Перечень условных обозначений 4
Введение 5
Глава 1. Литературный обзор 8
1.1 Этиология воспалительных заболеваний пародонта 8
1.2 Патогенез воспалительных заболеваний пародонта 14
1.3 Микробиология полости рта 16
1.3.1 Микробная флора полости рта в норме 16
1.3.2 Микробиота пародонтального кармана при ХГП 18
1.4 Вирулентные свойства пародонтопатогенов 20
1.5 Антибиотики в комплексном лечении заболеваний пародонта...28
1.5.1 Антибактериальные препараты, используемые для
лечения ХГП 29
1.5.2 Способы применения антибактериальных препаратов и
схемы назначения 32
Глава 2. Материалы и методы исследования 35
2.1 Клиническая характеристика пациентов 35
2.2 Оценка стоматологического статуса пациентов 35
2.3 Рентгенологический метод исследования 40
2.4 Микробиологические и генетические методы исследования 41
2.4.1 Забор материала 41
2.4.2 Культуральные среды и условия роста 41
2.4.3 Выделение чистой культуры 42
2.4.4 Выделение тотальной ДНК из исходного биологического
материала 43
2.4.5 Конструирование олигонуклеотидных праймеров 43
2.4.6 Электрофорез ДНК 45
2.4.7 Определение антибиотикочуствительности 45
2.5 Компьютерный анализ 47
Глава 3. Результаты исследования 48
3.1 Результаты клинических исследований 48
3.2 Результаты рентгенологического исследования 51
3.3 Результаты микробиологических исследований 51
3.3.1 Выделение факультативных и облигатных анаэробов ....51
3.3.2 Идентификация выделенных культур 55
3.3.3 ПЦР-скрининг на пародонтопатогены
57
3.4 Анитибиотикочувствительность идентифицированных чистых
культур 59
Глава 4. Заключение и выводы 65
4.1. Заключение 65
4.2 Выводы 66
4.3 Практические рекомендации 67
Список литературы 68
Приложения 72
Воспалительные заболевания пародонта (ВЗП) занимают лидирующее место по частоте и распространённости среди стоматологических заболеваний. Они представляют наиболее серьезную проблему в теоретической и практической стоматологии, в связи со сложностью диагностики, лечения и реабилитации пациентов [Булкина Н.В., Моргунова В.М., 2016].
ВЗП являются причиной, приводящей к существенному сокращению функциональных возможностей зубочелюстной системы в связи с потерей зубов. Данная группа заболеваний оказывает негативное влияние на состояние всего организма в целом, так как ухудшаются показатели здоровья и качества жизни человека [Цепов JI.M., 2006; Белоусов H.H., 2009; Янушевич О.О., 2009].
В последнее время проблема заболеваний пародонта является особенно актуальной в связи с упорным ростом этой патологии, особенно у пациентов молодого и среднего возраста [Киселёва Е.А., 2011].
В связи с полиэтиологичностью и большим количеством факторов риска в возникновении ВЗП возникают колоссальные трудно сти в диагностике, прогнозировании течения и лечении данных заболеваний [Грудянов А.И., 2006].
Основной причиной возникновения и развития ВЗП является взаимодействие микробного содержимого зубной бляшки и локального тканевого ответа на нее [Грудянов А.И., 2009; Орехова Л.Ю, 1997].
В связи с огромным количеством накопленных знаний о роли разных видов микроорганизмов в развитии заболеваний пародонта, ВОЗ (1994-1995) рекомендовала среди нормальной или резидентной флоры полости рта с анаэробным типом дыхания выделять, так называемые, «пародоптопатогенные» виды. Пародонтопатогены отличаются от других микроорганизмов высокими адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами по отношению к тканям пародонта [Артюшевич А.С., 2002, Царев В.Н., 2004].
В настоящее время основополагающим компонентом научных исследований по-прежнему остается изучение микробного фактора [Грудянов А. И., Фролова О. А., 2008].
Существует необходимость разработки новых современных методов лечения с использованием дифференцированного применения лекарственных средств . Имеются трудно сти в выборе наиболее рационального и эффективного антибактериального препарата [Плахтий Л.Я., 2001].
