ВВЕДЕНИЕ 6
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ 9
1. Литературный обзор 9
1.1 Свечение высших грибов 9
1.2 Культивирование светящихся грибов в искусственных условиях 11
1.3 Изучение применимости грибного свечения в аналитике 12
1.4 Исследования люминесцентной системы светящихся высших грибов .. 13
1.5 Представления о субстрате люминесцентной реакции высших грибов . 17
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 21
2. Материалы и методы 21
2.1 Объекты исследования и условия их культивирования 21
2.2 Оценка образцов мицелия N. nambi и A. borealis (внешний вид и
световая эмиссия) при разных способах культивирования грибов 23
2.3 Выделение грибных люминесцентных систем из мицелия N. nambi и
A. borealis 23
2.4 Измерение люминесценции экстрактов из мицелия N. nambi и
A. borealis, содержащих светоизлучающие системы 25
2.5 Оценка активности люминесцентных систем из грибов N. nambi и
A. borealis при разных значениях рН 26
2.6 Изучение активности люминесцентных систем N. nambi и A. borealis при
добавках разных компонентов 26
2.7 Выделение активаторов люминесценции из мицелия N. nambi и
A. borealis 28
2.8 Изучение некоторых свойств активаторов люминесценции, выделенных
из мицелия N. nambi и A. borealis 29
3.1 Рост и люминесценция мицелия грибов N. nambi и A. borealis при
разных режимах культивирования 30
3.2 Выделение грибных люминесцентных систем из мицелия N. nambi и
A. borealis и их некоторые свойства 34
3.3 Стабильность люминесцентных систем из грибов N. nambi и A. borealis 38
3.4 Активность люминесцентных систем N. nambi и A. borealis в
зависимости от рН 39
3.5 Гипотеза о механизме люминесценции высших грибов с участием
системы цитохрома Р-450 40
3.6 Активность люминесцентных систем в присутствии НАДФН и НАДН 42
3.7 Эффект флуконазола на активность люминесцентных систем 44
3.8 Выделение активаторов люминесценции из мицелия N. nambi и
A. borealis 47
3.8.1 Активатор светоизлучения из гриба N. nambi - намбин и его некоторые
физико-химические свойства 47
3.8.2 Активатор люминесценции из гриба A. borealis и его некоторые
свойства 49
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 51
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 54
Биолюминесценция (излучение видимого света живыми организмами) - достаточно широко распространенное явление в царстве грибов [1,2,4]. К настоящему времени известно более 80 видов высших грибов, обладающих биолюминесценцией [8]. Светящиеся грибы обнаружены в Северной и Южной Америке, Европе, Азии (включая Сибирь), Австралии, Африке. Этот список постоянно пополняется, поскольку обнаруживаются новые виды светящихся грибов, особенно в субтропической и тропической зонах Земного шара, где имеются наиболее благоприятные условия для их обитания. Так, в Бразилии недавно обнаружено семь новых видов светящихся грибов, которые отнесены к семейству Mycena [9].
Изучение грибной биолюминесценции проводится около 200 лет [1,2,4]. Однако природа этого феномена в царстве грибов остается не установленной, в отличие от свечения бактерий и животных, для многих видов которых механизм излучения расшифрован за последние десятилетия и явился основой новой отрасли - биолюминесцентной аналитики [4,38-45]. Структура и свойства люминесцентной системы грибов и механизм свечения этих живых организмов до сих пор не расшифрованы. Специалисты, работающие в данной области, до сих пор не пришли к единому мнению о структурно¬функциональной организации грибной люминесцентной системы и механизме светоизлучения. Относительно механизмов грибного свечения в настоящее время есть два мнения: 1 - свечение определяется функционированием системы люцифераза - люциферин [15-19]; 2 - свечение связано с окислением органических субстратов оксидазами и происходит без участия специализированного фермента [20-24].
Приведенные выше факты позволяют сделать вывод, что изучение структуры и свойств люминесцентной системы высших грибов имеет не только фундаментальное значение для развития представлений о механизме свечения этих живых объектов, но и практическую ценность для оценки возможности их применения для аналитики. Из этого следует, что получение новых знаний о люминесцентных системах высших грибов, представляющих разные таксоны, будет способствовать:
1 - установлению структурно-функциональной организации грибной люминесцентной системы и расшифровке механизма свечения;
2 - дополнению и развитию представлений о биолюминесценции, как природном явлении;
3 - оценке перспектив применения грибных светоизлучающих систем в биолюминесцентной аналитике.
