Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
ℹ️Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
ВВЕДЕНИЕ 6
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 7
1 Обзор литературы 7
1.1 Хронические миелопролиферативные опухоли 7
1.2 Миелофиброз 7
1.3 Соматические мутации, участвующие в патогенезе миелофиброза 11
1.3.1 Мутации генов сигнальных путей 11
1.3.2 Эпигенетические мутации 14
1.4 ASXL1, его структура функции 15
1.5 Ассоциации генетических аномалий с клиническими особенностями и
прогнозом миелофиброза 18
2 Материалы и методы 20
2.1 Объект исследования 20
2.2 Выделение ДНК с использованием набора «Gene JET Whole Blood
Genomic DNA Purification» 20
2.3 Измерение концентрации ДНК 21
2.4 Проведение ПЦР с использованием электрофоретической детекции... 22
2.5 Чистка продукта ПЦР с использованием реагента ExoSAP-IT 23
2.6 Проведение секвенирующей ПЦР 23
2.7 Проведение очистки сиквенс-продукта 24
2.8 Специализированные программы для обработки полученных
результатов 24
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 26
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 28
📖 Введение
Миелофиброз - это хроническая миелопролиферативная опухоль, которая характеризуется фиброзом костного мозга, спленомегалией, экстрамедуллярным гемопоэзом. Источником опухолевого роста является клональное расстройство полипотентнои гемопоэтической стволовой клетки. Также это редкое заболевание, число впервые выявленных больных в год составляет приблизительно 1:100000 населения. Соотношение женщины: мужчины 2:1, медиана возраста на момент диагностики заболевания равна 61,8 года [7-9].
На данный момент известны драйверные и прогностические мутации при данном заболевании. Среди драйверных мутаций известны мутации в таких генах, как JAK2, CALR, MPL. Встречаемость мутаций при миелофиброзе в гене JAK2 составляет 40-50%, в гене CALR - 35% и в гене MPL - 8%. Среди прогностических мутаций наиболее важное значение при МФ имеют эпигенетические мутации в таких генах, как TET2, DNMT3A, ASXL1, EZH2, IDH1/2. Встречаемость эпигенетических мутаций при МФ разнообразна, но наибольшая встречаемость приходится на ASXL1 (18-22%). Также мутации в гене ASXL1 являются прогностическими. Было показано, что мутации в гене ASXL1 ухудшают выживаемость пациентов с МФ и возрастает риск БТ. Поэтому, очень важно делать скрининг мутаций в гене ASXL1 на ранних стадиях миелофиброза.
Цель данной работы - анализ прогностических соматических мутаций в гене ASXL1 у пациентов с диагнозом миелофиброз. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
1. Разработать технологию для выявления соматических мутаций в гене ASXL 1 методом секвенирования по Сенгеру.
2. Провести анализ мутаций в гене ASXL1 среди пациентов с диагнозом миелофиброз г. Красноярска.
3. Обработать полученные результаты с помощью специализированных программ, позволяющих идентифицировать тип мутации, а также уровень аллельной нагрузки.
4. Оценить влияние обнаруженных мутаций на клиническое состояние пациента с учетом наличия или отсутствия драйверных мутаций.
