Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
ℹ️Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
ВВЕДЕНИЕ 5
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1.1. Характеристика основных типов щелочных гидротерм 9
1.1.1. Основные типы щелочных гидротерм 9
1.1.2. Свойства щелочных термальных вод 13 1.2. Распространение и состав микробных сообществ в зависимости
от физико-химических факторов среды 16
1.2.1. Микробные сообщества щелочных гидротерм 16
1.2.2. Микробные сообщества нейтральных гидротерм 19 1.3. Активности продукционных и терминальных деструкционных
процессов в фототрофных и хемотрофных микробных сообществах гидротерм 24
1.3.1 Микробные сообщества щелочных гидротерм 24
1.3.2. Микробные сообщества нейтральных гидротерм 25
1.4. Экофизиология термофильных микроорганизмов щелочных гидротерм 30
1.4.1. Температурные и рН границы развития микроорганизмов 30
1.4.2. Микроорганизмы - первичные продуценты 31
1.4.3. Микроорганизмы - деструкторы 35
1.5. Участие микробного сообщества щелочных гидротерм в
минералообразовании 37
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ. Задачи работы 41
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 43
2. Объекты и методы исследования 43
2.1. Объекты исследования 43
2.2. Методы полевых исследований 46
2.3. Методы лабораторных исследований 47
2.3.1. Методы культивирования и изучения роста бактерий в
зависимости от физико-химических факторов 47
2.3.2. Методы электронной микроскопии 49
2.3.3. Методы гено- и хемосистематики 49
2.3.4. Методы определения скорости микробных процессов 50
2.3.5. Методы определения содержания пигментов в микробных матах РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 52
3. Исследование микробных сообществ щелочных гидротерм 52
3.1. Гаргинский источник 52
2
3.1.1. Распространение и видовой состав микробных сообществ
в связи с изменением физико-химических условий среды 52
3.1.2. Биогеохимическая активность. 57
3.2. Уринский источник 61
3.2.1. Распространение и видовой состав микробных сообществ
в связи с изменением физико-химических условий среды 61
3.2.2. Биогеохимическая активность. 66
3.3. Сеюйский источник 70
3.3.1. Распространение и видовой состав микробных сообществ
в связи с изменением физико-химических условий среды 70
3.3.2. Биогеохимическая активность 74
3.4. Аллинский источник 78
3.4.1. Распространение и видовой состав микробных сообществ
в связи с изменением физико-химических условий среды 78
3.4.2. Биогеохимическая активность. 82
3.5. Большереченский источник 85
3.5.1. Распространение и видовой состав микробных сообществ
в связи с изменением физико-химических условий среды 85
3.5.2. Биогеохимическая активность. 91
3.5.3. Влияние температуры и рН на микробное сообщество 95
3.6. Источник “Паоха” (Моно Лейк) 98
3.6.1. Распространение и видовой состав микробных сообществ
в связи с изменением физико-химических условий среды 98
3.6.2. Биогеохимическая активность. 98
3.7. Биогенное минералообразование в микробных матах
щелочных термальных источников 101 4. Исследование чистых культур, выделенных из микробных
сообществ щелочных гидротерм 103
4.1 Термофильная аноксигенная фототрофная бактерия
Chloroflexus aurantiacus 103
4.1.1 Морфология и ультраструктура. 103
4.1.2. Пигменты. 103
4.1.3. Физиология. 106
4.1.4. Генотипические свойства и филогенетическое положение. 107
3
4.2. Органотрофная аэробная термофильная бактерия 109
4.3 Термофильные сульфатредуцирующие бактерии 111
4.4. Алкалотермофильная органотрофная бактерия “Anaerobranca californiensis” 113
4.4.1. Морфология и ультраструктура 113
4.4.2. Физиологические характеристики. 113
4.4.3. Генотипические свойства и филогенетическое положение. 118
4.4.4. Диагноз вида Anaerobranca californiensis 120 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 121 ВЫВОДЫ 129 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 130
4
📖 Введение
Актуальность проблемы. Системные исследования мезофильных алкалофильных сообществ начались сравнительно недавно (Заварзин, 1993). Однако до последнего времени очень мало внимания уделялось изучению организмов, способных существовать при высоких температурах и высоких значениях рН (Wiegel, 1998).
