ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1 История, происхождение, распространение, значение и роль пчелы медоносной в мире, Российской Федерации и Республике Татарстан
1.2 Болезни пчел
1. 3 Видовое разнообразие микозов пчел
1.4 Методы индикации возбудителей микозов
ЕЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ЕЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Методология метода ПЦР
3.2 Проверка специфичности праймеров и зондов для ПЦР в электронном
ресурсе базы данных NBCI
3.3 Характеристика сконструированных олигонуклеотидных праймеров и
зондов в программе Vector NTI
3.4 Результаты ПЦР-индикации видового разнообразия микозов пчел на припасечной территории
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Актуальность.В условиях повсеместной бессистемной метизации пород и популяций пчел (VanGuilder, 2008) вида Apis Melifera, - возникла проблема микозов пчел, помимо инвазионных и других инфекционных болезней, которые наносят серьезный ущерб пчеловодству, что проявляется, с экологической точки зрения, в снижении опылительной активности и продуктивности пчелиных семей, а в дальнейшем зачастую приводят и к их гибели. При таком условии успешное развитие пчеловодства не представляется возможным без глубокого всестороннего изучения патологии медоносной пчелы.
Причины возникновения микозов - грибковых заболеваний - связаны с несоблюдение за содержанием, неполноценным кормлением, а также с недостаточным количеством эффективных ветеринарно-санитарных мер борьбы.
Расширение ареала распространения микозов на пасеках страны в последние несколько лет, по мнению большинства исследователей, связано с
нарушением равновесия нормальной микрофлоры в пчелиной семье, вызванным бесконтрольным применением антибиотиков и других влажность воздуха (http://meduniver.com).
В связи с этим наибольший интерес вызывает предмет исследований - микозы пчел. Микозом называют все виды болезней, вызванные патогенными и условно патогенными паразитическими микроскопическими грибами родов Ascosphaera и Aspergillus. А объектом исследований являются биотические
(пчелы) и абиотические (соскобы с мест посещений пчел) объекты окружающей среды.
Борьба с болезнями пчел представляет систему специальных мероприятий, одним из основных этапов которой является диагностика. В силу этого существуют различные методики выявления болезней пчел, а одним из удобных и перспективных методов обнаружения микозов еще на ранних стадиях, их индикации и идентификации, служит метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Таким образом, целью исследования является выявление видовой принадлежности грибковых заболеваний пчел, с использованием молекулярно-генетических методов.
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
1. определить наиболее оптимальные условия для амплификации специфичных участков генома для каждого вида возбудителя микозов пчел.
2. выявить степень специфичности комплекса олигонуклеотидных затравок (прямой праймер, обратный праймер, зонд) для индикации каждого микоза пчёл, с помощью специальной компьютерной поисковой программы BLAST;
3. проверить возможность применения разработанных праймеров и зондов в ПЦР в программе Vector;
4. определить видовое разнообразие микозов пчел на припасечной территории, используя разработанные праймеры и зонды для индикации специфичных для микозов пчел локусов.
Грибковые патогены родов Aspergillus и Ascosphera причиняют огромный ущерб пчеловодству. Своевременная индикация и идентификация возбудителей этих микозов в ульях и объектах окружающих пасеки является одним из ключевых этапов по борьбе с болезнями пчел. Решение проблемы своевременной индикации биопатогенов микозов пчел лежит в основе использования молекулярно-биологических подходов (James, Skinner, 2005) пчел на припасечной территории в научно-инновационном центре ФГБНУ.
Благодаря полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени, удалось установить видовую принадлежность грибковых заболеваний
«Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФЦТРБ-ВНИВИ)» г. Казани.
Так как род Ascosphera представлен специфичным для пчел видом A. apis (Cornman et al., 2012), экспериментальным путем патоген был выявлен исключительно в образцах пчел. Терминология возбудителей аспергиллеза намного превосходит аскосфероз по числу тжфнов, билогической активности и распространению. Таким образом, грибы рода Aspergillus такие как A. fumigatus, A. flavus, A. niger обнаружились не только в биотических (пчелы) объектах, но и в компонентах окружающей среды (вода, листья, соскобы с коры березы, летка и вентиляционного отверстия).
В заключении, в ходе исследовательской работы, согласно указанной цели и поставленным задачам:
1. определены наиболее оптимальные условия для амплификации специфичных участков генома для каждого вида возбудителя микозов пчёл;
2. выявлена степень специфичности комплекса олигонуклеотидных затравок для индикации каждого микоза пчёл, с помощью специальной компьютерной поисковой программы BLAST;
3. проверена возможность применения разработанных праймеров и зондов в ПЦР в программе Vector;
определено видовое разнообразие микозов пчел на припасенной территории, с использованием разработанных праймеров и зондов для индикации специфичных для микозов пчёл локусов.
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
