Список сокращений 4
Введение 5
Глава 1. Обзор литературы 7
1.1. Развитие предстательной железы, анатомическая и гистологическая характеристика предстательной железы человека 7
1.2. Клеточный состав железистого и стромального компартмента ПЖ, маркеры эпителиальных и стромальных клеток ПЖ 10
1.3. Стволовые клетки ПЖ 12
1.4. Взаимодействие эпителиальных и стромальных клеток ПЖ в норме и при возникновении рака 15
1.5. Эпителиально-мезенхимный переход и его роль в механизме злокачественной трансформации ПЖ 19
1.6. Роль сигнального пути Wnt/b-катенин в развитии рака предстательной 22
Глава 2. Материалы и методы 26
2.1. Клеточные линии и культивирование клеток 26
2.2. Получение первичных культур 26
2.3. Пассирование клеток 27
2.4. Консервация и деконсервация клеток 27
2.5. Иммунофлуоресцентное окрашивание 28
2.6. Иммуногистохимическое окрашивание 29
Глава 3.Результаты 31
3.1. Маркерный профиль контрольных клеточных линий мезенхимного происхождения 31
3.2. Маркерный профиль контрольных клеточных линий эпителиального происхождения 32
3.3. Продукция мезенхимных маркеров на 2-ом и 7-ом пассажах в стромальных клетках ПЖ 33
3.4. Продукция эпителиальных маркеров на 2-ом и 7-ом пассажах в стромальных клетках ПЖ 36
3.5. Продукция регуляторных маркеров на 2-ом и 7-ом пассажах в стромальных клетках ПЖ 38
3.6. Маркерный профиль стромального компартмента нормальной и опухолевой ткани ПЖ по данным иммуногистохимии 41
Глава 4. Обсуждение 44
Выводы 48
Список литературы 49
Рак предстательной железы (ПЖ) - заболевание, занимающее четвёртое место по частоте среди раковых заболеваний в популяции и второе место - среди мужского населения в мире (Siegel et al., 2016). Риск развития рака ПЖ коррелирует с возрастом и обычно детектируется у пациентов старше 60-70 лет. В настоящее время ключевыми методами диагностики рака ПЖ являются макроскопическое исследование и определение уровня секреции ПСА, однако они обладают рядом недостатков, среди которых возможность ложноположительных результатов и недостаточно высокий уровень точности, что не позволяет достоверно предсказывать дальнейшее течение болезни и возможность рецидива (Bickers & Aukim-Hastie, 2009). Исходя из данных предпосылок, многочисленные исследования направлены на поиск более надёжных маркеров рака ПЖ. Одним из возможных направлений данных исследований является поиск маркеров, характерных для стромальных клеток в очаге опухолеобразования, что связано с ключевой ролью эпителиально-мезенхимных взаимодействий в ПЖ.
ПЖ является трубчато-альвеолярной железой, образованной двумя компартментами - эпителиальным и стромальным. Эпителий представлен тремя популяциями клеток: люминальными, базальными и нейроэндокринными. Основными типами клеток в строме являются ГМК, фибробласты и миофибробласты. Взаимодействие двух компартментов необходимо как в ходе развития ПЖ в эмбриогенезе, так и во взрослом состоянии, и обеспечивает нормальное функционирование органа. Нарушение нормального взаимодействия клеток может приводить к развитию рака. В подавляющем большинстве случаев трансформации подвергаются эпителиальные, а не стромальные клетки. Раковые клетки оказывают влияние на окружающую их строму и могут даже индуцировать их трансформацию. Изменённые стромальные клетки отличаются от нормальных, способствуют пролиферации опухолевых клеток и помогают им избегать иммунного надзора (Niu et al., 2009). Однако, на сегодняшний день характер продукции различных маркеров и изменение их уровня синтеза в стромальных клетках при развитии рака ПЖ описаны недостаточно.
Цель настоящего исследования: охарактеризовать продукцию мезенхимных, эпителиальных и регуляторных маркеров в первичных культурах стромальных клеток, полученных из нормальной и опухолевой ткани ПЖ человека, на ранних и поздних пассажах.
В рамках данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Получить первичные культуры стромальных клеток из нормальной и опухолевой ткани ПЖ пациентов, подвергнутых радикальной простатэктомии по поводу рака предстательной железы.
2. Оценить на 2-7 пассажах продукцию стромальными клетками нормальной и опухолевой ткани ПЖ мезенхимных (N-кадгерин, виментин), эпителиальных (Е-кадгерин, ЦК8) и регуляторных маркеров (Р-катенин, Slug).
3. Провести сравнительный анализ продукции маркеров стромальными клетками нормальной и опухолевой ткани ПЖ в ходе их культивирования.
Выводы:
1. Были получены и криоконсервированы четыре первичных культуры стромальных клеток нормальной и опухолевой ткани предстательной железы пациентов, подвергнутых радикальной простатэктомии по поводу рака предстательной железы.
2. Стромальные клетки нормальной и опухолевой ткани продуцируют мезенхимные, эпителиальные и регуляторные маркеры. На 2 пассаже между клетками наблюдается больше сходства в продукции данных маркеров, чем на 7 пассаже.
3. В ходе культивирования стромальных клеток нормальной и опухолевой ткани предстательной железы выявлено сходство в изменении характера продукции одних маркеров (виментин, цитокератин 8, Slug) и разница в изменении характера продукции других маркеров (N-кадгерин, Е-кадгерин, Р-катенин).
