СОДЕРЖАНИЕ 3
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ 6
1.2 БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ 11
1.3 ХАРАКТЕРИСТИКА БАКТЕРИИ STAPHYLOCOCCUS 13
1.4 ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ 18
1.5 ХАРАКТЕРИСТИКА МОНОЦИТОВ 22
1.6 ФАГОЦИТОЗ 26
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
2.1 ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
2.2 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
2.3 БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ДЕГИДРОГЕНАЗ 38
2.4 СТАТИСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 41
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 42
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 50
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
Бактерии являются причиной 90% госпитальных инфекций. В последнее время этиология госпитальных инфекций подвергались значительным изменениям; это является следствием использования новых антибактериальных препаратов обширного спектра действия, а также - появления мультирезистентных штаммов.
Современные данные системы контроля за госпитальными инфекциями свидетельствуют о том, что растет резистентность всех известных возбудителей, это необходимо учитывать при планировании антибиотикотерапии.
В настоящее время основными проблемными микроорганизмами являются в - лактамазы расширенного спектра (БЛРС), к котором относиться и золотистый стафилококк (MRSA) [1].
По результатам исследования микробиологического профиля отделения хирургической реанимации и интенсивной терапии за 2013 год выявлено, что наиболее часто выделяемыми микроорганизмами являются золотистый стафилококк - 18 %. При этом среди всех золотистых стафилококков число метициллинрезистентных равно 81,5 %
Так как нейтрофильные гранулоциты и моноциты являются фагоцитирующими клетками, которые направлены на антибактериальную защиту, актуальным представляется определять функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов при воздействии бактерий. “Респираторный взрыв” - механизм противобактериальной защиты, стимулирующий фагоцитоз нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов крови и основан на окислении и восстановлении НАДФ, в результате этих процессов вырабатываются активные формы кислорода (АФК).Хемилюминесцентный анализ - безопасный и высокочувствительный метод диагностики воспалительных процессов в организме. Метод хемилюминесцентного анализа применяют для оценки и регистрации “респираторного взрыва”.
Таким образом целью исследования является изучение кислородозависимого и кислородонезависимого фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов при воздействии метициллинрезистентных штаммов Staphylococcus aureus.
Задачи:
1. Исследовать особенности активности НАД- и НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ штаммов Staphylococcus aureus, в зависимости от их устойчивости к метициллину.
2. Провести сравнительный анализ кислородозависимого фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов крови при воздействии мецитиллинорезистентных штаммов Staphylococcus aureus относительно чувствительных штаммов с помощью люминол- и люцигенин- зависимой хемилюминесценции.
3. Провести сравнительный анализ кислородонезависимого фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов крови при воздействии мецитиллинорезистентных штаммов Staphylococcus aureus относительно чувствительных штаммов с помощью метода проточной цитометрии
В результате проведенного исследование было установлено:
1. Исследование метаболизма штаммов MRSA относительно MSSA выявило различия по двум ферментам:
a) Увеличение глицерол-3-фосфатдегидрогеназы,
b) Снижение НАД-изоцитратдегидрогеназы.
Таким образом механизмы антибиотикорезистентности у бактерий затрагивают метаболические процессы.
2. При индукции нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов штаммами MRSA относительно MSSA наблюдается выраженная интенсивность люминол- зависимой хемилюминесценции, при этом активность НАДФН- оксидазы снижена.
3. Оценка фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов при воздействии штаммов MRSA относительно MSSA показала увеличение фагоцитарного индекса при снижении фагоцитарного числа: увеличение фагоцитарного индекса не классических и промежуточных субпопуляций моноцитов в 1,5 раза, классических субпопуляций - в 3 раза; снижение фагоцитарного числа промежуточных субпопуляций моноцитов в 1,4 раза, неклассических - в 1,5 раза, классических субпопуляций моноцитов в 4 раза.
Таким образом, можно отметить, что классический тип моноцитов быстрее активируется в ответ на MRSA. При этом не классические и промежуточные моноциты при низкой скорости фагоцитируют эффективнее.
