Помощь студентам в учебе
РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ РАДИОИОДИРОВАНИЯ ТАРГЕТНЫХ МОЛЕКУЛ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ИОД-123 СОДЕРЖАЩИХ РАДИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
|
ВВЕДЕНИЕ 6
ГЛАВА 1. Литературный обзор 14
1.1. Методы и технологии получения иода-123 14
1.1.1. Теоретическая оценка выходов производства иода-123 на циклотроне 14
1.1.1.1 Поперечное сечение и выходы продуктов циклотрона 14
1.1.1.2. Тормозная способность (Stopping power) 16
1.1.1.3. Выход «толстой» мишени 17
1.1.2. Код TALYS для расчета ядерных реакций 20
1.1.3. Традиционные методы производства иода-123 22
1.1.3.1. Косвенные (непрямые) методы 23
1.1.3.2. Прямые методы 24
1.1.4. Оценка термодинамики накопления иода-123 при сухой дистилляции 26
1.2. Методы и технологии получения радиофармпрепаратов на основе целевых молекул,
меченных иодом-123 29
1.2.1. Методы радиоиодирования малых молекул 30
1.2.1.1. Электрофильное ароматическое замещение 30
1.2.1.2. Ароматическое нуклеофильное замещение 31
1.2.1.3. Реакции, катализируемые переходными металлами 34
1.2.2. Методы радиоиодирования макромолекул 37
1.2.2.1 Прямое радиоактивное иодирование 37
1.2.2.2. Непрямое радиоиодирование с использованием протетических групп 39
1.2.3. Получение лиганда PSMA, меченного радиоактивным иодом-123, для визуализации рака
предстательной железы 41
1.2.4. Получение визуализирующих агентов на основе DARPin, меченных радиоактивным
иодом, для выявления рака 46
1.2.4.1. Меченный радиоактивным иодом DARPin E01 для визуализации экспрессии EGFR
при раке 46
1.2.4.2. Меченный радиоактивным иодом DARPin G3 для визуализации экспрессии HER2/neu
при раке 47
1.3. Заключение по главе 1 50
ГЛАВА 2. Экспериментальная часть: программное обеспечение, оборудование, материалы и методы 51
2.1. Программное обеспечение и оборудование 51
2.2. Реагенты и материалы 57
2.3. Контроль качества радиофармпрепаратов, меченных иодом-123 63
2.4. Метод исследования функции возбуждения и выхода реакции радиоактивного изотопа
иода-123 с использованием кода ядерной реакции TALYS для медицинских применений ..64
2.5. Методика приготовления мишени из обогащенного 122TeO2 64
2.6. Метод исследования сухой дистилляции иода-123 из обогащенной мишени 122TeO2 65
2.7. Методы радиометрического анализа иода-123 65
2.7.1. Определение объемной активности раствора иода-123 65
2.7.2. Определение примесей радионуклидов в растворе иода-123 66
2.8. Методики синтеза лиганда PSMA на основе мочевины 66
2.9. Методики получения простетических групп 74
2.9.1. Синтез N-сукцинимидил 4-(триметилстаннил)бензоата/ N-succinimidyl 4-(trimethylstannyl)
benzoate (STMSB) 74
2.9.2 Синтез №((4-гидроксифенил)-этил)малеимида/ N-((4-hydroxyphenyl)-ethyl)maleimide
(HPEM) 74
2.10. Методики получения экспериментальных радиофармпрепаратов, меченных иодом-123 ...75
2.10.1. Методика синтеза [123I]PSMA-p-IB 75
2.10.2. Методика синтеза DARPin [123I]I-(HE)3-E01 и DARPin [123I]I-(HE)3-G3 76
2.10.3. Методика синтеза радиоактивно меченой простетической группы [123I]SIB 77
2.10.4. Методика синтеза DARPin [123I]I-(HE)3-E01-PIB 77
2.10.5. Методика синтеза радиоактивно меченой простетической группы [123I]IHPEM 78
2.10.6. Методика синтеза DARPin [123I]I-E01-E3C-HPEM и [123I]I-E01-G3C-HPEM 78
2.11. Методика определения липофильности: Log(D) [123I]PSMA-p-IB 79
2.12. Характеристика in vitro и исследования на животных радиофармпрепаратов, меченных
иодом-123 79
ГЛАВА 3. Исследовательская часть: разработка методов получения иод-123-содержащих радиофармацевтических лекарственных препаратов для медицинской диагностики 80
3.1. Усовершенствование способа получения иода-123 из облученной дейтронами мишени
122TeO2 80
3.1.1. Оптимизация разработки дизайна мишени из материала для обогащения теллура-122 и
определение условий облучения 80
3.1.2. Изучение сухой дистилляциииода-123 из обогащенной мишени 122TeO2.. 87
3.2. Разработка и синтез лигандов PSMA на основе мочевины 91
3.3. Разработка способа получения простетических групп 99
3.3.1. Синтез N-сукцинимидил 4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) 99
3.3.2. Синтез №((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM) 102
3.4. Разработка способов получения радиофармпрепаратов, меченных иодом-123 104
3.4.1. Метод получения [123I]PSMA-p-IB 104
3.4.1.1. Изучение влияния количества лиганда PSMA на радиохимический выход [123I]PSMA-
p-IB 105
3.4.1.2. Изучение влияния времени реакции на радиохимический выход [123I]PSMA-p-IB...105
3.4.1.3. Изучение влияния количества окислителя на радиохимический выход
[123I]PSMA-p-IB 106
3.4.2. Метод получения DARPin [123I]I-(HE)3-E01 и DARPin [123I]I-(HE)3-G3 110
3.4.3. Метод получения радиоактивно меченой простетической группы [123I]SIB 112
3.4.4. Метод получения DARPin [123I]I-(HE)3-E01-PIB 114
3.4.4.2. Изучение влияния соотношения между радиоактивно иодированной простетической группой ([123I]SIB) и DARPin на радиохимический выход DARPin
[123I]I-(HE)3-E01-PIB 115
3.4.5. Метод получения радиоактивно меченой простетической группы [123I]IHPEM 117
3.4.6. Метод получения DARPin [123I]I-E01-E3C-HPEM и DARPin [123I]I-E01-G3C-HPEM 119
3.5. Характеристика in vitro и исследования на животных радиофармпрепаратов, меченных
иодом-123 123
3.6. Заключение по главе 3 123
ГЛАВА 4. Принципиальные схемы получения простетических групп и радиофармпрепарата, содержащих иод-123 126
4.1. Принципиальная схема получения DARPin [123I]I-(HE)3-G3 и ее описание 126
