4030 - 4035.