На основании вышеизложенного, основная цель диссертационной работы была формулирована как «Проведение сравнительного анализа люминесценции высших грибов Neonothopanus nambi и Armillaria borealis».
Указанная цель достигалась решением следующих экспериментальных задач:
1. Оптимизация условий и способов культивирования грибов N. nambi и A. borealis в лабораторных условиях для получения биомассы грибного мицелия с высоким уровнем свечения.
2. Выделение из биомассы светящегося мицелия изучаемых видов грибов люминесцентных систем, обладающих функциональной активность in vitro, и их свойства:
а. зависимость интенсивности свечения от рН;
б. стабильность при разных способах хранения;
в. эффекты разных химических веществ (НАД(Ф)Н, Н2О2, флуконазол) на люминесцентную активность грибных излучающих систем.
3. Выделение из биомассы мицелия грибов N. nambi и A. borealis активаторов люминесценции и исследование их некоторых свойств.
Магистерская диссертация выполнена в лаборатории нанобиотехнологии и биолюминесценции Института биофизики СО РАН в рамках программы изучения биолюминесценции высших грибов.
В результате сравнительных исследований люминесценции двух видов светящихся высших грибов (Neonothopanus nambi и Armillaria borealis) в работе были получены результаты принципиального характера, которые дополняют и развивают преставления о молекулярной организации люминесцентной системы грибов и механизме их свечения. К наиболее важным из них следует отнести: выделение из изучаемых видов грибов люминесцентных систем, функционально активных in vitro; получение экспериментальных фактов в пользу того, что данные системы представляют собой устойчивые комплексы, включающие все (белковые и небелковые) компоненты, обеспечивающие свечение. Это позволило высказать гипотезу о возможном участии системы цитохрома Р-450 в излучении высших грибов. Не менее важным является обнаружение в экстрактах изучаемых грибов низкомолекулярных компонентов, активирующих люминесцентные системы. В целом, совокупность полученных экспериментальных данных открывает перспективы для дальнейшего изучения структуры и свойств отдельных компонентов излучающих систем и активаторов люминесценции.
Результаты проведенных при выполнении магистерской диссертации исследований позволяют сделать следующие выводы:
1. Оптимизированы условия и способы стационарного и глубинного культивирования светящихся высших грибов Neonothopanus nambi и Armillaria borealis, позволяющие в лабораторных условиях осуществлять наработку биомассы пленочного и глобулярного мицелия, обладающей продолжительным и устойчивым свечением.
2. Из двух видов светящихся высших грибов (N. nambi и A. borealis) впервые получены экстракты, содержащие люминесцентные системы, проявляющие функциональную активность in vitro, что обеспечивает продолжительное свечение экстрактов. Установлено, что выделенные системы
3. Установлено, что выделенные люминесцентные системы проявляют функциональную активность после длительного (до года и более) хранения в замороженном и лиофильно высушенном виде. Выявлено, что оптимум активности систем из грибов N. nambi и A. borealis наблюдается в диапазонах значений рН 7.2 - 7.5 и 7.5 - 8.0, соответственно Показано, что обе системы активируются НАДФН и НАДН, причем больший уровень световой эмиссии наблюдается при добавлении НАДФН. Установлено ингибирование активности систем флуконазолом.
4. На основании совокупности полученных данных высказана гипотеза об участии системы цитохрома Р450 в механизме свечения высших грибов.
5. Из мицелия грибов N. nambi и A. borealis выделены экстракты, содержащие активаторы свечения. Уставлено, что оба активатора являются низкомолекулярными, термоустойчивыми соединениями, стимулирующими излучение. Показано, что содержащий активатор экстракт из гриба N. nambi имеет в спектре поглощения два пика в коротковолновой области - 220 нм и 260 нм. Установлено, что экстракт из данного вида гриба обладает флуоресценцией в видимой области с максимумом световой эмиссии при 520 - 540 нм.
1. Harvey, E.N. Bioluminescence / E.N. Harvey // Academic Press, New York, - 1952.
2. Harvey E.N. A History of Luminescence from Ancient Times to 1900. J.H. Furst Company, Baltimore, EUA. 1957.
3. Ячевский, А.А. Основы микологии / А.А Ячевский // Москва- Ленинград: Сельхозгиз. - 1933. - С. 1036.
