ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Культивирование микроорганизмов как важнейший метод
исследований в микробиологии 6
1.2 Рост и развитие популяции микроорганизмов 14
1.3 Промышленное культивирование микроорганизмов 27
1.4 Особенности культивирования PGPR-бактерий 28
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 43
2.1 Характеристика материалов и объектов исследования 43
2.1.1 Оборудование 43
2.1.2 Bacillus subtilis 44
2.1.3 Картофельная палочка 51
2.1.4 Микромицеты р. Fusarium 52
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 60
3.1 Изучение культурально-морфологических свойств Bacillus subtilis,
штамм ИПМ 215 и штамм М-22 ВИЗР 60
3.2 Влияние факторов внешней среды на культивирование Bacillus
subtilis 61
3.3 Изучение биологической активности штаммов Bacillus subtilis 64
ВЫВОДЫ 68
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 70
Актуальность исследования. В настоящее время в целях повышения продуктивности сельскохозяйственных растений большое внимание уделяется использованию биопрепаратов, изготовленных на основе ассоциативных азотфиксирующих штаммов бактерий. Применение их, как показывают многочисленные исследования позволяет усилить ростовые процессы, улучшить минеральное питание растений, особенно азотом, защитить их от патогенов и снизить химическую нагрузку на окружающую среду и уменьшить действие стрессовых условий.
Все изученные к настоящему времени механизмы положительного влияния псевдомонад на растения можно условно разделить на два типа:
1) прямая или непосредственная стимуляция роста растений за счет синтеза различных метаболитов, полезных для растений;
2) опосредованная стимуляция роста растений за счет вытеснения и подавления развития почвенных фитопатогенов или микроорганизмов, угнетающих рост растений. К первому типу, прежде всего, можно отнести способность PGPR Pseudomonas синтезировать регуляторы роста растений и улучшать фосфорное питание растений. Кроме того, некоторые штаммы псевдомонад способны к фиксации атмосферного азота и индукции у растений устойчивости к фитопатогенам.
Уже в настоящее время возможно эффективное использование штаммов PGPR Pseudomonas, правильно подобранных к конкретным условиям определенного хозяйства в качестве биологических средств защиты растений, являющихся дополнением, а иногда и альтернативой химическим средствам. Активно ведущиеся исследования в этом направлении и разрабатываемые новые технологии существенно повысят эффективность этих биопрепаратов.
Для роста бактерий, кроме состава питательной среды, имеют значение кислотность среды, аэрация, температура, свет и влажность. Большинство бактерий растет при рН 6,8-8,0, т. е. в нейтральной среде. Поддержание нейтрального значения рН, особенно важно для кислотопродуцирующих бактерий. В процессе промышленного культивирования бактерий в больших объемах рН среды регулируется автоматически добавлением растворов бикарбоната натрия или щелочей. Газовый состав среды также важен для бактерий.
Значительная часть из них нуждается в постоянном притоке молекулярного кислорода. Такие микроорганизмы объединены в группу облигатных аэробов. Меньшая часть бактерий - облигатные анаэробы - способны развиваться только в отсутствии кислорода.
Использование в практике сельского хозяйства биологических препаратов, созданных на основе азотфиксирующих микроорганизмов и ри- зобактерий, стимулирующих рост растений (plant growth-promoting rhizobacteria — PGPR-бактерий), является одним из технологических приемов, способствующих повышению урожая культурных растений и накоплению в почве биологического азота. Перспективны также двух-, трех- и четырехкомпонентные микробные препараты, включающие клубеньковые бактерии, ризобактерии, микоризные грибы и биологически активные вещества.
PGPR-бактерии характеризуются рядом положительных (прямых и опосредованных) эффектов действия на растения, среди которых определяющими являются способность к фиксации молекулярного азота атмосферы, синтез веществ гормональной природы, а именно, ауксиновой, гиббереллиновой, цитокининовой, витаминов, веществ антибиотической и ан- тифунгальной природы, способность к мобилизации труднорастворимых фосфатов почвы и разложению вредных химических соединений.
Многие микроорганизмы, ассоциированные с растениями, способны синтезировать вещества фитогормональной природы, необходимые им как для собственного развития, так и для установления связей с растениями и другими почвенными микроорганизмами. Образование гормонов одно из важных свойств ризосферных, эпифитных и симбиотических бактерий, стимулирующих рост растений .
