Введение 1
1 Флавоноиды кипрея узколистного Chamerion angustifolium L. И способы их
извлечения 9
1.1 Описание кипрея узколистного 9
1.2 Химический состав кипрея узколистного 11
1.3 Идентификация групп флавоноидов методом УФ - спектроскопии 21
1.4 ИК-спектральный анализ флавоноидов 23
1.5 Традиционная экстракция 24
1.6 Суб- и сверхкритическое состояние веществ. Методы суб- и
сверхкритической экстракции 26
2 Получение и анализ экстрактов кипрея узколистного 29
2.1 Отбор проб лекарственного растительного сырья 29
2.2 Измельчение растительного сырья 30
2.3 Определение массовой доли влаги сырья 31
2.4 Определение золы 35
2.5 Элементный состав золы растительного сырья 37
2.6 Методики получения экстрактов из кипрея узколистного 40
2.7 Качественные реакции на флавоноидные соединения 41
2.8 Методика УФ-спектроскопического исследования экстрактов кипрея узколистного 44
2.9 Методика ИК-спектроскопического исследования флавоноидных соединений кипрея узколистного 45
2.10 Количественное определение флавоноидов в экстрактах в пересчете на рутин 45
2.11 Обработка результатов эксперимента 46
2.12 Техника безопасности 47
2.12.1 Общие правила техники безопасности при работе в химической лаборатории 47
2.12.2 Техника безопасности при работе с реактивами, используемыми в работе 50
3 Извлечение флавоноидов из надземной части кипрея узколистного (Chamerion angustifolium L.) в субкритических условиях 52
Выводы 63
Библиографический список 65
Приложение А 72
Приложение Б 80
В последние годы наравне с поиском новых лекарственных растений ведется углубленное исследование сырья, обычно используемого в медицине. Данные исследования ориентированы, в первую очередь, на установление строения биологически активных веществ и разработку современных и объективных методик стандартизации растительного сырья [1-2].
Кипрей узколистный (Chamaenerion angustifolium L.)- одно из самых интересных растений. Значительное содержание в нем БАВ (биологически активных соединений) обусловливает широкое терапевтическое
использование его извлечений, так как они показывают значительную бактерицидную, антиоксидантную, противоопухолевую, и противовирусную активности. Лечебно-профилактические средства на основе иван-чая мало токсичны, обладают очень хорошим обволакивающим и
противовоспалительным действием [3-5].
Актуальность данной работы связана с тем, что кипрей узколистный является доступным и широко распространенным растительным сырьем, и источником биологически активных соединений. Кипрей узколистный не применяется официально и не включен в Государственную фармакопею РФ несмотря на достаточные сырьевые запасы и длительную историю использования в народной медицине.
На сегодняшний день, на основе травы кипрея узколистного, производители изготавливают только различные биологически активные добавки к пище. Вследствие этого разработка критериев стандартизации сырья кипрея узколистного является актуальной задачей.
Целью работы является извлечение и характеризация флавоноидов из надземной части кипрея узколистного (Chamerion angustifolium L.) в субкритических условиях и традиционным методом.
Для достижения цели были сформулированы и решались следующие задачи:
1. Провести анализ литературных источников по особенностям морфологического строения, химического состава экстрактивных веществ растительного сырья кипрея узколистного и способам экстрагирования БАВ из растительного сырья.
2. Подготовить растительное сырье для экспериментальной части, определить его подлинность и доброкачественность. Определить влажность надземной части кипрея узколистного в соответствии с ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» термогравиметрическим методом и с использованием экспресс-метода на анализаторе влажности Sartorius МА-150.
3. Освоить и разработать методики получения экстрактивных веществах из биомассы надземной части кипрея узколистного водой 40%, 70% и 96%-ным раствором этанола в традиционных и субкритических условиях.
4. Проанализировать извлечения из биомассы надземной части кипрея узколистного методами ИК- и УФ-спектроскопии.
5. Провести количественное определение флавоноидов в экстрактивных
веществах из биомассы надземной части кипрея узколистного выделенных водой 40%, 70% и 96%-ным раствором этанола в
традиционных и субкритических условиях.
6. Провести обсуждение полученных результатов и сформулировать выводы.
1. Проведено определение влажности надземной части кипрея узколистного в соответствии с ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» термогравиметрическим методом (6,3±0,2%) и с использованием экспресс-метода с анализатором влажности МА150 Sartorius (6,3±0,2 %). Установлена абсолютная сходимость результатов определения, что позволяет рекомендовать в ОФС инструментальный метод для определения влажности, взамен существующего.