Традиционными объектами исследования микробиологов являлись гидротермы областей активного современного вулканизма и молодого четвертичного вулканизма, с реакцией среды, близкой к нейтральной. Термальные воды с рН>8.5 и температурой выше 45°С широко распространены в природе (Басков, Суриков, 1989; Соломин, Крайнов, 1998). Физико-химические параметры щелочных термальных вод сильно отличаются от нейтральных и кислых вод, что создает особые условия для существования экстремофильных микроорганизмов. (Крайнов, Швец, 1980; Garrels, Christ, 1959; Belkin et al., 1985). Микробные сообщества этих экосистем и факторы определяющие их разнообразие изучены слабо. Сведения о видовом составе щелочных гидротерм были разрознены (Компанцева, Горленко, 1988; Юрков и др., 1991; Бонч- Осмоловская и др., 1999; Brock et al., 1971, Grant, Tindall, 1986; Duckworth et al., 1996; Marteinsson et al., 2001; Krienitz et al., 2003). Отсутствовали данные об интенсивностях продукционных и деструкционных процессов
В настоящей работе впервые выполнено сравнительное исследование видового состава и геохимической деятельности микроорганизмов щелочных гидротерм с различной минерализацией и различным химическим составом.
Целью настоящей работы являлось сравнительное исследование микробных сообществ щелочных слабоминерализованых гидротерм Байкальской рифтовой зоны (Б.р.з.) и щелочных минерализованых гидротерм озера Моно-Лейк на острове Паоха.
Основные задачи исследования состояли в следующем:
1. Изучение состава микробных сообществ щелочных термальных источников в связи с изменением физико-химических условий.
2. Изучение активности продукционных и терминальных деструкционных процессов в фототрофных и хемотрофных микробных сообществах в разных экологических зонах источников.
5
3. Исследование экофизиологических особенностей термофильных микроорганизмов участвующих в циклах углерода и серы в сообществах.
4. Изучение участия микробных сообществ щелочных гидротерм в минералообразовании.
Научная новизна и практическая значимость. Впервые исследованы микробные сообщества щелочных азотных гидротерм Б.р.з. и минерализованного щелочного источника на острове Паоха озера Моно-Лейк (Калифорния). Показано, что щелочные условия в комбинации с другими факторами среды ограничивают распространение фототрофных сообществ, в минерализованных щелочных источниках отсутствует термофильный цианобактериальный мат. В фототрофных сообществах щелочных низкоминерализованных термальных источниках доминируют цианобактерии, приспособленные к росту в щелочных условиях. Алкалотолерантные аноксигенные фототрофные бактерии Chloroflexus aurantiacus обнаружены только в низкоминерализованных гидротермах при температурах от 65 до 35°С. Показано, что микробные сообщества щелочных гидротерм обладают высокой продуктивностью, сравнимой с микробными сообществами нейтральных гидротерм.
В щелочных минерализованных гидротермах рост фототрофных сообществ начинается при температуре ниже 47°С. Термофильных оксигенных и аноксигенных фототрофов в них не обнаружено. Из высокотемпературной зоны источника (от 90 до 50°С) был выделен новый вид анаэробной алкалотермофильной ферментирующей бактерии Anaerobranca californiensis и показана ее способность к восстановлению серы, тиосульфата, полисульфида, Fe(III), Se(VI). Показано участие термофильных фототрофных сообществ в травертинообразовании. В лабораторных экспериментах установлено, что термофильная аноксигенная фототрофная бактерия Chloroflexus aurantiacus образует чехлы накапливающие окисное железо в аэробных темновых условиях. Использование закисного железа в качестве донора электронов при фотоавтотрофном росте этого микроорганизма не наблюдалось. Полученные результаты принципиально важны для развития представлений о функционировании циклов кальция, серы, железа, селена в щелочных гидротермах.
Выделенные микроорганизмы могут быть использованы при очистке горячих вод от неорганических соединений. Результаты диссертации имеют значение для бальнеологической характеристики гидротерм Байкальской рифтовой зоны.
6
Апробация работы. Результаты исследований доложены автором на: Международной конференции “Thermophiles'98” 6-11 сентября 1998 г., Брест, Франция; Научной конференции “Проблемы экологии и физиологии микроорганизмов: к 110-летию со дня рождения профессора Е.Е. Успенского”, 21 декабря 1999 г., Москва; Школе- конференции “Горизонты физико-химической биологии”, 28 мая-2 июня 2000 г., Пущино; Международной конференции “Central Asian ecosystems - 2000”, 5-7 сентября 2000 г., Улан-Батор, Монголия; Международной конференции “Экология Сибири, Дальнего Востока и Арктики”, 5-8 сентября 2001, Томск; Региональной конференции “Природные ресурсы Забайкалья и проблемы природопользования”, 10-15 сентября 2001, Чита; ASM-meeting, май 2002, США; I международном симпозиуме “Биокосные взаимодействия: Жизнь и камень”, 25-27 июня 2002 г., Санкт-Петербург; International Geobiology Course, 12 июня - 26 июля 2003 г., Каталина, Калифорния; Всероссийской конференции “Биоразнообразие и функционирование микробных сообществ водных и наземных систем Центральной Азии”, 21-29 июля 2003 г., Улан-Удэ.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ и 1 статья находится в печати.