Таким образом, грамотное применение бактериальных препаратов на основе ростстимулирующих ризобактерий как элемента экологического земледелия в технологиях выращивания различных сельскохозяйственных культур позволяет существенно снизить химическую нагрузку на экосистемы вследствие уменьшения количеств применяемых минеральных удобрений и химических средств защиты растений, приводит к повышению урожайности и улучшению качества экологически чистой сельскохозяйственной продукции.
Объектом исследования являются - PGPR-бактерии.
Предметом исследования являются культуральные свойства и активность PGPR-бактерий.
Цель исследования - изучение влияния условий культивирования на активность PGPR бактерий.
Для достижения поставленной цели, необходимо решить следующие задачи:
• Изучить и проанализировать и литературные данные по теме;
• Определение культивационной активности бактерий в коммерческих препаратах
• Культивирование бактерий в различных условиях (температуры, среды, длительность культивирования);
• Подбор оптимальных условий культивирования.
Данная работа включает введение, обзор литературы, описание объектов и методов исследования, изложение результатов экспериментов и их обсуждение, выводы и список упоминаемых в тексте литературных источ-
ников.
2. Инокуляция семян B. Subtilis не только не оказывают фитотоксичного эффекта на семена, но и вызывает стимуляцию формирования проростков до 40 % сравнению с контролем.
3. Фунгицидная активность B. subtilis меняется в зависимости от сроков культивирования бактерий и возраста грибов рода Fusarium. Максимальная фунгицидная активность штамма Bacillus subtilis проявляется через 72-96 часов культивирования.
Неоднозначная реакция разных видов грибов р. Fusarium на действие микробов-антагонистов отмечена в ряде исследований. Возможно это можно объяснить неодинаковыми значениями факторов внешней среды, что в свою очередь меняет физиологические свойства как микромицетов, так и бактерий.
1. Авраменко И. Ф. Микробиология. М.: Колос, 1970.
2. Акимова Е.Е. Иследование влияния бактерий Pseudomonas sp. На фитопатогенные грибы и высшие растения: дис. .. .канд.биол.наук. Томск, 2007.
3. Аникиев В.В., Лукомская К.А. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - М.: «Просвещение», 1977.
4. Боронин А.М. Ризосферные бактерии рода Pseudomonas способствующие росту и развитию растений Соросовский образовательный журнал.-1998-№10.
5. Бурова Ю.А., Ибрагимова С.А., Ревин В.В. Действие культуральной жидкости бактерии Pseudomonas aureofaciens на развитие семян пшеницы и фитопатогенных грибов, Известие ТулГУ.-2012 - Естественные науки №3.
6. Возняковская Ю.М. Использование метода идентификации бактерий в иследованиях ризосферной микрофлоры и ее роли в жизни растений. Труды ВНИИ сельскохозяйственной микробиолгии.-1980.-№49.
7. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология. 2003 г.
8. Гажеева Т.П., Гордеева Т.Х., Масленникова С.Н. Динамика численности и состава микроорганизмов ризосверы некторых злаковых растений в процессе их роста и развития. Весник ОГУ.- 2011.-№12.
9. Глушанова Н.А., Блинов А.И., Бахаев В.В. Об антагонизме пробиотических лактобацилл // Эпидемиология и инфекционные болезни, №6, 2004. - С.37-39.
10. Горбунов О.П. Бактерии рода Pseudomonas - углеродный цикл, защита и стимуляция растений Вестник Института биотехнологии и физико-химической технологии им. Ю.Л. Овчинникова 2008 т.4 №1
11. Гусев М.В., Минеева Л.А Микробиология: Учебник для студентов биологических специальных ВУЗов. - "Академия, 2003.
12. Дикий И.Л. и соавт. Микробиология. Харьков, 1999.
13. Долгих Я.В., Несчисляев В.А., Белова И.В. Сравнительная характеристика поликомпонентных пробиотиков // Вестнику Уральской Медицинской Академической науки. - 2011. - №4/1. -С.97.
14. Иванова Е.Ю. Микробиология: Учебно-методическое пособие. - Воронеж: Изд-во ВГУ, 2004.
15. Инструкция по предупреждению картофельной болезни хлеба. Разработана ГосНИИХП РАСХН. Введена в действие с 15.10.98 г...44