4.2. Принципиальная схема получения меченной радиоиодом простетической группы
№сукцинимидил-4-[12:Д]иодбензоата ([123I]SIB) и ее описание 129
4.3 Принципиальная схема получения меченой радиоиодом простетической группы 3-[123Циод-
((4-гидроксифенил)этил)-малеимида ([123I]IHPEM) и ее описание 133
4.4. Экономический анализ разработанных технологий 135
4.4.1 Экономический анализ разработанной технологии получения простетического DARPin
[123I]I-(HE)3-G3 135
4.4.2 Экономический анализ разработанной технологии получения меченной радиоиодом
простетической группы ^сукцинимидилЛД^Диодбензоата ([123I]SIB) 136
4.4.3 Экономический анализ разработанной технологии получения меченной радиоиодом
простетической группы 3-[123I]иод-((4-гидроксифенил)этил)малеимида ([123I]IHPEM) . 137
4.5 Заключение по главе 4 138
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ 139
БЛАГОДАРНОСТИ 141
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ: 142
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 144
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 146
Приложение A. Копия патента № 2815777 163
Приложение Б. Справка об использовании в практике результатов 164
Приложение В. Дополнительная информация 165
ГЛАВА 1. Литературный обзор 14
1.1. Методы и технологии получения иода-123 14
1.1.1. Теоретическая оценка выходов производства иода-123 на циклотроне 14
1.1.1.1 Поперечное сечение и выходы продуктов циклотрона 14
1.1.1.2. Тормозная способность (Stopping power) 16
1.1.1.3. Выход «толстой» мишени 17
1.1.2. Код TALYS для расчета ядерных реакций 20
1.1.3. Традиционные методы производства иода-123 22
1.1.3.1. Косвенные (непрямые) методы 23
1.1.3.2. Прямые методы 24
1.1.4. Оценка термодинамики накопления иода-123 при сухой дистилляции 26
1.2. Методы и технологии получения радиофармпрепаратов на основе целевых молекул,
меченных иодом-123 29
1.2.1. Методы радиоиодирования малых молекул 30
1.2.1.1. Электрофильное ароматическое замещение 30
1.2.1.2. Ароматическое нуклеофильное замещение 31
1.2.1.3. Реакции, катализируемые переходными металлами 34
1.2.2. Методы радиоиодирования макромолекул 37
1.2.2.1 Прямое радиоактивное иодирование 37
1.2.2.2. Непрямое радиоиодирование с использованием протетических групп 39
1.2.3. Получение лиганда PSMA, меченного радиоактивным иодом-123, для визуализации рака
предстательной железы 41
1.2.4. Получение визуализирующих агентов на основе DARPin, меченных радиоактивным
иодом, для выявления рака 46
1.2.4.1. Меченный радиоактивным иодом DARPin E01 для визуализации экспрессии EGFR
при раке 46
1.2.4.2. Меченный радиоактивным иодом DARPin G3 для визуализации экспрессии HER2/neu
при раке 47
1.3. Заключение по главе 1 50
ГЛАВА 2. Экспериментальная часть: программное обеспечение, оборудование, материалы и методы 51
2.1. Программное обеспечение и оборудование 51
2.2. Реагенты и материалы 57
2.3. Контроль качества радиофармпрепаратов, меченных иодом-123 63
2.4. Метод исследования функции возбуждения и выхода реакции радиоактивного изотопа
иода-123 с использованием кода ядерной реакции TALYS для медицинских применений ..64
2.5. Методика приготовления мишени из обогащенного 122TeO2 64
2.6. Метод исследования сухой дистилляции иода-123 из обогащенной мишени 122TeO2 65
2.7. Методы радиометрического анализа иода-123 65
2.7.1. Определение объемной активности раствора иода-123 65
2.7.2. Определение примесей радионуклидов в растворе иода-123 66
2.8. Методики синтеза лиганда PSMA на основе мочевины 66
2.9. Методики получения простетических групп 74
2.9.1. Синтез N-сукцинимидил 4-(триметилстаннил)бензоата/ N-succinimidyl 4-(trimethylstannyl)
benzoate (STMSB) 74
2.9.2 Синтез №((4-гидроксифенил)-этил)малеимида/ N-((4-hydroxyphenyl)-ethyl)maleimide
(HPEM) 74
2.10. Методики получения экспериментальных радиофармпрепаратов, меченных иодом-123 ...75
2.10.1. Методика синтеза [123I]PSMA-p-IB 75
2.10.2. Методика синтеза DARPin [123I]I-(HE)3-E01 и DARPin [123I]I-(HE)3-G3 76
2.10.3. Методика синтеза радиоактивно меченой простетической группы [123I]SIB 77
2.10.4. Методика синтеза DARPin [123I]I-(HE)3-E01-PIB 77
2.10.5. Методика синтеза радиоактивно меченой простетической группы [123I]IHPEM 78
2.10.6. Методика синтеза DARPin [123I]I-E01-E3C-HPEM и [123I]I-E01-G3C-HPEM 78
2.11. Методика определения липофильности: Log(D) [123I]PSMA-p-IB 79
2.12. Характеристика in vitro и исследования на животных радиофармпрепаратов, меченных
иодом-123 79
ГЛАВА 3. Исследовательская часть: разработка методов получения иод-123-содержащих радиофармацевтических лекарственных препаратов для медицинской диагностики 80
3.1. Усовершенствование способа получения иода-123 из облученной дейтронами мишени
122TeO2 80
3.1.1. Оптимизация разработки дизайна мишени из материала для обогащения теллура-122 и
определение условий облучения 80
3.1.2. Изучение сухой дистилляциииода-123 из обогащенной мишени 122TeO2.. 87
3.2. Разработка и синтез лигандов PSMA на основе мочевины 91
3.3. Разработка способа получения простетических групп 99
3.3.1. Синтез N-сукцинимидил 4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) 99
3.3.2. Синтез №((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM) 102
3.4. Разработка способов получения радиофармпрепаратов, меченных иодом-123 104
3.4.1. Метод получения [123I]PSMA-p-IB 104
3.4.1.1. Изучение влияния количества лиганда PSMA на радиохимический выход [123I]PSMA-
p-IB 105
3.4.1.2. Изучение влияния времени реакции на радиохимический выход [123I]PSMA-p-IB...105
3.4.1.3. Изучение влияния количества окислителя на радиохимический выход
