Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
ℹ️Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
ВВЕДЕНИЕ 4
I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Фенольные кислоты и их классификация 7
1.2 Методы определения фенольных кислот 10
1.2.1 ТСХ 11
1.2.2 Капиллярный электрофорез 12
1.2.3 Хроматографические методы 12
1.3 Антиоксидантная активность фенольных кислот и их источников 13
1.4 Методы определения антиоксидантной активности (АОА) фенольных
соединений 16
II ЭКПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 20
2.1 Объекты исследования 20
2.2 Методика разделения изомерных хлорогеновых кислот в условиях
обращенно-фазовой ВЭЖХ 20
2.3 Методика очистки хлорогеновых кислот методом твердофазной
экстракции 22
2.4 Методика определения фенольных соединений в условиях обращенно-
фазовой ВЭЖХ 23
2.5 Методика определения АОА по реактиву Фолина-Чокальтеу 24
2.6 Методика определения АОА по гашению свободных радикалов
дифенилпикрилгидразилом (DPPH) 26
III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ 27
3.1 Разделения изомерных хлорогеновых кислот в условиях обращенно-
фазовой ВЭЖХ 27
3.2 Очистка хлорогеновых кислот методом твердофазной экстракции 31
3.3 Определение фенольных соединений в растительных объектах 36
3.3.1 Определение антоцианов в лепестках цветков гибискуса суданского
и гибискуса розы китайской 36
3.3.2 Определение антоцианов и других фенольных соединений растительного материала Иван-чая 37
3.4 Сопоставление АОА настоев растительных объектов 39
3.4.1 Определение АОА настоев иван-чая 39
3.4.2 Определение АОА настоев из растений семейства мальвовые
(Malvaceae) 41
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 43
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 44
📖 Введение
Как известно, природные фенольные соединения являются важнейшими вторичными метаболитами, которые в растительной продукции отвечают не только за антиоксидантную активность (АОА), но и за ряд других не менее важных функций. Одним из представителей фенольных соединений является кофейная кислота. Исследования показывают, что кофейная кислота обладает биологически активными свойствами, поэтому тормозит развитие канцерогенеза, а также проявляет иммуномодулирующую и противовоспалительную активность.
Фрагменты, входящие в структуры халконов, антоцианов, флавоноидов, а именно гидроксильные группы, обеспечивают фенольным соединениям антиоксидантные свойства. Известно, что вещества, содержащие орто-ОН-группы, обладают более высокой АОА по сравнению с теми веществами, у которых данный фрагмент отсутствует.
Роль фенольных кислот в суммарной АОА растительных объектов и продуктов на их основе может в значительной степени определяться такими фенольными кислотами, как кофейная кислота и ее сложные эфиры, например, хлорогеновая, цикоревая, кафтаровая и розмариновая кислоты. Все они имеют орто-ОН-группы, которые обуславливает высокую АОА.
Существует множество работ, посвященных исследованию хлорогеновой кислоты, однако в ряде случаев хлорогеновая кислота рассматривается как обобщенное название продуктов этерификации хинной кислоты замещенными коричными кислотами. При этом даже среди моноэфиров кофейной кислоты может быть 4 изомера, из которых отмечают 3 реально встречающихся: 3-кофеоилхинная, 4-кофеоилхинная и 5- кофеоилхинная (хлорогеновая) кислоты. Стоит отметить, что в некоторых работах нумерацию атомов С в хинной кислоте проводят в другом направлении, поэтому хлорогеновая кислота в них - 3CQA, что вносит определенную путаницу. Этого разночтения можно избежать в случае указания авторами графической формулы вещества.
По литературным данным хлорогеновая кислота рассматривается как регулятор ростовых процессов, как защитный фактор по отношению к некоторым микроорганизмам, а также на ряду с кофейной обладает гепатопротекторной и нейропротекторной способностью [1]. Хлорогеновые (как и кофейная) кислоты являются сильными антиоксидантами [2,3,4]. Благодаря высокой концентрации хлорогеновых кислот кофе обладает большей антиоксидантной активностью [5 - 7] нежели какао, зеленый, черный и травяные чаи, а также фруктовые соки [8]. Поскольку в радикале кофейной кислоты содержится пара орто-ОН-групп, она обладает антиоксидантным действием. Для любителей кофе этот напиток является основным источником антиоксидантов.
Еще одной особенностью публикаций по разделению хлорогеновых кислот является тот факт, что порядок элюирования 3CQA, 4CQA и 5CQA с использованием метода обращенно-фазовой хроматографии не одинаков для различных условий [9-21].
По этим причинам экстракция, очистка и концентрирование ХК являются важными технологическими операциями в производственных схемах и при их определении в исходном растительном материале, а определение АОА растительных объектов и продуктов на их основе (таких как кофе, чаи и соки) - одно из приоритетных направлений в изучении фенольных соединений.
В связи с этим целью настоящей работы является разработка и усовершенствование методов определения фенольных кислот на основе исследования хлорогеновых кислот и других фенольных соединений.
Для достижения поставленной цели на данном этапе предполагается решение следующих задач:
1) Определение условий разделения изомерных хлорогеновых кислот в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ.
2) Очистка хлорогеновых кислот методом твердофазной экстракции.
3) Оценка содержания фенольных соединений в избранных объектах методом обращенно-фазовой ВЭЖХ
4) Оценка содержания фенольных соединений в избранных объектах по методу Фолина-Чокальтеу.
5) Оценка антирадикальной активности в этих же объектах по гашению свободных радикалов DPPH.
✅ Заключение
• При исследовании удерживания изомерных хлорогеновых кислот (3CQA, 4CQA и 5CQA) на нескольких обращенных стационарных фазах Установлено, что механизм удерживания близок к механизму гидрофобного выталкивания на поверхность.
• Показано, что изменение селективности разделения хлорогеновых кислот и порядок элюирования зависит от активности остаточных силанольных групп сорбента.
• Определено содержание изомерных хлорогеновых кислот в нескольких объектах: в двух фруктовых соках (вишневый и яблочный), в трех образцах растворимого кофе и в смеси растворимого с молотым, и в напитке мате.
• Исследована возможность использования патронов ДИАПАК С18 для очистки и концентрирования высокогидрофильных хлорогеновых кислот. Показано, что для сорбции необходимо использовать экстракты, подкисленные до рН 1 и ниже. При этом наименьшим удерживанием характеризуется 3-кофеоилхинная (неохлорогеновая) кислота.
• Предложен простой способ экстракции с контролем проскока с использованием двух последовательно соединенных картриджей. В итоге разработан способ очистки и концентрирования ХК в 2.5 раза.
• Методом ВЭЖХ со масс-спектрометрическим и спектрофото-метрическим детектированием определены антоциановый состав экстрактов сушеных цветков Epilobium angustifoliumи флавоноидный состав экстрактов цветков и надземной части растения.
• Двумя методами (Фолина-Чокальтеу и по гашению свободных радикалов дифенилпикрилгидразила) определена антиоксидантная активность настоев иван-чая и лепестков цветков гибискуса - розы китайской. Обращено внимание на определяющую роль антоцианов в суммарной антиоксидантной активности.