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 151 страницах, включая 21 таблицы и 30 рисунок. Диссертация состоит из разделов “Введение”, “Обзор литературы”, “Экспериментальная часть” (включающая главы “Объекты и методы исследований”, “Результаты и обсуждение”), “Заключение”, “Выводы” и “Список литературы” (269 наименований).
Благодарности. Автор выражает глубокую признательность научному руководителю д.б.н., проф. В.М. Горленко и сотрудникам Лаборатории экологии и геохимической деятельности микроорганизмов ИНМИ РАН, д.б.н., проф. Б.Б. Намсараеву и сотрудникам Лаборатории микробиологии ИОЭБ СО РАН, проф. К. Nealson и сотрудникам Geobiology Laboratory University of Southern California, сотрудникам Института микробиологии РАН, родным и близким.
Исследование генотипических свойств проводилось к.б.н. А.М. Лысенко (ИНМИ РАН). Анализ 16S рРНК выполнила к.б.н. Т.П.Турова (ИНМИ РАН). Определение интенсивностей микробных процессов проводилось совместно с В.И. Качалкиным (ИНМИ РАН) и к.б.н. С П. Бурюхаевым (ИОЭБ СО РАН). Определение видовой
7
принадлежности цианобактерий проводилось совместно с к.б.н. А.В. Брянской (ИОЭБ СО РАН). Исследования тонкого строения клеток проводили совместно с Л.Л. Митюшиной (ИНМИ РАН). Пробы керна Гаргинского травертина были предоставлены д.г.-м.н. А.М. Плюсниным (ИГ СО РАН). Автор приносит искреннюю благодарность всем упомянутым участникам работы.
✅ Заключение
Главным физико-химическим фактором среды, оказывающим влияние на состав и распространение микробных сообществ в гидротермах, является температура (Горленко и др., 1985, Горленко, Бонч-Осмоловская, 1989; Brock, 1967). С уменьшением температуры по изливу исследованных нами источников разнообразие микроорганизмов расширяется.
В щелочных гидротермах микробные сообщества кроме высокой температуры подвергаются комбинированному воздействию и других экстремальных факторов: высокого рН и, в ряде случаев, высокого содержания сульфида и минерализации. В исследованных гидротермах фототрофные сообщества появляются при более низкой температуре чем в слабощелочных и нейтральных гидротермах. Для сравнения, в
120
Уринском источнике с рН 8.8 цианобактериальный мат начинается с температуры 64°С, тогда как в слабощелочном Октопус спринг с 73°С (Brock, 1967). При этом, наблюдается обратная зависимость между верхним температурным пределом распространения микробного мата и содержанием сульфида в источнике (рис. 27). Чем выше содержание сульфида, тем ниже максимальная температура распространения микробного мата по изливу источника. Также было обнаружено, что термофильная цианобактерия Mastigocladus laminosus, широко распространенная в нейтральных гидротермах, практически не встречается в микробных матах щелочных источников. Вместо нее в широком диапазоне условий среды доминируют цианобактерии Phormidium spp. и Anabaena spp., являющиеся более толерантными к высоким значениям рН.
Важной особенностью щелочных гидротерм является доминирование цианобактерий в составе микробных матов при содержании сульфида в воде более 1 мг/л. Ранее считалось, что при такой концентрации сульфида в составе микробного мата обязательно доминируют аноксигенные фототрофные бактерии (АФБ) (Castenholz, 1976, 1977; Ward et al., 1989). Наши исследования показали, что это правило не может быть применено к щелочным гидротермам. Так, на диаграмме рН-Т, построенной с помощью литературных и собственных данных, указаны области распространения различных типов сообществ при содержании сульфида более 1 мг/л (рис. 28). АФБ доминируют в слабокислых и нейтральных условиях, но в щелочных условиях, как было показано нами, доминируют цианобактерии.