[123I]PSMA-p-IB 106
3.4.2. Метод получения DARPin [123I]I-(HE)3-E01 и DARPin [123I]I-(HE)3-G3 110
3.4.3. Метод получения радиоактивно меченой простетической группы [123I]SIB 112
3.4.4. Метод получения DARPin [123I]I-(HE)3-E01-PIB 114
3.4.4.2. Изучение влияния соотношения между радиоактивно иодированной простетической группой ([123I]SIB) и DARPin на радиохимический выход DARPin
[123I]I-(HE)3-E01-PIB 115
3.4.5. Метод получения радиоактивно меченой простетической группы [123I]IHPEM 117
3.4.6. Метод получения DARPin [123I]I-E01-E3C-HPEM и DARPin [123I]I-E01-G3C-HPEM 119
3.5. Характеристика in vitro и исследования на животных радиофармпрепаратов, меченных
иодом-123 123
3.6. Заключение по главе 3 123
ГЛАВА 4. Принципиальные схемы получения простетических групп и радиофармпрепарата, содержащих иод-123 126
4.1. Принципиальная схема получения DARPin [123I]I-(HE)3-G3 и ее описание 126
4.2. Принципиальная схема получения меченной радиоиодом простетической группы
№сукцинимидил-4-[12:Д]иодбензоата ([123I]SIB) и ее описание 129
4.3 Принципиальная схема получения меченой радиоиодом простетической группы 3-[123Циод-
((4-гидроксифенил)этил)-малеимида ([123I]IHPEM) и ее описание 133
4.4. Экономический анализ разработанных технологий 135
4.4.1 Экономический анализ разработанной технологии получения простетического DARPin
[123I]I-(HE)3-G3 135
4.4.2 Экономический анализ разработанной технологии получения меченной радиоиодом
простетической группы ^сукцинимидилЛД^Диодбензоата ([123I]SIB) 136
4.4.3 Экономический анализ разработанной технологии получения меченной радиоиодом
простетической группы 3-[123I]иод-((4-гидроксифенил)этил)малеимида ([123I]IHPEM) . 137
4.5 Заключение по главе 4 138
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ 139
БЛАГОДАРНОСТИ 141
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ: 142
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 144
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 146
Приложение A. Копия патента № 2815777 163
Приложение Б. Справка об использовании в практике результатов 164
Приложение В. Дополнительная информация 165
Актуальность темы исследования
Радионуклидная молекулярная визуализация раково-ассоциированных мишеней рассматривается как мощный инструмент для диагностики и стратификации пациентов для целевого лечения [1]. В основе методов молекулярной визуализации лежат методы ядерной медицины - однофотонная компьютерная томография (ОФЭКТ) и позитронно-эмиссионная компьютерная томография (ПЭТ).
В качестве радионуклида для диагностических целей перспективен иод - 123 (123I) - гамма-излучатель с оптимальными характеристиками (энергия излучения 159 кэВ, период полураспада T1/2 = 13,2 ч) для однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ). Использование 123I в процессах визуализации позволяет получить гораздо меньшую дозу облучения пациента [2]. Кроме того, срок годности этого радионуклида достаточно велик, что позволяет распространять его на большой географической территории [3]. С появлением ОФЭКТ-камер в периферийном оборудовании больниц и их более низкой стоимостью по сравнению с ПЭТ, рынок и полезность радиофармпрепарата, меченного 123I, могут увеличиться.
Разработка радиофармпрепаратов для диагностики и стадирования рака в значительной степени зависит от различных критериев. Большинство ранее разработанных препаратов для радионуклидной молекулярной визуализации опухолей были основаны на моноклональных антителах (mAb) [4-6]. Тем не менее, существуют очевидные проблемы, связанные в первую очередь с размером антитела. В последние годы все большее признание получает потенциал небольших белков-скаффолдов как жизнеспособной альтернативы антителам в лечении и выявлении рака. Рекомбинантные белки с анкириновыми повторами, или designed ankyrin repeat proteins (DARPin), построены с использованием серии близко расположенных повторов, обычно состоящих из 33 аминокислотных остатков. Небольшой размер DARPin может повысить эффективность доставки радионуклида, способствуя улучшению экстравазации и проникновению в опухоль [7, 8]. Другой стратегией замены антител для диагностики и стадирования некоторых видов рака является использование небольших радиофармацевтических препаратов, которые специфически нацелены на ферменты, регулируемые на поверхности раковых клеток, например, использование простат-специфического мембранного антигена или prostate-specific membrane antigen (PSMA) лиганда для диагностики рака простаты [2, 9].
Определение методов радиоиодирования для DARPin и PSMA-лигандов изначально сложнее из-за их меньших размеров. Физико-химические характеристики веществ значительно изменяются под действием условий радиосинтеза. Выбор технологии радиоиодирования может повлиять на несколько аспектов взаимодействия разработанного таргетного молекулярного соединения с предполагаемой молекулярной мишенью. К ним относятся прочность связывания, способ обработки таргетного соединения внутри клеток, степень удержания радиометаболитов в злокачественных клетках после интернализации, а также возникновение непреднамеренных взаимодействий с незлокачественными тканями [10]. Кроме того, могут быть изменены пути первичного выведения радиоактивного вещества для визуализации, его абсорбция и задержка в органах выделения, а также выведение его радиометаболитов [11]. Поэтому разработка надежных технологий радиоидирования, их оптимизированные условия для получения эффективного радиофармпрепарата является крайне необходимой.