4. Shimomura, O. Bioluminescence : chemical principles and methods / O. Shimomura, - Singapore: World Scientific Publishing, 2006. - P. 266-300.
5. Wassink, E.C. Luminescence in fungi / E.C. Wassink. - In: Herring P.J. (ed.) Bioluminescence in action. London: Academic Press. - 1978. - P.171-197.
6. Herring, P.J. Luminous fungi / P.J. Herring // Mycologist. - 1994. - V.8. - P.181-183.
7. Desjardin, D.E. Fungi bioluminescence revisited / D.E. Desjardin, A.G. Oliveira, C.V. Stevani // Photochem. Photobiol. Sci. - 2008. - V.7. - P.170-182.
8. Выдрякова, Г.А. Светящиеся грибы и перспективы их использования / Г.А. Выдрякова, Н.В. Псурцева, Н.В. Белова, Н.В. Пашенова, И.И. Гительзон // Микология и фитопатология. - 2009. - Т.43, №5. - С. 369-376.
9. Desjardin, D.E. Luminescent Mycena: new and noteworthy species / D.E. Desjardin, B.A. Perry, D.J. Lodge, C.V. Stevani, E. Nagasawa // Mycologia. - 2010. - V.102. - P.459-477.
10. Endo, M. Fluorescent constituents and cultivation of Lampteromyces japonicus / M. Endo, M. Kajiwara, K. Nakanishi // Chem. Commun. - 1970. - P.309¬310.
11. Bermudes, D. Effects of culture conditions on mycelial growth and luminescence in Panellus stipticus / D. Bermudes, V.L. Gerlach, K.H. Nealson // Mycologia. - 1990. - V.82. - P.295-305.
12. Weitz, H.J. The effect of culture conditions on the mycelial growth and luminescence of naturally bioluminescent fungi / H.J. Weitz, A.L. Ballard, C.D. Campbell, K. Killham // FEMS Microbiol. Lett. - 2001. - V.202. - P.165-170.
13. Mendes, L.F. Influence of culture conditions on mycelial growth and bioluminescence of Gerronema viridilucens / L.F. Mendes, E.L. Bastos, D.E. Desjardin, C.V. Stevani // FEMS Microbiol. Lett. - 2008. - V.282. - P.132-139.
14. Дао, Т.В. Культивирование светящегося гриба Omphalotus aff. illudent (Neonothopanus nambi) / Т.В. Дао // Биотехнология. - 2009. - N6. - С.74¬
78.
15. Airth, R.L. Light emission from extracts of luminous fungi / R.L. Airth, W.D. McElroy // J. Bacteriol. - 1959. - V.77. - P.249-250.
16. Airth, R.L. Some aspects of fungal bioluminescence / R.L. Airth, G.E. Foerster // Cell. Comp. Physiol. - 1960. - V.56. - P.173-182
17. Камзолкина, О.В. К вопросу о природе люциферазы из биолюминесцентного гриба Armillariella mellea / О.В. Камзолкина, B.C. Данилов, Н.С. Егоров // Доклады Академии наук СССР. - 1983. - Т.271. - С.750¬752.
18. Oliveira, A.G., The enzymatic nature of fungal bioluminescence / A.G. Oliveira, C.V. Stevani // Photochem. Photobiol. Sci. - 2009. - V.8. - P.1416-1421.
19. Oliveira, A.G. Evidence that a single bioluminescent system is shared by all known bioluminescent fungal lineages / A.G. Oliveira, D.E. Desjardin, B.A. Perry, C.V. Stevani // Photochem. Photobiol. Sci. - 2012. - V.11. - P.848-852.
20. Shimomura, O. Chemiluminescence of panal (a sesquiterpene) isolated from the luminous fungus Panellus stipticus / O. Shimomura // Photochem. Photobiol. - 1989. - V.49. - P.355-360.
21. Бондарь, В.С. О люминесцентной системе светящегося гриба Neonothopanus nambi / В.С. Бондарь, А.П. Пузырь, К.В. Пуртов, С.Е. Медведева, Э.К. Родичева, И.И. Гительзон // ДАН. - 2011. - Т.438. - С.705-707.
22. Гительзон, И.И. Хемилюминесцентное свечение тканей плодовых тел высших грибов / И.И. Гительзон, В.С. Бондарь, С.Е. Медведева, Э.К. Родичева, Г.А. Выдрякова // ДАН. - 2012. - Т.443. - С.624-627.