Данная проблема связана с интенсивным и не всегда грамотным назначением антибиотиков, что привело к селекции и распространению множественно устойчивых штаммов микрофлоры, изменению структуры инфекции. Поэтому в настоящее время для осуществления и совершенствования комплексного персонализированного лечения ВЗП актуальным является выявление и идентификация пародонтопатогенной микрофлоры, а также определение чувствительности микробиоты пародонтальных карманов к антибиотикам.
Цель исследования:
Оценка антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом тяжелой степени тяжести (ХГП ТСТ).
Задачи исследования:
1. Оценить связь развития ХГП ТСТ с уровнем гигиены полости рта пациентов;
2. Изучить качественный и количественный состав микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с ХГП ТСТ;
3. Провести анализ антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с ХГП ТСТ;
4. Сформулировать рекомендации по применению антибактериальных препаратов у пациентов с ХГП ТСТ на основании клинико-микробиологических данных.
Научная новизна работы:
Проведена оценка антибиотикочувствительно сти выделенных чистых культур микробиоты пародонтальных карманов пациентов с ХГП ТСТ. С помощью масс-спектрометрии идентифицированы культуры - факультативные и облигатные анаэробы S. gordonii, S. oralis, N. flavescens,
S. anginosus, Staph. epidermidis, S. sanguinis, G. sanguinis, N. subflava, L. suebicus, S. moorei, Prevotella, S. constellatus.
Проведен ПЦР - скрининг на пародонтопатогены и определены P. gingivalis, T. forsythia, A. actinomycetemcomitans, P. intermedia.
Практическая значимость работы:
Антибиотики из группы бета-лактамов, макролидов, тетрациклинов и фторхинолонов, обладают наиболее выраженной активностью в отношении видов бактерий, вызывающих ВЗП. Это позволяет их рекомендовать в качестве эффективных средств комбинированного лечения ХГП ТСТ.
Целью настоящего исследования являлась оценка антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с ХГП ТСТ.
В исследовании приняли участие 7 пациентов в возрасте от 45 до 55 лет с ХГП ТСТ без тяжелой сопутствующей патологии. Были собраны жалобы пациентов и анамнез; проведены клинические (индексная оценка состояния тканей пародонта) и рентгенологические исследования; микро биологиче ские и генетиче ские исследования (культивирвание микроорганизмов, масс - спектрометрия, постановка ПЦР). В ходе исследования была изучена чувствительность идентифицированных чистых культур к антибиотикам разных групп (бета-лактамам, аминогликозидам, полипептидам , фторхинолонам, полимиксинам и макролидам).
Анализ результатов индексной оценки гигиены и состояния тканей пародонта показал, что все индексы соответствуют ХГП ТСТ и отражают тот факт, что развитие ХГП тесно связано с уровнем гигиены полости рта пациента, который у обследованных нами пациентов оказался неудовлетворительным. Наличие зубного налета и зубного камня несомненно является основополагающим фактором в развитии ВЗП. Воздействие пародонтопатогенов приводит к утрате пародонтального прикрепления и в последующем к образованию пародонтальных карманов, характеризующихся разрушением соединительного эпителия, который защищает пародонт от микробных метаболитов.
По результатам проведенного ПЦР - скрининга на пародонтопатогены у всех обследованных пациентов были выявлены P. gingivalis и T. forsythia, A. actinomycetemcomitans и P. intermedia.
С помощью масс - спектрометрии проводили идентификацию выделенных чистых культур.
Были идентифицированы факультативные анаэробы: S. gordonii, S. oralis, N. flavescens, S. anginosus, Staph. epidermidis, S. sanguinis, G. sanguinis, N. subflava, L. suebicus, S. moorei.
Дополнительно были идентифицированы облигатные анаэробы: S. constellatus, P. intermedia.
Подсчет КОЕ доминирующих факультативных анаэробов в исходном биологическом материале составил 105-106 КОЕ/мл.
Факультативные анаэробы в указанных концентрациях способны провоцировать развитие ХГП ТСТ.
По результатам антибиотикочувствительности можно сделать заключение, что выделенные из пародонтальных карманов факультативные анаэро бы высоко чувствительны к бета-лактамам : карбапенемам, цефало споринам и пенициллинам, большинство микроорганизмов чувствительны к макролидам, за исключением Staph. epidermidis, и фторхинолонам. Выявлена устойчивость выделенных микроорганизмов к аминогликозидам, полимиксинам.
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