Объем производства радионуклида 123I и радиофармпрепаратов на основе 123I в России нуждается в совершенствовании из-за отсутствия удобной технологии его количественной и качественной отработки на имеющихся в стране циклотронах среднего размера типа У-120. Кроме того, до настоящего времени в России не существует общего стандарта и технологий , эффективно определяющих наиболее информативный метод синтеза радиофармпрепаратов, меченных этим радионуклидом. Поэтому разработка новых методов получения иода-123 и технологий радиоиодирования новых таргетных молекул для производства радиофармацевтических лекарственных препаратов на основе иода-123 для медицинской диагностики является актуальной задачей.
Степень разработанности темы исследований
Разработка радиофармпрепаратов на основе 123I продолжается во всем мире. Завод «Медрадиопрепарат» ФМБА имени А.И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства, Москва (Корсунский В.Н., Халитов Ю.М., Кодина Г.Е. и др.) и Радиевый институт имени В.Г. Хлопина (Куделин Б.К., Алексеев Ф.Е., Гребенщиков Н.Р. и др.), Санкт-Петербург - пионерские предприятия, выполняющие работы по данной тематике в России. В Томском политехническом университете на циклотроне Р-7М на основе реакции 122Te(d,n)123I изучается получение 123I и препаратов на его основе (Скуридин В.С., Гарапацкий А.А, и др.). Работы по выделению радиоактивного иода из ТеО2-мишеней были начаты в Дании (Фонслет Дж. и Козиоровски Дж.). Разработкой радиофармацевтических препаратов на основе ПСМА, меченного иодом-123, занимаются также в США (Чен Й., Помпер М.Г. и др.) в Массачусетсе и Мареска К.П., Хиллер С.М. и др. в Иллинойсе. Кроме того, разработкой радиофармпрепаратов на основе DARPin, меченных иодом-123, занимаются ученые из Швеции (Воробьева А., Толмачев В. и др.) совместно с НИЦ «Онкотераностика» ТПУ.
Учитывая вышесказанное, целью данной работы является разработка способов радиоиодирования новых таргетных молекул для производства радиофармацевтических лекарственных препаратов на основе иода-123 для диагностики онкологических заболеваний.
Основные задачи исследований:
1. Усовершенствовать способ получения иода-123 на циклотроне типа У-120 Томского политехнического университета с использованием установки для сухой дистилляции иода-123 из мишени оксида теллура-122 обогащенного по 122Те до 99,6 % для производства радиофармпрепаратов на основе иода-123.
2. Провести исследования по синтезу, оптимизации 1231-радиоиодирования и первоначальной оценке новых ингибиторов PSMA на основе мочевины с трибутилстанниловой простетической группой в качестве средств визуализации рака простаты.
3. Разработать способы радиосинтеза иод-123-содержащих простетических групп П-сукцинимидил-4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4- гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM) для непрямого мечения таргетных белков.
4. На основе иод-123-содержащих простетических групп STMSB и HPEM разработать способы непрямого радиосинтеза вариантов таргетных белков DARPin Е01 для диагностики EGFR-экспрессирующего рака.
5. На основе таргетных белков DARPin разработать способы прямого радиосинтеза иод-123-содержащих DARPin E01 и DARPin G3 с высокими радиохимическими выходами в одностадийном производстве.
6. Разработать принципиальные схемы радиосинтеза 1231-простетических
групп и 123I-DARPin G3 для получения новых таргетных
радиофармацевтических лекарственных препаратов.
Научная новизна работы
1. Усовершенствование способа получения иода-123 на циклотроне типа У-120 Томского политехнического университета с использованием установки для сухой дистилляции иода-123 из мишени оксида теллура-122, обогащенного по 122Те до 99,6% и обладающей активностью, достаточной для производства радиофармпрепаратов на основе иода-123, включая реализацию функций автоматического контроля температуры камеры и измерение активности иода- 123 в процессе сухой дистилляции иода-123 из мишени.
2. Впервые разработаны новые ингибиторы PSMA на основе мочевины с трибутилстанниловой простетической группой, включая оптимизацию 123I- радиодирования и первоначальную доклиническую оценку новых ингибиторов PSMA на основе мочевины в качестве агентов визуализации рака простаты.
3. Впервые разработаны основы способов получения двух простетических групп П-сукцинимидил-4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4- гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM), меченых иодом-123, с высокими выходами и чистотой для радиоиодирования таргетных белков.
4. Впервые исследованы особенности способов прямого и непрямого радиосинтеза иод-123-содержащих таргетных белков вариантов DARPin, предлагаемых для создания новых таргетных радиофармацевтических лекарственных препаратов.
Теоретическая и практическая значимость работы
Теоретическая значимость работы заключается в получении расчетной информации получения 123I с использованием данных сечения реакции 122Te(d,n)123I с помощью кода TALYS и останавливающей силы для оптимизации конструкции толщины мишени для получения 123I на циклотроне с оптимальным выходом.
Полученные результаты по разработке методов синтеза двух простетических групп П-сукцинимидил-4-(триметилстаннил)бензоата
(STMSB) и ((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM), меченых иодом-123, имеют практическое значение для оптимизации и расширения разработки радиофармпрепаратов на основе белков и пептидов, требующих в процессе мечения наличия простетической группы.
Предложены эффективные способы радиосинтеза ряда иод-123- содержащих таргетных молекул на основе ингибиторов PSMA и белков DARPin, доклинические исследования которых позволят отобрать лучших кандидатов для создания эффективных радиофармпрепаратов для диагностики и стратификации пациентов для терапии.
Получен патент № 2815777 от 08.06.2023 «Способ получения
радиохимического соединения на основе меченных иодом-123 рекомбинантных адресных молекул белковой природы с анкириновыми повторами для визуализации рака с гиперэкспрессией HER2/neu»
Проведены в Томском НИМЦ НИИ Онкологии пилотные клинические исследования экспериментального препарата 123I-DARPin G3, полученного по изобретенному способу, для визуализации рака молочной железы с гиперэкспрессией HER2/neu. Применение радиофармпрепарата на основе 123I и DARPin G3 эффективно в визуализации первичных опухолей, регионарных и метастазов рака молочной железы с гиперэкспрессией рецепторов HER2/neu и без их экспрессии. Препарат является функционально пригодным, необходимы дальнейшие исследования (ClinicalTrials.gov ID: NCT05923177, 2023,
https: //clinicaltri als. gov/study/NCT05923177?term=DARPin%20G3 &rank=4 ).