Это явление может быть объяснено снижением токсичности сероводорода при повышении рН (Заварзин, 1972; Howsley, Pearson, 1979). На диаграмме рН-S2- показано, как происходит последовательная смена типов сообществ с повышением рН в сульфидсодержащих гидротермах при температуре около 60°С (рис. 29). При рН менее
7 большинство молекул сероводорода находится в недиссоциированном состоянии и способно легко проникать через клеточную стенку. В составе сообщества доминирует Chloroflexus aurantiacus. При рН более 7 начинает доминировать менее токсичный гидросульфид-ион, и в составе микробного мата появляются цианобактерии. Они располагаются под слоем Chloroflexus aurantiacus, который защищает цианобактерии от воздействия высоких концентраций растворенного в воде сульфида. При рН более 8.5 весь сероводород переходит в гидросульфид-ион и, как было показано нами, в составе мата доминируют цианобактерии. Сравнение оптимумов рН цианобактерий, АФБ и хемотрофных бактерий выделенных из Большереченского источника указывает на то,
121
что доминирующие в микробном мате цианобактерии более приспособлены к высоким рН, чем АФБ. Цианобактерии, подщелачивающие среду в ходе оксигенного фотосинтеза являются алкалофилами, тогда как АФБ и хемотрофные бактерии являются нейтрофилами и алкалотолерантами (рис. 13).
Нами был обнаружен аноксигенный мат с доминированием Chloroflexus aurantiacus в Аллинском источнике, но необходимо учитывать, что его развитие происходило в области смешения сульфидсодержащих щелочных термальных вод с рН 9.0-9.9 и речных вод с рН 8.3, что опять же подтверждает предположение о контроле распространения микробных сообществ различными формами сульфида. Повышение устойчивости гидросульфид-иона при щелочной реакции среды также может быть причиной отсутствия массового развития термофильных серобактерий при температуре около 70°С.
Минерализация также является фактором среды, ограничивающим распространение микробных матов и оказывающим влияние на видовой состав сообщества. В минерализованном источнике Паоха комбинированное воздействие факторов среды исключает развитие термофильного цианобактериального мата и термофильной АФБ Chloroflexus aurantiacus. Цианобактериальный мат обнаружен при температурах ниже 47°С и доминируют в нем цианобактерии родов Phormidium, Oscillatoria и мезофильная галоалкалофильная пурпурная бактерия Ectothiorhodospira shaposhnikovii.
ВЫВОДЫ
1. Высокие значения рН, температуры и содержания сульфида ограничивают распространение фототрофных микробных матов, которые в щелочных гидротермах развиваются при более низкой температуре, чем в нейтральных.
2. Особенностью щелочных сульфидсодержащих гидротерм, в отличие от нейтральных гидротерм, является отсутствие образования аноксигенных микробных матов. В составе микробных матов щелочных гидротерм доминируют алкалофильные цианобактерии Phormidium spp.
3. Микробные сообщества пресных и минерализованных щелочных гидротерм отличаются по видовому составу. Термофильная аноксигенная фототрофная бактерия Chloroflexus aurantiacus достигает значительной численности в микробных матах пресных щелочных гидротерм, но отсутствует в минерализованных щелочных
128
гидротермах. В составе сообщества минерализованных гидротерм значительной численности достигает галоалкалофильная аноксигенная фототрофная бактерия Ectothiorhodospira shaposhnikovii.
4. Продуктивность микробных сообществ щелочных гидротерм сравнима с продуктивностью нейтральных гидротерм. Наиболее продуктивными являются сообщества, развивающиеся в температурном диапазоне 35-50°С. Доминирующим процессом терминальной деструкции является сульфатредукция, роль метаногенеза в деструкции органического вещества незначительна.
5. Показана экофизиологическая приспособленность термофильной аноксигенной фототрофной бактерии Chloroflexus aurantiacus к условиям местообитаний в различных источниках и их экологических зонах.
6. Показано, что чистые культуры аноксигенной фототрофной бактерии Chloroflexus aurantiacus могут откладывать окисное железо на поверхности клетки в ходе аэробного темнового роста. Восстановленное железо не является донором электронов для фотоавтотрофного роста у исследованных штаммов.
7. Выделен новый вид алкалотермофильной бактерии с бродильным метаболизмом Anaerobranca californiensis, способной к неспецифическому восстановлению широкого ряда неорганических соединений: тиосульфата, элементной серы, полисульфида, железа, селена.
8. Показано, что цианобактериальный мат играет вважную роль в образовании карбонатно-кальциевого травертина в Гаргинском источнике. Исследование керна травертина показало, что с глубиной в травертине количество микрофоссилий уменьшается.