23. Bondar, V.S. A study of Neonothopanus nambi luminescent system / V.S. Bondar, A.P. Puzyr, K.V. Purtov, S.E. Medvedeva, E.K. Rodicheva, G.S. Kalacheva, J.I. Gitelson // Luminescence. - 2012. - V.27. - P.101-102.
24. Gitelson, J. I. Chemiluminescence of higher fungi / J.I. Gitelson, V.S. Bondar, S.E. Medvedeva, E.K. Rodicheva, G. A. Vydryakova // Luminescence. - 2012. - V.27. - P.118.
25. Kawamura, S. Studies on the luminous fungi Pleurotus japonicus sp. nov. / S. Kawamura // J. Coll. Sci. Tokyo. - 1915. - V.35. - P.1-29.
26. Shimomura, O. The role of superoxide dismutase in regulating the light emission of luminescent fungi / O. Shimomura // Exp. Botany. - 1992. - V.43. - P.1519-1525.
27. Horswell, J. Impact of heavy metal amended sewage sludge on forest soils as assessed by bacterial and fungal biosensors / J. Horswell, H.J. Weitz, H.J. Percival, T.W. Speir // Biol. Fertil. Soils. - 2005. - V.42. - P.569-576.
28. Brock, M. Bioluminescent Aspergillus fumigatus, a new tool for drug efficiency testing and in vivo monitoring of invasive aspergillosis / M. Brock, G. Jouvion, S. Droin-Bergere, O. Dussurget, M.A. Nicola, O. Ibrahim-Granet // Appl. Environ. Microbiol. - 2008. - V.74. - P.7023-7035.
29. Van der Burg, A. Spektrale onderzoekingen over chemo- en bioluminescentie / Van der Burg A. // Thesis, University of Utrecht, Rijks- Universiteit te Utrecht.- 1943.
30. Lavelle, F. Luminescence des champignons lumineux / Lavelle M.M.F., Durosay P., Michelson A.M. // C. R. Acad. Sci. Paris. 275(Serie D): 1227-1230. - 1972.
31. O'Kane, D. J. Spectral analysis of bioluminescence of Panellus stypticus / O'Kane D.J., Lingle W.L., Porter D., Wampler J.E. // Mycologia. - 1990- V 82. - P. 607-616.
32. Vydryakova, G.A. Intergenomic and intragenomic ITS sequence heterogeneity in Neonothopanus nambi (Agaricales) from Vietnam / Vydryakova G.A., Van Dao T., Shoukouhi P., Psurtseva N.V., Bissett J. // Mycology. - 2011. - V.3. - P.89-99.
33. Medvedeva, S. E. Growth and light emission of luminous basidiomycetes cultivated on solid media and in submerged culture / Medvedeva S.E., Artemenko K.S., Krivosheenko A.A., Rusinova A.G., Rodicheva E.K., Puzyr A.P., Bondar V.S. //Mycosphere. - 2014. - V. 5(4). - P. 565-577.
34. Mihail, J.D. Bioluminescense ia wildespread within the Kingdom of fung / J.D. Mihail, J.N. Bruhn // Opera Mycologica. - 2007. - V.1. - P.28-33.
35. Bermudes, D. Low-level bioluminescence detected in Mycena haematopus Basidiocarps / D. Bermudes., R.H. Petersen, K.H. Nealson // Mycologia. - 1992. - V.84. - P.799-802.
36. Lingle, W.L. Effects of veratryl alcohol on growth and bioluminescence of Panellus stipticus / W.L. Lingle // Mycol. Soc. Am. Newslett. - 1989. - V.40. - P.36.
37. Lingle, W.L. Bioluminescence and ligninolysis during secondary metabolism in the fungus Panellus / W.L. Lingle // J. Biolum. Chemilum. - 1993. - V.8. - P.100.
38. Morin, J.G. Coelenterate bioluminescence / J.G. Morin // In: Coelenterate Biology: Reviews and Perspectives. // Muscatine L. and Lanhoff H.M. (eds.). New York: Academic Press. - 1974. - P.397-438.
39. Blinks, J.R. Photoproteins as biological calcium indicators / J.R. Blinks, F.G. Prendergast, D.G. Allen // Pharmacol. Rev. - 1976. - V.28. - P.1-93.
40. Blinks, J.R. Measurements of Ca2+ concentrations in living cells / J.R. Blinks, W.G. Wier, P. Hess, F.G. Prendergast // Prog. Biophys. Molec. Biol. - 1982. - V.40. - P.1-114.