Методология и методы исследования
Методологической основой диссертационного исследования является системный подход к разработке способов получения радиофармацевтических лекарственных препаратов с учетом применяемых в мировой практике стандартизированных требований к контролю качества получаемого радиофармацевтического препарата, содержащего иод-123, по радионуклидной чистоте, радиохимической чистоте, характеристикам in vitro и in vivo с систематической обработкой полученных результатов.
В ходе работы были использованы различные методы и методики аналитического контроля синтезированных субстратов и
радиофармпрепаратов: метод ядерно-магнитно-резонансной спектроскопии, методы высокоэффективной жидкостной и тонкослойной хроматографии, метод масс-спектрометрии высокого разрешения, методы радиометрического анализа и метод определения рН. В проведенных исследованиях использованы следующие методы и методики: методика приготовления мишени,
обогащенной 122TeO2, методика изучения сухой дистилляции йода-123 из обогащенной мишени 122TeO2, методика проведения радиометрических измерений иода-123, методика получения простетических групп, методика синтеза лигандов PSMA на основе мочевины, методика радиосинтеза простетических групп, меченных 123I, методика радиосинтеза вариантов DARPin, содержащих иод-123, методика определения in vitro характеристик: липофильности, специфичности связывания с клетками и аффинности связывания с рецепторами, методика определения биораспределения радиофармпрепарата в мышах, методы статистической обработки результатов.
Положения, выносимые на защиту
По результатам работы сформулированы положения, выносимые на защиту:
1. Усовершенствование получение иода-123 с выходом 94% на циклотроне типа У-120 Томского политехнического университета с использованием установки для сухой дистилляции иода-123 из мишени оксида теллура-122, обогащенного по 122Те до 99,6% и обладающей активностью, достаточной для производства радиофармпрепаратов на основе иода-123, включая реализацию автоматического контроля температуры камеры и измерение активности иода- 123 в процессе сухой дистилляции иода-123 из мишени.
2. Получение новых ингибиторов PSMA на основе мочевины с трибутилстанниловой простетической группой, включая оптимизацию 123I- радиодирования и первоначальную доклиническую оценку новых ингибиторов PSMA на основе мочевины в качестве агентов визуализации рака простаты.
3. Способы получения двух простетических групп N-сукцинимидил-Д- (триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM), меченых иодом-123, с высокими выходами и чистотой для радиоиодирования таргетных белков.
4. Способы прямого и непрямого радиосинтеза иод-123-содержащих таргетных белков вариантов DARPin, перспективных для получения новых радиофармацевтических лекарственных препаратов.
Личный вклад автора
Все основные результаты работы получены лично автором или при его непосредственном участии: обзоре литературы по теме, постановке целей исследования, выборе экспериментальных методов, анализе и интерпретации полученных экспериментальных данных, а также в написании диссертации и подготовке материалов к публикации.
Степень достоверности результатов
Результаты данного исследования не противоречат экспериментальным данным, имеющимся в литературе по синтезу и контролю качества радиофармпрепаратов, и соответствуют общепринятым представлениям о молекулярных принципах и процессах. Анализ полученных данных проводился сертифицированными методами контроля качества с использованием поверенного и сертифицированного аналитического оборудования.
Апробация работы
Результаты работы были представлены в виде стендовых и устных докладов на следующих конференциях:
1. III Международной Научно-практической Конференции “Научная Инициатива Иностранных Студентов и Аспирантов” (Tomsk, April 25-27, 2023).
2. II Международная Научно-практическая Конференция Разработка Лекарственных Средств - Традиции и Перспективы (Tomsk, October 4-6, 2023).
3. 21st European Symposium on Radiopharmacy and Radiopharmaceuticals (ESRR) (Coimbra, Portugal, April 18 - 21, 2024).
Публикации
На основе первичных материалов диссертации было опубликовано семь печатных работ, в том числе 1 статья в рецензируемом журнале перечня ВАК, две статьи в журналах Scopus/Web of Science, получен один патент Российской Федерации и опубликовано три тезиса докладов в сборниках российских и международных конференций.
Структура и объем работы
Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, дополнительных сведений и списка литературы из 128 наименований. Работа изложена на 194 страницах, содержит 81 рисунка, 21 таблицу и 3 приложения.
Радионуклидная молекулярная визуализация раково-ассоциированных мишеней рассматривается как мощный инструмент для диагностики и стратификации пациентов для целевого лечения [1]. В основе методов молекулярной визуализации лежат методы ядерной медицины - однофотонная компьютерная томография (ОФЭКТ) и позитронно-эмиссионная компьютерная томография (ПЭТ).
В качестве радионуклида для диагностических целей перспективен иод - 123 (123I) - гамма-излучатель с оптимальными характеристиками (энергия излучения 159 кэВ, период полураспада T1/2 = 13,2 ч) для однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ). Использование 123I в процессах визуализации позволяет получить гораздо меньшую дозу облучения пациента [2]. Кроме того, срок годности этого радионуклида достаточно велик, что позволяет распространять его на большой географической территории [3]. С появлением ОФЭКТ-камер в периферийном оборудовании больниц и их более низкой стоимостью по сравнению с ПЭТ, рынок и полезность радиофармпрепарата, меченного 123I, могут увеличиться.
Разработка радиофармпрепаратов для диагностики и стадирования рака в значительной степени зависит от различных критериев. Большинство ранее разработанных препаратов для радионуклидной молекулярной визуализации опухолей были основаны на моноклональных антителах (mAb) [4-6]. Тем не менее, существуют очевидные проблемы, связанные в первую очередь с размером антитела. В последние годы все большее признание получает потенциал небольших белков-скаффолдов как жизнеспособной альтернативы антителам в лечении и выявлении рака. Рекомбинантные белки с анкириновыми повторами, или designed ankyrin repeat proteins (DARPin), построены с использованием серии близко расположенных повторов, обычно состоящих из 33 аминокислотных остатков. Небольшой размер DARPin может повысить эффективность доставки радионуклида, способствуя улучшению экстравазации и проникновению в опухоль [7, 8]. Другой стратегией замены антител для диагностики и стадирования некоторых видов рака является использование небольших радиофармацевтических препаратов, которые специфически нацелены на ферменты, регулируемые на поверхности раковых клеток, например, использование простат-специфического мембранного антигена или prostate-specific membrane antigen (PSMA) лиганда для диагностики рака простаты [2, 9].
