Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
ℹ️Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
ВВЕДЕНИЕ 3
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Азотфиксирующие бактерии 6
1.2 Генетический аппарат бактерий 7
1.3 Ген 16S рРНК 9
1.4 Полимеразная цепная реакция 10
1.5 Рестрикция ДНК 13
1.6 Электрофорез ДНК 17
1.7 Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов 22
1.8 Анализ in silico 24
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 25
2.1 Объекты исследования 25
2.2 Методика выделения ДНК 25
2.3 Проведение полимеразной цепной реакции 26
2.4 Проведение реакции рестрикции 27
2.5 Проведение электрофореза 28
2.6 Методика очистки ДНК ампликонов 30
3. РЕЗУЛЬТАТЫ 31
3.1 Выделение ДНК из образцов бактерий 31
3.2 Получение ампликонов гена 16S рРНК 33
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 42
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 43
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 44
ПРИЛОЖЕНИЕ А
📖 Введение
Цель работы: Идентифицировать бактерии рода Rhizobiumсреди образцов почвенных бактерий, используя метод анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов гена 16S-pPHK.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
1. Выделить из биомассы микроорганизмов ДНК, определить ее концентрацию и качество.
2. Получить ампликоны 500L-1350R гена 16S pPHK и провести реакции рестрикции с полученными ампликонами, чтобы затем с помощью электрофореграммы определить вид исследуемой бактерии.
3. Провести электрофорез полученных продуктов гидролиза ампликонов рестриктазами и задокументировать полученные электрофореграммы.
4. Провести рестрикцию ампликонов 500L-1350R гена 16S-pPHK бактерий рода Rhizobium in silicoс использованием базы данных Genbank.
5. Сравнить практические и теоретические картины электрофоретического разделения рестриктов данных ампликонов и сделать вывод по полученным совпадениям о родовой принадлежности исследуемого образца.
Работа выполнена на кафедре Медицинской биологии в Институте Фундаментальной Биологии и Биотехнологии.
✅ Заключение
В ходе работы была выделена и очищена ДНК высокого качества из образцов почвенных бактерий. Были получены ампликоны гена 16s рРНК размером около 900 п.о. С полученными ампликонами были проведены реакции рестрикции. Данные, полученные в ходе экспериментов, были сверены с результатами анализа in silicoнуклеотидных последовательностей ДНК из базы данных GenBank. По результатам сравнения построенных электрофореграмм образцы 10 и 11 оказались представителями рода Rhizobium.
Метод анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов гена 16s рРНК может служить достаточно простым способом идентификации микроорганизмов.