41. Угарова, Н.Н. Биолюминесцентные методы анализа в микробиологии / Н.Н. Угарова, Л.Ю. Бровко, И.А. Трдатян, Е.И. Райнина // Прикладная биохимия микробиология. - 1987. - Т.23. - С. 14-24.
42. Гительзон, И.И. Светящиеся бактерии (Кондратьева Е.Н. ред.) / И.И. Гительзон, Э.К. Родичева, С.Е. Медведева и др. // Наука. Новосибирск. - 1984. - C. 277с.
43. Кратасюк, В.А. Использование светящихся бактерий в биолюминесцентном анализе / В.А. Кратасюк, И.И. Гительзон // Успехи микробиологии. - 1987. -Т.21. - С.3-30.
44. Угарова, Н.Н. Биолюминесценция и биолюминесцентный анализ / Н.Н. Угарова, Л.Ю. Бровко, Г.Д. Кутузова // Биохимия. - 1993. - T.53. - С.1351¬1364.
45. Illarionov, B.A. Recombinant obelin: cloning and expression of cDNA, purification and characterization as a calcium indicator / B.A. Illarionov, Frank L.A., V.A. Illarionova V.S. Bondar., E.S. Vysotski., J.R. Blinks // Methods in Enzymology. - 2000. - V.305. - P.223-249.
46. Weitz, H. J., Development of a novel, bioluminescence-based, fungal bioassay for toxicity testing / Weitz H.J. Colin D., Campbell C.D., Killham K. // Environmental microbiology. - 2002. - V. 4. - №. 7. - P. 422-429.
47. Mendes, L. F., Evaluation of metal toxicity by a modified method based on the fungus Gerronema viridilucens bioluminescence in agar medium / Mendes L.F., Stevani C.V. // Environmental Toxicology and Chemistry. - 2010. - V. 29. - №. 2. - P. 320-326.
48. Hollis, R. P. Construction and application of a luminescent eukaryotic biosensor / Hollis R. P. // PhD Thesis, University of Aberdeen. - 1999.
49. Airth, R.L. The isolation of catalytic components required for cell-free fungal bioluminescence / R.L. Airth, G.E. Foerster // Arch. Biochem. Biophys. - 1962. - V.97. - P.567-573
50. Airth, R.L. Enzymes associated with bioluminescence of Panus stipticus luminescens and Panus stipticus nonluminescens / R.L. Airth, G.E. Foerster // J. Bacteriol. - 1964. - V.88. - P.1372-1379
51. Камзолкина, О.В., Получение системы люциферин - люцифераза из гриба Armillariella mellea / О.В. Камзолкина, 3.Э. Беккер, Н.С. Егоров // Биологические науки. - 1984. - № 1. - С.73-77.
52. Dubois, R. Note sur la physiologic des pyrophores / R. Dubois. // C. R. Seanc. Soc. Biol. Fr. - 1885. - V.37. - Р. 559-562
53. Dubois, R. Note sur la fonction photog'enique chez la Pholas dactylus / R. Dubois // C. R. Soc. Biol. - 1887. - V.39. - Р. 564-566
54. Бондарь, В. С. О механизме свечения гриба Neonothopanus nambi / В. С. Бондарь, Э. К. Родичева, С. Е. Медведева, Н. А. Тюлькова, А. Б. Тяглик, Б. А. Шпак, И. И. Гительзон // Доклады академии наук. - 2013. - Т. 449. № 2. - C. 223-227.
55. Puzyr, A.P. Source of light emission in a luminous mycelium of the fungus Panellus stipticus / A.P. Puzyr, A.E Burov, V.S. Bondar / Journal of Research in Biology. - 2013. - № 3. - С. 900-905.
56. Kuwabara, S. Purification and properties of the active substance of fungal luminescence / S. Kuwabara, E.C. Wassink // In: Bioluminescence in Progress. Johnson F.H. and Haneda Y. (eds) Princeton, USA: Princeton University Press. - 1966. - P.233-245.
57. Isobe, M. Lampteromyces bioluminescence. I. Identification of riboflavin as the light emitter in mushroom Lampteromyces japonicus / M. Isobe, D. Uyakul, T. Goto / J. Biolum. Chemilum. - 1987. - V.1. - P.181-188.
