Список принятых сокращений 3
Введение 4
Цель и задачи исследования: 5
1. Обзор литературы 6
1.1. Эпидемиология рака легкого 6
1.2. Модели для изучения опухолей рака легкого 8
1.3. Маркеры пролиферации, используемые в клинической практике 14
1.4. Методы терапии опухолей легкого 15
1.4.1. Цитостатические препараты 15
1.4.2. Таргетные препараты 17
2. Материалы и методы 21
2.1. Материал 21
2.2. Получение пластинок 21
2.3. Иммуногистохимическое исследование 22
2.4. Анализ экспрессии маркеров пролиферации 23
2.4.1. Выделение РНК 23
2.4.2. Молекулярно-генетический анализ 24
2.5. Транскриптомное секвенирование 24
3. Результаты и обсуждение 26
Выводы 33
Благодарности 34
Список литературы 35
Рак легкого занимает позицию одного из самых частых онкологических новообразований: ежегодно диагностируется более 2 миллионов случаев [Globocan, 2020]. Данные опухоли также характеризуются большим количеством рецидивов. Наиболее часто встречается немелкоклеточный рак легкого, включающий в себя плоскоклеточные карциномы и аденокарциномы. Несмотря на успехи в применении таргетной терапии, использование цитостатиков, в частности производных платины, является основным подходом к лекарственной терапии РЛ. В связи с широкой распространенностью заболевания необходимо изучить не только механизмы канцерогенеза, но и чувствительность опухолей на лекарственные препараты. Поиск адекватных in vitro моделей для оценки химиочувствительности опухолей является одной из актуальных проблем персонализированного похода в онкологии. Имеющиеся на данный момент модели первичных клеточных культур (2D-, 3D- культивирование), клеточных сфероидов, опухолевых ксенографтов используются в основном в качестве экспериментальных. Дискордантность транскриптомных и геномных профилей в таких моделях по сравнению с первичной опухолью не позволяет использовать их в рутинной клинической практике.
В связи с этим перспективной моделью для оценки химиочувствительности немелкоклеточных опухолей легкого представляются 3D-модели, сохраняющие пространственную структуру ткани и межклеточное взаимодействие - так называемые тканевые экспланты (опухолевые срезы, tumor tissue slices). Дополнительным преимуществом данной модели является возможность подобрать наиболее рациональную схему лечения, основанную на индивидуальных особенностях опухоли конкретного пациента. Экспланты представляют собой тонкие срезы опухолевой ткани (300-400 мкм), которые при помещении в питательную среду могут поддерживать жизнеспособность до 7 суток [Meijer et al., 2017]. Возможность использования пластинок для проведения краткосрочных тестов сразу нескольких противоопухолевых препаратов делают данную модель перспективной для использования в клинике.
Выводы
1. Выполнены работы по получению и инкубации тканевых эксплантов опухолей легкого с цисплатином и гефитинибом для образцов 28 пациентов.
2. После инкубации в части материала было выявлено структурное изменение ткани, связанное с действием цитостатических и таргетных препаратов. Сохранность большей части материала представляется удовлетворительной.
3. Выполнен анализ клинически значимых мутаций в первичных опухолях, включенных в исследование. В качестве положительных контролей чувствительности к гефитинибу определены опухоли с активирующими мутациями гена EGFR.
4. Коэффициент корреляции результатов иммуногистохимического и ПЦР- анализа уровня экспрессии маркера пролиферации ki-67 составил R2=0,27, что свидетельствует о значительной дискордантности результатов, полученных этими методами.
5. По результатам транскриптомного секвенирования в качестве потенциальных маркеров реакции опухолевой ткани на воздействие цисплатина были выбраны гены HEXIM1, HSPA2, TOB1 и TSYPL2.
6. Тканевые пластинки представляются перспективной моделью для оценки эффекта лекарственной терапии ex vivo.