2. В результате проведения качественных реакций для образцов экстрактов из надземной части кипрея узколистного с металлическим магнием в солянокислой среде, раствором аммиака, раствором аммиака и карбонатом натрия, серной кислотой, основным ацетатом свинца, борной и лимонной кислотой обнаружено присутствие флавоноидов в изучаемом сырье, что свидетельствует об его подлинности.
3. Сравнительный анализ ИК-, УФ- спектральных характеристик извлечений из биомассы надземной части кипрея узколистного с использованием воды, 40%, 70% и 96%-ных растворов этанола в субкритических и традиционных условиях свидетельствует об их флавоноидной природе.
4. Выявлено, что наиболее подходящим из изученных экстрагентов для извлечения флавоноидов является 70%-ный водный раствор этанола, как в традиционных, так и сверхкритических условиях в течение 30 минут: максимальное содержание флавоноидов (в пересчете на рутин) составило 3,30% и 3,36% соответственно; минимальное - 2,97% и 3,03% соответственно при использовании 96% -ного водного раствора этанола.
5. Установлено, что количество флавоноидов (в пересчете на рутин), извлеченных 70%-ным раствором этанола традиционным способом (3,30%) из биомассы надземной части кипрея узколистного несколько
ниже, чем при извлечении их с использованием субкритических условий (3,36 %). Аналогичные зависимости получены при
использовании в качестве экстрагентов воды, 40% и 96%-ных растворов этанола.
6. Показано, что количественное содержание флавоноидов (в пересчете на рутин) не возрастает при увеличении продолжительности экстракции с 30 минут до 60 минут как субкритических условий (3,36% и 3,29% соответственно), так и традиционным способом (3,30% и 3,25% соответственно) при использовании 70%-ного водного раствора этанола. Аналогичные зависимости получены при использовании в качестве экстрагентов воды, 40% и 96%-ных растворов этанола.
1. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов
фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «Сам ГМУ», 2004. - 1180с.
2. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: Учебное пособие / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. - Спб.: Спец. Лит, 2004. - 765с.; ил.
3. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи.
Фармакогнозия. - Москва: АНМИИ, 1999г. - 534с.
4. Русский Иван-чай / В.Ф. Корсун [и д р.]. М.: Артём, 2013. 140 с.
5. Минаева, В.Г. Лекарственные растения Сибири / В.Г. Минаева. - Новосибирск: Наука, 1991. - 431 с.
6. Сыркин, А.Б. Химико-фармацевтический журнал / А.Б. Сыркин, О.И. Коняева. - 1984. - Вып. 10. -С. 1172-1180.
7. Манивчук, Ю.В. Растительные ресурсы / Ю.В. Манивчук. - 1971. - Т. 7.
- Вып. 2. - С. 208-214.
8. Заворохина, Н. В. Чайные напитки антиоксидантной направленности на основе кипрея узколистного / Н. В. Заворохина, О. В. Чугунова, В. В. Фозилова // Пиво и напитки. - 2013. - № 1. - С. 28 - 31.
9. 929. Chamerion angustifolium (L.) Holub [Epilobium angustifolium L., Chamaenerion angustifolium (L.) Scop.]. Иван-чай узколистный / И. А. Губанов [и др.] // Иллюстрированный определитель растений Средней России. В 3 т. М.: Товарищество научных изданий КМК, Ин-т технолог. иссл., 2003. Т. 2. Покрытосеменные (двудольные: раздельнолепестные). С. 584.
10. Валов Р.И. Фармакогностическое исследование надземной части Chamaenerion angustifolium (L.) Scop. Дис. канд. фарм. наук. Улан-Удэ, 2012. 192 с.
11. Рахимова Г.К., Комилов Х.М. Анатомическая диагностика листьев Иван-чая//Фармацевтический журнал.-Ташкент, 2010.-No2.-C17-18
12. Киселева Т. Л., Ермакова В. А. К вопросу стандартизации сырья соцветия кипрея узколистного // Фармацея. 1984. №5. С. 12-13.
13. Kaskoniene V., Stankevicius M., Drevinskas T., Akuneca I., Kaskonas P., Bimbiraite-Surviliene K., Maruska A., Ragazinskiene O., Kornysova O., Briedis V., Ugenskiene R. Evaluation of phytochemical composition of fresh and dried raw material of introduced Chamerion angustifolium L. using chro-matographic, spectrophotometric and chemometric techniques. Phytochemistry. 2015, 115:184-193.
14. Сасов, С.А. Химия природных соединений / С.А. Сасов, М.Ф. Петрова.
• 1986. - Вып. 1. - С. 106-107.
15. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. Т. 3. Ленинград: Наука, 1987. С. 328...