Определение методов радиоиодирования для DARPin и PSMA-лигандов изначально сложнее из-за их меньших размеров. Физико-химические характеристики веществ значительно изменяются под действием условий радиосинтеза. Выбор технологии радиоиодирования может повлиять на несколько аспектов взаимодействия разработанного таргетного молекулярного соединения с предполагаемой молекулярной мишенью. К ним относятся прочность связывания, способ обработки таргетного соединения внутри клеток, степень удержания радиометаболитов в злокачественных клетках после интернализации, а также возникновение непреднамеренных взаимодействий с незлокачественными тканями [10]. Кроме того, могут быть изменены пути первичного выведения радиоактивного вещества для визуализации, его абсорбция и задержка в органах выделения, а также выведение его радиометаболитов [11]. Поэтому разработка надежных технологий радиоидирования, их оптимизированные условия для получения эффективного радиофармпрепарата является крайне необходимой.
Объем производства радионуклида 123I и радиофармпрепаратов на основе 123I в России нуждается в совершенствовании из-за отсутствия удобной технологии его количественной и качественной отработки на имеющихся в стране циклотронах среднего размера типа У-120. Кроме того, до настоящего времени в России не существует общего стандарта и технологий , эффективно определяющих наиболее информативный метод синтеза радиофармпрепаратов, меченных этим радионуклидом. Поэтому разработка новых методов получения иода-123 и технологий радиоиодирования новых таргетных молекул для производства радиофармацевтических лекарственных препаратов на основе иода-123 для медицинской диагностики является актуальной задачей.
Степень разработанности темы исследований
Разработка радиофармпрепаратов на основе 123I продолжается во всем мире. Завод «Медрадиопрепарат» ФМБА имени А.И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства, Москва (Корсунский В.Н., Халитов Ю.М., Кодина Г.Е. и др.) и Радиевый институт имени В.Г. Хлопина (Куделин Б.К., Алексеев Ф.Е., Гребенщиков Н.Р. и др.), Санкт-Петербург - пионерские предприятия, выполняющие работы по данной тематике в России. В Томском политехническом университете на циклотроне Р-7М на основе реакции 122Te(d,n)123I изучается получение 123I и препаратов на его основе (Скуридин В.С., Гарапацкий А.А, и др.). Работы по выделению радиоактивного иода из ТеО2-мишеней были начаты в Дании (Фонслет Дж. и Козиоровски Дж.). Разработкой радиофармацевтических препаратов на основе ПСМА, меченного иодом-123, занимаются также в США (Чен Й., Помпер М.Г. и др.) в Массачусетсе и Мареска К.П., Хиллер С.М. и др. в Иллинойсе. Кроме того, разработкой радиофармпрепаратов на основе DARPin, меченных иодом-123, занимаются ученые из Швеции (Воробьева А., Толмачев В. и др.) совместно с НИЦ «Онкотераностика» ТПУ.
Учитывая вышесказанное, целью данной работы является разработка способов радиоиодирования новых таргетных молекул для производства радиофармацевтических лекарственных препаратов на основе иода-123 для диагностики онкологических заболеваний.
Основные задачи исследований:
1. Усовершенствовать способ получения иода-123 на циклотроне типа У-120 Томского политехнического университета с использованием установки для сухой дистилляции иода-123 из мишени оксида теллура-122 обогащенного по 122Те до 99,6 % для производства радиофармпрепаратов на основе иода-123.
2. Провести исследования по синтезу, оптимизации 1231-радиоиодирования и первоначальной оценке новых ингибиторов PSMA на основе мочевины с трибутилстанниловой простетической группой в качестве средств визуализации рака простаты.
3. Разработать способы радиосинтеза иод-123-содержащих простетических групп П-сукцинимидил-4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4- гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM) для непрямого мечения таргетных белков.
4. На основе иод-123-содержащих простетических групп STMSB и HPEM разработать способы непрямого радиосинтеза вариантов таргетных белков DARPin Е01 для диагностики EGFR-экспрессирующего рака.
5. На основе таргетных белков DARPin разработать способы прямого радиосинтеза иод-123-содержащих DARPin E01 и DARPin G3 с высокими радиохимическими выходами в одностадийном производстве.
6. Разработать принципиальные схемы радиосинтеза 1231-простетических
групп и 123I-DARPin G3 для получения новых таргетных
радиофармацевтических лекарственных препаратов.
Научная новизна работы
1. Усовершенствование способа получения иода-123 на циклотроне типа У-120 Томского политехнического университета с использованием установки для сухой дистилляции иода-123 из мишени оксида теллура-122, обогащенного по 122Те до 99,6% и обладающей активностью, достаточной для производства радиофармпрепаратов на основе иода-123, включая реализацию функций автоматического контроля температуры камеры и измерение активности иода- 123 в процессе сухой дистилляции иода-123 из мишени.
2. Впервые разработаны новые ингибиторы PSMA на основе мочевины с трибутилстанниловой простетической группой, включая оптимизацию 123I- радиодирования и первоначальную доклиническую оценку новых ингибиторов PSMA на основе мочевины в качестве агентов визуализации рака простаты.
3. Впервые разработаны основы способов получения двух простетических групп П-сукцинимидил-4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4- гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM), меченых иодом-123, с высокими выходами и чистотой для радиоиодирования таргетных белков.
4. Впервые исследованы особенности способов прямого и непрямого радиосинтеза иод-123-содержащих таргетных белков вариантов DARPin, предлагаемых для создания новых таргетных радиофармацевтических лекарственных препаратов.
