Введение 5
2 Материалы и методы 21
2.1 Выделение ДНК из периферической крови по протоколу
DIAtomTMDNAprep 21
2.2 Генотипирование 23
2.2.1. Амплификация 23
2.2.2 Рестрикция 24
2.3 Электрофорез 25
2.3.1 Метод приготовления агарозного геля 25
2.3.2 Электрофорез ДНК в агарозном геле 25
2.4 Статистический анализ 26
3 Результаты и обсуждение 27
3.1 Анализ выборок исследуемых детей, проживающих на территории
Красноярского края 27
3.2 Анализ распределения аллельных вариантов генов цитокинов IL-4 (С-
590Т, С-33Т), IL-5 (С-703Т) у больных с различным уровнем тяжести атопической бронхиальной астмы 28
3.3 Анализ распределения аллельных вариантов генов цитокинов IL-4 (С- 590Т, С-33Т), IL-5 (С-703Т)при различных уровнях контроля над течением бронхиальной астмы 30
3.4 Сравнительная характеристика изученных аллельных вариантов с
распространенностью в других европеоидных популяциях 32
Список сокращений 35
Выводы 36
Список литературы 37
Бронхиальная астма (БА) является одним из наиболее тяжелых аллергических заболеваний в детском возрасте, в ее основе чаще всего лежат атопические механизмы, характеризующиеся рецидивами бронхиальной обструкции [1, 2]. Формирование, развитие и течение АБА зависит от факторов окружающей среды и от генетических признаков.
Патогенетической основой АБА является аллергическое воспаление, но до сих пор до конца не изучены многие этапы формирования и течения заболевания [3]. Возможно, это обусловлено особенностями эндогенной регуляции межклеточных взаимодействий, осуществляемой цитокинами - регуляторами защитных реакций организма.
Цитокины играют существенную роль в контроле всех стадий развития аллергических реакций и воспаления, поэтому анализ регуляции их активности имеет очень большое значение для понимания молекулярных основ патогенеза АБА [4]. Формирование аллергических реакций также осуществляется при участии цитокинов и их взаимодействий между собой [3, 5, 6]. Гены цитокинов характеризуются наличием одного или нескольких структурных полиморфизмов, которые оказывают влияние на функциональную активность или уровень экспрессии кодируемых белков [7]. Полиморфизмы представлены в популяции несколькими разновидностями - аллелями, что обусловливает разнообразие признаков внутри вида. Большую долю в генетические полиморфизмы вносят замены одного нуклеотида на другой, которые осуществляются во всех структурных элементах гена: экзонах, интронах, промоторном регионе, но функциональное значение имеют только полиморфизмы в проморотных регионах.
Выявление взаимосвязей генов, особенностей функционирования цитокинов и факторов риска заболевания поможет понять, как формируется неконтролируемое течение атопической бронхиальной астмы, а также позволит улучшить меры профилактики ее развития. В результате биоинформативного исследования определены гены для БА. Одни из главных вовлекаемых в аллергический процесс цитокинов закодированы на длинном плече 5 хромосомы [8]. Эта область включает всебя кластер генов цитокинов, в том числе генов,кодирующих IL-4, IL-5. Исследования анализа ассоциаций полиморфизмов указанных генов с астмой противоречивы в разных популяциях [9 - 15]. Важно учитывать межпопуляционные и межэтнические особенности в распределении частот исследованных полиморфных вариантов генов цитокинов.В России полиморфизм генов цитокинов в популяциях и у больных астмой практически не исследован.
В связи с этим, целью настоящего исследования было получить распределение аллельных вариантов генов цитокинов IL-4 (С-590Т, e-BBT}, IL-5 (C-703T} у детей больных атопической бронхиальной астмой с различной степенью тяжести и уровнем контроля заболевания в г. Красноярске.
Задачи:
1. Оценить распространенность аллельных вариантов полиморфизма гена IL- 4 (С-590Т, C-33T}, IL-5 (C-703T} среди детей больных атопической бронхиальной астмой с различной степенью тяжести (легкая - ЛБА, средняя - СБА, тяжелая - ТБА).
2. Оценить распространенность аллельных вариантов полиморфизмов IL-4 (С-590Т, C-33T}, IL-5 (C-703T} среди детей больных атопической бронхиальной астмой с различным уровнем контроля над заболеванием (контролируемая - КАБА и неконтролируемая - НАБА).
3. Провести сравнительную характеристику изученных аллельных вариантов с распространенностью в других европеоидных популяциях.
Работа выполнена в ФГБНУ ФИЦ КНЦ СО РАН обособленное подразделение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера».
1. Распространенность аллельного варианта полиморфизма гена IL-4 (С-ЗЗТ) среди детей больных атопической бронхиальной астмой с различной степенью тяжести показывает тенденцию к ассоциации аллельного варианта Т с АБА в группе с легкой формой заболевания (0,09%).
2. Распространенность аллельного варианта полиморфизма IL-4 (С-ЗЗТ) среди детей больных атопической бронхиальной астмой с различным уровнем контроля над заболеванием показывает тенденцию к ассоциации аллельного варианта Т с АБА (0,08%) и КАБА (р=0,09).
3. Распределение аллельных вариантов промоторных регионов генов исследуемых цитокинов соответствуют распределению у европеоидов в других популяциях.
