ВВЕДЕНИЕ 3
1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 5
1.1 Антоцианы: строение и свойства 5
1.2 Антоцианы в растительных объектах 8
1.2.1 Биологически активные вещества и антоцианы кизила 9
1.2.2 Биологически активные вещ ества и антоцианы редиса 11
1.3 Методы определения антоцианов 13
2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 18
2.1 Экстракция антоцианов 18
2.2 Твёрдофазная очистка 18
2.3 Спектрофотометрическое определение 19
2.4 Хроматографический анализ 19
2.5 Растворители при определении антоцианов 20
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 21
3.1 Определение антоцианов кизила 21
3.2 Определение антоцианов редиса 28
3.3 Исследование эффективности экстракции соляной кислотой 36
ВЫВОДЫ 44
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 45
Одним из основных направлений в пищевом производстве во всём мире на сегодняшний день является исследование натуральных красителей. К их числу относятся антоцианы, являющиеся водорастворимыми окрашенными антиоксидантами, что даёт возможность использовать их в пищевой и фармацевтической промышленности, а также в медицине.
Известно, что кроме антиоксидантной активности антоцианы обладают и противовоспалительным действием, предотвращают повреждения структуры ДНК, подавление роста злокачественных новообразований. Таким образом, антоцианы имеют широкий спектр применения.
Актуальной проблемой является пробоподготовка при определении антоцианов в плодах растений. Это связано с тем, что при экстракции антоцианов из растений извлекаются и другие водорастворимые соединения. Поэтому после экстракции обязательно должна следовать очистка, поскольку экстракты антоцианов непосредственно вводить в хроматографическую систему нельзя из-за присутствия в них сопутствующих соединений полимерного характера, которые необратимо загрязняют колонку. Также часто встречаются случаи, при которых в ВЭЖХ возникает проблема разделения смеси антоцианов в следствии соэлюирования отдельных веществ. Поэтому встаёт вопрос о разработке эффективных методик пробоподготовки при определении антоцианов.
Целью данной работы является разработка пробоподготовки при определении антоцианов кизила (Cornus mas L.) и красного редиса (red radish) для определения спектрофотометрическими методами и методами ВЭЖХ.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Разработать способы исчерпывающей экстракции исследуемых объектов.
2. Определить антоцианы исследуемых объектов
спектрофотометрическими методами.
3. Разработать способы очистки экстрактов антоцианов.
4. Определить антоцианы исследуемых объектов методами ВЭЖХ.
5. Определить эффективность экстракции антоцианов различными растворителями.
1. В мякоти кизила содержатся вещества, прочно сольватирующие антоцианы кизила. При использовании 0,1 М водного раствора HCl количество стадий для достижения исчерпывающей экстракции может достигать 6. Целесообразно добавлять ацетонитрил, при его концентрации 20-40 об.% исчерпывающая экстракция достигается в 1 стадию. В данном случае суммарное содержание антоцианов в мякоти кизила составляет до 0,095 г на 100 г сырья.
2. Добавление ацетонитрила не изменяет состав антоцианов в экстрактах кизила. Основными антоцианами кизила являются пеларгонидин- 3-галактозид, цианидин-3-галактозид, дельфинидин-3-галактозид в порядке уменьшения их доли.
3. Все антоцианы редиса являются пеларгонидин-3-софорозид-5- глюкозидами, ацилированными коричными кислотами и малоновой кислотой. Основными антоцианами красного редиса являются пеларгонидин- 3-ферулоил-малонилсофорозид-5-глюкозид и пеларгонидин-3-п-кумароил- малонилсофорозид-5-глюкозид.
4. Ацилированные антоцианы красного редиса крайне эффективно экстрагируются 0,1 М водным раствором HCl. Исчерпывающая экстракция достигается в 2 стадии. Суммарное содержание антоцианов в кожуре редиса составляет 0,968 г на 100 г сырья.
5. Сравнение растворителей на примерах черешни, васильков тёмно-бордовых и гвоздики турецкой показало, что для черешни и васильков более эффективным является 1% раствор HCl в этаноле, а для гвоздики - 0,1 М водный раствор HCl.