Теоретическая и практическая значимость работы
Теоретическая значимость работы заключается в получении расчетной информации получения 123I с использованием данных сечения реакции 122Te(d,n)123I с помощью кода TALYS и останавливающей силы для оптимизации конструкции толщины мишени для получения 123I на циклотроне с оптимальным выходом.
Полученные результаты по разработке методов синтеза двух простетических групп П-сукцинимидил-4-(триметилстаннил)бензоата
(STMSB) и ((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM), меченых иодом-123, имеют практическое значение для оптимизации и расширения разработки радиофармпрепаратов на основе белков и пептидов, требующих в процессе мечения наличия простетической группы.
Предложены эффективные способы радиосинтеза ряда иод-123- содержащих таргетных молекул на основе ингибиторов PSMA и белков DARPin, доклинические исследования которых позволят отобрать лучших кандидатов для создания эффективных радиофармпрепаратов для диагностики и стратификации пациентов для терапии.
Получен патент № 2815777 от 08.06.2023 «Способ получения
радиохимического соединения на основе меченных иодом-123 рекомбинантных адресных молекул белковой природы с анкириновыми повторами для визуализации рака с гиперэкспрессией HER2/neu»
Проведены в Томском НИМЦ НИИ Онкологии пилотные клинические исследования экспериментального препарата 123I-DARPin G3, полученного по изобретенному способу, для визуализации рака молочной железы с гиперэкспрессией HER2/neu. Применение радиофармпрепарата на основе 123I и DARPin G3 эффективно в визуализации первичных опухолей, регионарных и метастазов рака молочной железы с гиперэкспрессией рецепторов HER2/neu и без их экспрессии. Препарат является функционально пригодным, необходимы дальнейшие исследования (ClinicalTrials.gov ID: NCT05923177, 2023,
https: //clinicaltri als. gov/study/NCT05923177?term=DARPin%20G3 &rank=4 ).
Методология и методы исследования
Методологической основой диссертационного исследования является системный подход к разработке способов получения радиофармацевтических лекарственных препаратов с учетом применяемых в мировой практике стандартизированных требований к контролю качества получаемого радиофармацевтического препарата, содержащего иод-123, по радионуклидной чистоте, радиохимической чистоте, характеристикам in vitro и in vivo с систематической обработкой полученных результатов.
В ходе работы были использованы различные методы и методики аналитического контроля синтезированных субстратов и
радиофармпрепаратов: метод ядерно-магнитно-резонансной спектроскопии, методы высокоэффективной жидкостной и тонкослойной хроматографии, метод масс-спектрометрии высокого разрешения, методы радиометрического анализа и метод определения рН. В проведенных исследованиях использованы следующие методы и методики: методика приготовления мишени,
обогащенной 122TeO2, методика изучения сухой дистилляции йода-123 из обогащенной мишени 122TeO2, методика проведения радиометрических измерений иода-123, методика получения простетических групп, методика синтеза лигандов PSMA на основе мочевины, методика радиосинтеза простетических групп, меченных 123I, методика радиосинтеза вариантов DARPin, содержащих иод-123, методика определения in vitro характеристик: липофильности, специфичности связывания с клетками и аффинности связывания с рецепторами, методика определения биораспределения радиофармпрепарата в мышах, методы статистической обработки результатов.
Положения, выносимые на защиту
По результатам работы сформулированы положения, выносимые на защиту:
1. Усовершенствование получение иода-123 с выходом 94% на циклотроне типа У-120 Томского политехнического университета с использованием установки для сухой дистилляции иода-123 из мишени оксида теллура-122, обогащенного по 122Те до 99,6% и обладающей активностью, достаточной для производства радиофармпрепаратов на основе иода-123, включая реализацию автоматического контроля температуры камеры и измерение активности иода- 123 в процессе сухой дистилляции иода-123 из мишени.
2. Получение новых ингибиторов PSMA на основе мочевины с трибутилстанниловой простетической группой, включая оптимизацию 123I- радиодирования и первоначальную доклиническую оценку новых ингибиторов PSMA на основе мочевины в качестве агентов визуализации рака простаты.
3. Способы получения двух простетических групп N-сукцинимидил-Д- (триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM), меченых иодом-123, с высокими выходами и чистотой для радиоиодирования таргетных белков.
4. Способы прямого и непрямого радиосинтеза иод-123-содержащих таргетных белков вариантов DARPin, перспективных для получения новых радиофармацевтических лекарственных препаратов.
Личный вклад автора
Все основные результаты работы получены лично автором или при его непосредственном участии: обзоре литературы по теме, постановке целей исследования, выборе экспериментальных методов, анализе и интерпретации полученных экспериментальных данных, а также в написании диссертации и подготовке материалов к публикации.
Степень достоверности результатов
Результаты данного исследования не противоречат экспериментальным данным, имеющимся в литературе по синтезу и контролю качества радиофармпрепаратов, и соответствуют общепринятым представлениям о молекулярных принципах и процессах. Анализ полученных данных проводился сертифицированными методами контроля качества с использованием поверенного и сертифицированного аналитического оборудования.
Апробация работы
Результаты работы были представлены в виде стендовых и устных докладов на следующих конференциях:
1. III Международной Научно-практической Конференции “Научная Инициатива Иностранных Студентов и Аспирантов” (Tomsk, April 25-27, 2023).
2. II Международная Научно-практическая Конференция Разработка Лекарственных Средств - Традиции и Перспективы (Tomsk, October 4-6, 2023).
3. 21st European Symposium on Radiopharmacy and Radiopharmaceuticals (ESRR) (Coimbra, Portugal, April 18 - 21, 2024).
Публикации
На основе первичных материалов диссертации было опубликовано семь печатных работ, в том числе 1 статья в рецензируемом журнале перечня ВАК, две статьи в журналах Scopus/Web of Science, получен один патент Российской Федерации и опубликовано три тезиса докладов в сборниках российских и международных конференций.
Структура и объем работы
Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, дополнительных сведений и списка литературы из 128 наименований. Работа изложена на 194 страницах, содержит 81 рисунка, 21 таблицу и 3 приложения.
