Введение
1 Литературный обзор 7
1.1 Способы измерения ADMET характеристик 7
1.2 Ингибиторы PI3K 15
2 Результаты и обсуждения 33
3 Экспериментальная часть 41
3.1 Реагенты и оборудование 41
3.2 Объекты исследования 41
3.3 Биологические испытания 42
3.4 Методика эксперимента 43
3.5 Определение эффективной проницаемости 44
Заключение 45
Список используемой литературы 46
Открытие и разработка лекарств являются длительными и дорогостоящими процессами, которые сопровождаются высоким риском неудачи. Как правило, разработка лекарственного средства от начальных этапов идентификации цели до его вывода на рынок занимает от 15 до 20 лет, а стоимость вывода лекарства на рынок оценивается почти в 1,2 миллиарда долларов. По оценкам FDA, в конечном итоге на рынок попадают только 8% соединений, которые входят в I фазу клинических исследований [1]. Однако, с каждым годом инвестиции в фармацевтические исследования увеличиваются, а количество одобренных лекарств остается неизменным или даже уменьшается. Важную роль для решения этой проблемы играет повышение качества лекарственного средства, включая их эффективность, фармакокинетику и безопасность.
Большая часть убыли биологически активных веществ связана с плохими характеристиками ADMET, т.е. адсорбцией, распределением, метаболизмом, экскрецией и токсичностью. Поскольку по мере разработки лекарств затраты только растут, эта проблема потребовала перехода к стратегии «ранний сбой - дешевый сбой», которая позволяет изучать качественные характеристики уже на ранних этапах. Соединения с «нецелевой» активностью, с воздействием на различные мишени, не связанные с терапевтической мишенью, несут ответственность за нежелательную лекарственную реакцию и могут серьезно ограничить использование лекарственного средства и помешать его переходу в фазы клинических испытаний [1].
В представленной работе рассматриваются результаты исследований по оценке адсорбции, как одного из параметров характеристик ADMET, потенциальных ингибиторов PI3k киназ на основе 5-цианопиримидинового скаффолда.
В ходе настоящего исследования были достигнуты поставленные цели и задачи:
1. Проанализирована литература по теме, указаны актуальные в настоящее время способы измерения ADMET характеристик. Большинство ингибиторов PI3K киназ в настоящее время находятся на стадии доклинических и клинических испытаний. Они обладают высокой ингибирующей активностью в наномолярных диапазонах и высокой клеточной проницаемостью. Большинство ингибиторов всех изоформ PI3K I класса содержат пиримидиновые и бензопиримидиновые скаффолды и их аналоги;
2. Отработана стандартная методика анализа клеточной проницаемости на модели СаСО-2, в частности ее хроматографическая часть. Согласно этой методики, клетки линии СаСО-2 высевали на мембранные вставки ПЭТ при плотности 75000 клеток/см2. Концентрация исследуемых препаратов в апикальной и базолатеральной частях контролировалась методом ОФ ВЭЖХ. Для количественного анализа был выбран метод абсолютной градуировки. Для исследованных в работе 5- цианопиримидинов получены градуировочные зависимости с высокими коэффициентами корреляций;
3. Для рассмотренных 5-цианопиримидинов по данным проведенного эксперимента рассчитана эффективная проницаемость. Данная ADMET-характеристика является важной для перорального пути введения лекарственных средств. Все исследуемые пиримидиновые производные обладают высокой проницаемостью в диапазоне 68.8-10-6 - 136.6-10-6 см/с, следовательно, могут быть рекомендованы для дальнейшего исследования их возможного применения в качестве ингибиторов киназ.
