ВВЕДЕНИЕ 4-5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Inonotus obliquusи его биологически активные метаболиты 6-9
1.2. Твердофазное культивирование базидиомицетов на сыпучих субстратах 9-13
1.3. Вегетативный мицелий I. obliquusкак продуцент биологически активных веществ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 15
2.1. Объект исследования 15
2.2. Среды и субстраты, используемые в работе 16-17
2.3. Культивирование грибов и бактерий 17-19
2.4. Приготовление гомогенатов, водных и спиртовых экстрактов 19-20
2.5. Проверка антибактериальной активности 20-21
2.6. Проверка эффективности стимуляции трутовиком скошенным на
прорастание семян сосны 21-23
2.7. Статистическая обработка данных 23
ВЫВОДЫ 40
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 41-46
Inonotus obliquus (Fr.) Pilat - трутовик скошенный - дереворазрушающий гриб, развивающийся на ослабленных березах. Он широко известен из-за своей способности образовывать на стволах растения-хозяина стерильные склероции - желвакообразные наросты, называемые «чагой» и содержащие вещества с противоопухолевой активностью. Медицинская значимость обуславливает значительный интерес к этому грибу исследователей и практиков [3].
Одним из проявлений этого интереса являются разработки технологий по искусственному выращиванию этого гриба в контролируемых условиях. Биотехнологическое производство лекарственных веществ трутовика скошенного обусловлено многими причинами: запасы чаги в природе ограничены, и усиленный сбор может привести к полному истощению ресурса, собранная в природе чага значительно варьирует по химическому составу в зависимости от условий произрастания, на качестве и безопасности собираемых склероциев может сказаться химическое и радиологическое загрязнение окружающей среды [1,3]. За рубежом уже предложены схемы твердофазного культивирования этого гриба на блоках измельченного растительного сырья (в том числе, опилках). Цель таких разработок - получение плодовых тел и склероциев [53].
Несмотря на то, что работы с культурами данного гриба ведутся с прошлого века, сведения о его биологической активности до сих пор ограничены характеристикой онкопротекторных и антиоксидантных веществ. Хотя, основываясь на принадлежности I. obliquusк экологической группе грибов-ксилотрофов, можно ожидать, что спектр продуцируемых им биологически активных веществ намного шире и может включать витамины, антибиотики, пигменты, стимуляторы роста растений и пр., которые постепенно привлекают интерес исследователей. В последние годы появились работы по меланиногенезу у I. obliquus,бактериостатической и противовирусной активности [30,37,38,44].
Целью нашей работы было исследование роста мицелия I. obliquusна сыпучем опилочном субстрате и проверка влияния водных экстрактов из продуктов культивирования на рост условно-патогенных бактерий и прорастание семян сосны.
В задачи исследования входило:
1) Изучить рост мицелия трутовика скошенного на субстрате из березовых опилок.
2) Исследовать воздействие водного экстракта мицелиально-субстратной массы (МСМ) трутовика скошенного на рост условно-патогенных бактерий.
3) Оценить влияние водного экстракта из продукта твердофазного культивирования трутовика скошенного на прорастание семян сосны в лабораторных условиях.
Работа выполнялась в лаборатории микробиологии и экологической биотехнологии Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН, Федеральный исследовательский центр «Красноярский научный центр СО РАН».
1) Выполненные исследования показали, что, по сравнению с водной пропиткой, увлажнение березовых опилок разбавленным суслом с экстрактом чистотела ускоряло колонизацию субстрата в 1,7-1,9 раз и обеспечивало развитие обильного мицелия трутовика скошенного. Показана возможность использования зернового инокулюма для твердофазного культивирования трутовика скошенного на опилочных субстратах. При этом только зерновой инокулюм обеспечивал колонизацию «бедного» субстрата с низким содержанием стартовых питательных веществ.
2) Выполненные исследования не выявили антибактериальную активность водных экстрактов из продуктов твердофазного культивирования трутовика скошенного в отношении условно¬патогенных бактерий Micrococcus luteusи Klebsiella pneumoniae.Очень слабое ингибирование роста бактерий проявил только концентрированный (упаренный до сиропообразного состояния) водный экстракт из продукта культивирования японского штамма Io на опилочном субстрате.
3) Установлено, что, по сравнению с замачиванием в воде, обработка водным экстрактом из продукта твердофазного культивирования сибирского штамма Ch 3 I. obliquusстимулировала прорастание семян сосны и развитие сенцев. Отмечено увеличение показателей: энергии прорастания - на 22%, средней длины сеянцев - на 8%, средний вес сеянца - на 15%.