58. Isobe, M. Lampteromyces bioluminescence. 2. Lampteroflavin, a light emitter in the luminous mushroom Lampteromyces japonicus / M. Isobe, D. Uyakul, T. Goto // Tetrahedron Lett. - 1988. - V.44. - P.1169-1172.
59. O'Kane, D.J. Spectral studies of fungal bioluminescence. In: Bioluminescence and Chemiluminescence: Fundamentals and Applied Aspects (Campbell A.K., et al. (eds.)) / D.J. O'Kane, B. Fuhrer, W.I. Lingle // Chichester: John Wiley & Sons. - 1994. - P.552-555.
60. Nakamura, H. Panal: a possible precursor of fungal luciferin / H. Nakamura, Y. Kishi, O. Shimomura // Tetrahedron. - 1988. - V.44. - P.1597-1602.
61. Shimomura, O. Superoxlde-triggered chemiluminescence of the extract of luminous mushroom Panellus stipticus after treatment with methylamine / O. Shimomura // J. Exp. Bot. - 1991. - V.42. - P.555-560.
62. Shimomura, O. The role of superoxide anion in bioluminescence / O. Shimomura // In: Frontiers of Photobiology (Shima A. et al. (eds.)). Amsterdam: Elsevier Science Publishers. - 1993. - P. 249-254.
63. Mori, K. Bioluminescence characteristics of the fruiting body of Mycena chlorophos / Mori K., Kojima S., Maki S., Hirano T., Niwa H. // Luminescence. - 2011. - V. 26:604-10. - №. 6. - P. 604-610.
64. Hastings, J.W. Total quantum flux of isotropic sources / J.W. Hastings, G. Weber // J Opt Soc Am. - 1963. - V.53. - Р. 1410-1415.
65. Bondar, V.S. Applications of nanodiamonds for separation and purification of proteins / Bondar, V.S., Pozdnyakova I.O., Puzyr A.P. // Physics of the Solid State. - 2004. -V. 46:758-760. - №. 4. - P. 758-760.
66. Могильная, О.А Общая пероксидазная и каталазная активности светящихся базидиомицетов Armillaria borealis и Neonothopanus nambi в сравнении с уровнем световой эмиссии / Могильная О.А., Ронжин Н.О., Медведева С.Е., Бондарь В.С. // Прикладная биохимия и микробиология . - 2015. - Т. 51. - №. 4. - С. 395-401.
67. Maddy, A.H. Biochemical analysis of membranes / A.H. Maddy (Ed.) // London: Chapman and Hall Ltd. - 1976. - Р. 460.
68. Северин, С.Е. Митохондрии: биохимия и ультраструктура / С.Е. Северин, (редактор) // M.: Наука - 1973. - С. 174.
69. Андрианова, Л.Е. Обезвреживание токсических веществ в организме / Л.Е. Андрианова, С.Н. Силуянова // Биохимия: Учеб. для вузов, Под ред. Е.С. Северина.. М: ГЭОТАР-МЕДИА. - 2003. - С.616-628.
70. Yamada, M. Dynamic interactions of rabbit liver cytochromes P450IA2 and P450IIB4 with cytochrome b5 and NADPH-cytochrome P450 reductase in proteoliposomes / M. Yamada, Y. Ohta, G.I. Bachmanova, Y. Nishimoto, A.I. Archakov, S. Kawato // Biochemistry. - 1995. - V.34. - P. 10113-10119.
71. Schenkman, J.B. Interactions between cytochrome P450 and cytochrome b5 / J.B. Schenkman, I. Jansson // Drug Metab. Rev. - 1999. V.31. - Р. 351-364.
72. Lamb, D. C. Molecular diversity of sterol 14a-demethylase substrates in plants, fungi and humans / Lamb D.C., Kelly D.E., Kelly S.L. // FEBS letters. - 1998. - V. 425. - №. 2. - P. 263-265.
73. Jackson, C. J. Conservation and cloning of CYP51: a sterol 14a- demethylase from Mycobacterium smegmatis / Jackson C.J, Lamb D.C., Marczylo T.H., Parker J., Manning N.L., Kelly D.E., Kelly S.L. // Biochemical and biophysical research communications. - 2003. - V. 301. - №. 2. - P. 558-563.
74. Скворцов, В.С. Азольные ингибиторы цитохрома P450 51A / В.С. Скворцов, И.И. Карузина, А.С. Иванов, А.И. Арчаков // (MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS): Моделирование комплексов и предсказание параметров связывания // http://www.ivtn.ru