СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ 3
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 5
1. Роль мутации янускиназы JAK2 V617F в патогенезе первичного миелофиброза 5
2. Фиброциты - костномозговые предшественники стромальных коллаген продуцирующих клеток, найденные в периферической крови 8
2.1. Открытие фиброцитов при изучении процесса заживления раны 8
2.2. Фиброциты проявляют особенности как гемопоэтических, так и стромальных клеток 9
2.2.1. Морфология и поверхностные маркеры фиброцитов 9
2.2.2. Фиброциты дифференцируются в миофибробласты 13
2.2.3. Трудности идентификации фиброцитов 14
2.3. Источник фиброцитов 18
2.4. Функции фиброцитов в норме и при патологии 19
ГЛАВА 2. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ 22
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 23
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 27
ВЫВОДЫ 35
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 36
Фиброциты - клетки веретеновидной формы производные CD14+ моноцитов, которые обладают особенностями как гемопоэтических (содержат маркеры CD 45, CD 34), так и стромальных клеток (адгезивные, синтезируют белки внеклеточного матрикса). Несмотря на их небольшую долю от циркулирующих лейкоцитов в норме, они играют важную роль во многих патологических состояниях, связанных с фиброзом, тканевым ремоделированием или хроническим воспалением, таких как легочный и нефрогенный системный фиброз, склеродермия, кардиоваскулярные заболевания, а также первичный миелофиброз. Первичный миелофиброз относится к Ph негативным заболеваниям, основным критерием определения которого служит миелофиброз - явление, разрастания коллагеновых волокон в красном костном мозге с последующим вытеснением гемопоэтической ткани в другие органы и нарушением гемопоэза. Отсутствие соответствующей терапии миелофиброза связано с его неясной этиологией. Считается, что первичный миелофиброз развивается в результате злокачественной трансформации в гемопоэтических стволовых клетках, что приводит к нарушению клеточных сигнальных путей, регулирующих клеточный рост, активацию, дифференцировку, адгезию и апоптоз. Клональная миелопролиферация сопровождается изменением стромы костного мозга и патологической выработкой цитокинов и металлопротеиназ, которые могут участвовать в нарушении межклеточных взаимодействий нейтрофилов, моноцитов и мегакариоцитов, приводя к выходу CD34+ миелоидных предшественников и эндотелиальных клеток в периферическую кровь. Первоначальная причина, ведущая к злокачественной трансформации неизвестна, однако, для значительной части пациентов с первичным миелофиброзом наиболее характерна точечная мутация в гене янускиназы JAK2 V617F, которая приводит к гиперактивации янускиназы и фосфорилированию белков - мишеней в отсутствие стимуляции рецепторов, к запуску JAK-STAT сигнального пути и избыточной пролиферации миелоидного ростка.
ВЫВОДЫ
> Общепринятый протокол получения фиброцитов из первичной культуры периферических мононуклеаров крови в бессывороточной среде не подходит для получения фиброцитов из клеточной линии моноцитов ТНР-1: клетки остаются в суспензионном состоянии и не дифференцируются. Добавление форболового эфира в среду культивирования приводит к дифференцировке моноцитов, при этом образуется смешанная популяция клеток, морфологически схожих как с макрофагами, так и с фиброцитами. Уменьшение содержания сыворотки и форболового эфира в среде культивирования увеличивает долю веретеновидных клеток, схожих с фиброцитами.
> Прямое сокультивирование моноцитов линии ТНР-1 и КМ МСК позволяет получить адгезионные моноциты без применения форболового эфира в бессывороточных условиях. При этом клетки прикрепляются вдоль коллагеновых фибрилл или на поверхность КМ МСК.
> Моноциты ТНР-1, активированные форболовым эфиром, синтезируют маркер фиброцитов - коллаген I типа. Доля клеток, положительных по коллагену I типа, составляет 47%.
> Активированные форболовым эфиром моноциты ТНР-1, несущие мутацию JAK2 V617F, достоверно более вытянутые, чем немодифицированные клетки дикого типа, что указывает на сдвиг в сторону образования фиброцитов.
> Клетки ТНР-1 с экспрессией JAK2 синтезируют повышенное количество ММР2 по сравнению с немодифицированными клетками.
> Моноциты THP-1 с мутацией JAK2 V617F стимулируют синтез коллагена в клетках КМ МСК, что свидетельствует о возможной роли моноцитов в патогенезе миелофиброза.
