Введение 5
Задачи исследования: 5
1. Литературный обзор 6
1.1. Интерфероны и их эффекты 6
1.2. Влияние интерферонов на течение заболеваний центральной нервной
системы 6
1.2.1. Интерфероны и болезнь Альцгеймера 6
1.2.2. Эффекты Y-ИФ при ишемии 7
1.2.3. Эффекты в-ИФ и их применение в лечении рассеянного склероза... 7
1.2.4. Влияние а-ИФ на развитие депрессии 7
1.3. Иммунитет и нервная система 8
1.3.1. Роль воспаления в развитии психических расстройств 8
1.3.2. Интерферон-продуцирующие клетки ЦНС 9
1.3.3. Клетки ЦНС, воспринимающие ИФ 9
1.4. Области мозга, подверженные изменениям при депрессии 10
1.4.1. Гиппокамп 10
1.4.2. Энторинальная кора 10
1.4.3. Миндалевидное тело 11
2. Материалы и методы 12
2.1. Применяемые растворы 12
2.2. Объект исследования и дизайн эксперимента 12
2. 3. Проводимые тесты 12
2.3.1. NSS-тест 12
2.3.2. Открытое поле 13
2.3.3. Гипонеофагия 13
2.3.4. Приподнятый крестообразный лабиринт 14
2.3.5. Оценка тестов. Программа для видеотрекинга ANY-maze 14
2.4. Работа с биологическим материалом 14
2.4.1. Подготовка материала, приготовление срезов 14
2.4.2. Иммуногистохимия 16
2.4.3. Флуоресцентная микроскопия на системе «ZOE fluorescent Cell
imager» 17
2.4.4. Обработка и анализ изображений с помощью ImageJ 18
2.4.5. Статистический анализ 18
3. Результаты и их обсуждение 19
3.1. Результаты тестов 19
3.1.1 NSS-тест 19
3.1.2. Гипонеофагия 20
3.1.3. Тест «Открытое поле» 20
3.1.4. Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт» 22
3.2. Результаты иммуногистохимии 23
3.2.1. Процент клеток, экспрессирующих рецепторы к а-ИФ и площадь
экспрессии рецепторов 23
3.2.2. Процент клеток, экспрессирующих рецепторы к Y-ИФ и площадь
экспрессии рецепторов к Y-ИФ 25
Заключение 28
Список сокращений 29
Литература 30
Приложение
В настоящее время интерфероны (ИФ) активно используются для лечения различных заболеваний, однако они имеют побочные эффекты и оказывают влияние на функциональность органов или систем органов. В частности со стороны центральной нервной системы (ЦНС) наблюдается развитие депрессивных состояний у пациентов, проходящих ИФ-терапию. Но ИФ могут иметь не только отрицательные эффекты, но и положительные [1]. В этом ключе было интересно исследовать влияние наиболее популярных препаратов ИФ с широким спектром действия на интегративные функции головного мозга. Работа над изучением мозга включает в себя множество этапов, в том числе тестирование, забор материала от животных и его дальнейшее исследование различными методами.
Цель данного исследования - оценка эффектов а-и у-ИФ для выявления их нейропротекторных или нейротоксических эффектов и влияние на экспрессию рецепторов к интерферонам на крысах с моделью депрессии и без неё.
Задачи исследования:
1. Оценить выраженность неврологического дефицита у крыс в физиологических условиях и при депрессии без инъекций интерферонов и с их введением.
2. Выяснить изменения принятия новой пищи крысами с моделью депрессии и без нее под действием интерферонов и без них.
3. Оценить стрессогенность крыс в физиологических условиях и с моделью депрессии без введения интерферонов и с их введением.
4. Выяснить, какие эффекты оказывали интерфероны на поведение животных при развитии депрессии и в контроле.
5. Изучить особенности экспрессии рецепторов к интерферонам в различных областях головного мозга крыс с депрессией при введении интерферонов и без их использования.
Таким образом, влияние ИФ на организм животного в большей степени интересно с точки зрения создания комбинированных моделей депрессии, в связи с усилением стрессогенности даже при их однократном применении.
Были сделаны следующие выводы:
1. Во всех группах животных повреждения были умеренной и средней степени выраженности, что исключает наличие выраженной неврологической симптоматики.
2. В отношении принятия новой пищи крысами с моделью депрессии и без нее с действием интерферонов и без них не было выявлено выраженных различий.
3. Стрессогенность крыс в тестах «Открытое поле» и «ПКЛ» в виде тревожности/гиперактивности и/или заторможенности была выражена почти во всех группах при депрессии в сравнении с контрольными группами (резко уменьшено или увеличено время замирания, увеличено или снижено время пребывания в «стрессогенных» открытых и «нестрессогенных» закрытых рукавах, снижено или увеличено число заходов в центр).
4. При действии ИФ усилена стрессогенность крыс после однократного введения как в контроле, так и при депрессии, более выраженное при введении а-ИФ, Y-ИФ в некоторых случаях при депрессии оказывает нейропротективный эффект (снижение неврологического дефицита), однако в большинстве случаев также усиливает стрессогенность крыс, что требует дальнейшего изучения.
5. В отношении числа клеток, экспрессирующих рецепторы к интерферонам и площади их экспрессии, получены схожие изменения: значимое снижение экспрессии рецепторов к а-ИФ во всех регионах головного мозга при действии а-ИФ и значительное Y-ИФ заметно увеличение экспрессии рецепторов к а-ИФ при действии Y-ИФ, что может быть связано с дизрегуляцией сигнальных путей, связанных с интерферонами, при их экзогенном введении и о неспецифическом характере действия или плейотропных эффектах при коротком приложении интерферонов.
