Введение 5
Глава 1. Обзор литературы 6
1.1 Гомогенная микроэкстракция и способы ее реализации 6
1.1.1 Гомогенная жидкостная микроэкстракция с высаливанием/
высахариванием экстрагента 7
1.1.2 Гомогенная жидкостная микроэкстракция с выделением фазы экстрагента
из трехкомпонентной системы путем высаливания или разбавления водой 13
1.1.3 Гомогенная жидкостная микроэкстракция, основанная на изменении
температуры системы 14
1.1.4 Гомогенная жидкостная микроэкстракция, основанная на изменении рН 15
1.2 Методы определения офлоксацина 19
Заключение 27
Глава 2. Методика экспериментальных исследований 28
2.1 Оборудование 28
2.2 Реактивы и материалы 28
2.3 Приготовление растворов 29
2.4 Отбор и подготовка проб 31
Глава 3. ВЭЖХ определение офлоксацина в моче с on-line микроэкстракционным концентрированием 32
3.1 Теоретические аспекты и предполагаемый механизм гомогенной жидкостной
микроэкстракции офлоксацина с разделением фаз углекислым газом 32
3.2 Иллюстрация аналитических возможностей предложенного метода 33
3.3 Оптимизация параметров, влияющих на эффективность микроэкстракции ....34
3.3.1 Выбор метода анализа 34
3.3.2 Выбор оптимальных длин волн возбуждения и эмиссии 35
3.3.3 Выбор оптимальной подвижной фазы 35
3.3.4 Выбор оптимального экстрагента 36
3.3.5 Влияние объема экстрагента 37
3.3.6 Влияние объема раствора карбоната натрия 37
3.3.7 Влияние объема пробы 38
3.3.8 Влияние минеральной кислоты 39
3.3.9 Влияние рН раствора 40
3.3.10 Влияние концентраций растворов карбоната натрия и серной кислоты ..41
3.3.11 Влияние гидродинамических параметров 42
3.4 Мешающее влияние компонентов мочи 43
3.5 Аналитические характеристики методики 43
3.6 Проверка правильности методики референтным методом 45
Выводы 47
Благодарности 48
Список литературы 49
В настоящее время в экспериментальной и клинической медицине резко возрос интерес к надежным методам исследования качественных и количественных характеристик биологических жидкостей с целью ранней диагностики различных патологических изменений в организме человека. Постоянно возрастающее число клинических анализов требует разработки новых автоматизированных и миниатюризированных подходов, которые позволяют повысить не только надежность анализа, но и его производительность, а также снизить трудозатраты и расходы реагентов.
Несмотря на стремительное совершенствование аналитического оборудования, анализ биологических жидкостей требует проведения стадии пробоподготовки, основным этапом которой является жидкостная или твердофазная экстракция, обеспечивающая выделение и концентрирование целевого аналита. Необходимость данной стадии анализа диктуется низкими концентрациями аналита в пробах и/или наличием большого числа мешающих компонентов сложной по составу матрицы.
Целью данной работы была разработка автоматизированной методики ВЭЖХ определения офлоксацина в моче, включающей гомогенную микроэкстракцию.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: обосновать общую схему нового комбинированного микроэкстракционного метода - гомогенной жидкостной микроэкстракции с разделением фаз углекислым газом, оптимизировать условия микроэкстракционного выделения офлоксацина для последующего ВЭЖХ определения, апробировать разработанную методику на реальных объектах и подтвердить ее правильность референтным методом.
1. Обоснована общая схема нового комбинированного микроэкстракционного метода - гомогенной жидкостной микроэкстракции с разделением фаз углекислым газом;
2. Оптимизированы основные параметры, влияющие на эффективность микроэкстракции: тип экстрагента, рН микроэкстракции, тип минеральной кислоты, используемой для разделения, концентрации и объемы реагентов и пробы, а также условия элюирования аналита из хроматографической колонки;
3. Разработана автоматизированная методика ВЭЖХ определения содержания офлоксацина в моче с on-line микроэкстракционным концентрированием; предел обнаружения для офлоксацина составил 0,01 мкМ. Время одного анализа - 20 минут;
4. Разработанная методика апробирована на реальных пробах мочи, а ее правильность подтверждена флуориметрическим методом