1. Результаты расчетно-экспериментальных исследований по усовершенствованию способа получения 123I показывают, что оптимальная энергия для получения 123I на циклотроне типа У-120 составляет Ed = 13,48^ 8 МэВ. Для покрытия этого диапазона энергий оптимальная поверхностная плотность мишени 99,6% 122TeO2 составляет 145,1 мг/см2 при минимальной толщине 0,26 мм. Предложена оптимизация установки, которая может обеспечить автоматический контроль температуры и активности в процессе сухой дистилляции 123I из мишени. Установлено, что после предварительной очистки мишени оптимальным режимом, выбранным для сухой дистилляции 123I, является последующее извлечение 123I в условиях температуры дистилляции до 700 °C до тех пор, пока активность 123I в поглотителе не станет постоянной.
2. Предложены способы синтеза двух новых ингибиторов PSMA на основе мочевины DCL с хлорзамещенным ароматическим фрагментом у е- атома азота лизина, дипептидным линкером L-Phe-L-Phe и 3- или 4- (трибутилстаннил)бензойной кислотой в качестве простетических групп для радиоиодирования. Эти ингибиторы были изучены в качестве новых лигандов PSMA путем оптимизации радиоактивного мечения иодом-123 и первоначальной доклинической оценки. Новый PSMA-таргетный радиолиганд [123I]PSMA-p-IB потенциально может стать перспективным новым PSMA- таргетным радиолигандом.
3. Разработаны новые эффективные способы синтеза иод-123- содержащих простетических групп 4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM) для радиоиодирования скаффолд- белков.
4. На основе иод-123-содержащих простетических групп разработаны способы непрямого радиосинтеза вариантов таргетных белков DARPin Е01 для диагностики EGFR-экспрессирующего рака. Предложен способ сайт-
неспецифического радиоиодирования DARPin (HE)3-E01 путем конъюгации белка с иод-123-содержащей STMSB (радиохимический выход - 22,48 ± 1,94%). DARPin-E01-E3C и DARPin E01-G3C с цистеин-содержащими линкерами, сайт- специфически меченные 123I, впервые получены по разработанным методикам посредством конъюгации белков с HPEM с помощью малеимид-тиоловой связи на С-конце. Наибольший радиохимический выход [123I]I-E01-E3C-HPEM (9,13 ± 0,20%) был получен при использовании молярного соотношения 1 : 1,78 для E01-E3C : [123I]IHPEM. Радиохимический выход [123I]I-E01-G3C-HPEM
составил 19,88 ± 2,23% при молярном соотношении 1 : 2,52 для E01-G3C : [123I]IHPEM. Радиохимическая чистота всех радиоконъюгатов составила более 95 %.
5. На основе таргетных белков DARPin разработаны одностадийные способы прямого радиосинтеза иод-123-содержащих DARPin E01 и DARPin G3, позволяющие получить DARPin [123I]I-E01 и DARPin [123I]I-G3 с высокими радиохимическими выходами (83 ± 2 % и >95% соответственно) и чистотой (более 99%). Показано, что DARPin [123I]I-(HE)3-G3 специфично и с высокой аффинностью связывается с опухолевыми клетками с экспрессией HER2/neu (константа диссоциации 3,2 ± 0,5 нмоль) и позволяет дифференцировать опухоли с экспрессией целевого рецептора от опухолей без экспрессии.
6. Разработаны принципиальные схемы радиосинтеза 123Рпростетических групп и DARPin [123I]I-(HE)3-G3 для получения новых таргетных радиофармацевтических лекарственных препаратов.
2. Предложены способы синтеза двух новых ингибиторов PSMA на основе мочевины DCL с хлорзамещенным ароматическим фрагментом у е- атома азота лизина, дипептидным линкером L-Phe-L-Phe и 3- или 4- (трибутилстаннил)бензойной кислотой в качестве простетических групп для радиоиодирования. Эти ингибиторы были изучены в качестве новых лигандов PSMA путем оптимизации радиоактивного мечения иодом-123 и первоначальной доклинической оценки. Новый PSMA-таргетный радиолиганд [123I]PSMA-p-IB потенциально может стать перспективным новым PSMA- таргетным радиолигандом.
3. Разработаны новые эффективные способы синтеза иод-123- содержащих простетических групп 4-(триметилстаннил)бензоата (STMSB) и ((4-гидроксифенил)этил)малеимида (HPEM) для радиоиодирования скаффолд- белков.
4. На основе иод-123-содержащих простетических групп разработаны способы непрямого радиосинтеза вариантов таргетных белков DARPin Е01 для диагностики EGFR-экспрессирующего рака. Предложен способ сайт-
неспецифического радиоиодирования DARPin (HE)3-E01 путем конъюгации белка с иод-123-содержащей STMSB (радиохимический выход - 22,48 ± 1,94%). DARPin-E01-E3C и DARPin E01-G3C с цистеин-содержащими линкерами, сайт- специфически меченные 123I, впервые получены по разработанным методикам посредством конъюгации белков с HPEM с помощью малеимид-тиоловой связи на С-конце. Наибольший радиохимический выход [123I]I-E01-E3C-HPEM (9,13 ± 0,20%) был получен при использовании молярного соотношения 1 : 1,78 для E01-E3C : [123I]IHPEM. Радиохимический выход [123I]I-E01-G3C-HPEM
составил 19,88 ± 2,23% при молярном соотношении 1 : 2,52 для E01-G3C : [123I]IHPEM. Радиохимическая чистота всех радиоконъюгатов составила более 95 %.
5. На основе таргетных белков DARPin разработаны одностадийные способы прямого радиосинтеза иод-123-содержащих DARPin E01 и DARPin G3, позволяющие получить DARPin [123I]I-E01 и DARPin [123I]I-G3 с высокими радиохимическими выходами (83 ± 2 % и >95% соответственно) и чистотой (более 99%). Показано, что DARPin [123I]I-(HE)3-G3 специфично и с высокой аффинностью связывается с опухолевыми клетками с экспрессией HER2/neu (константа диссоциации 3,2 ± 0,5 нмоль) и позволяет дифференцировать опухоли с экспрессией целевого рецептора от опухолей без экспрессии.
6. Разработаны принципиальные схемы радиосинтеза 123Рпростетических групп и DARPin [123I]I-(HE)3-G3 для получения новых таргетных радиофармацевтических лекарственных препаратов.
