Тип работы:
 Предмет:
 Язык работы:


МОДЕЛИРОВАНИЕ САЙТОВ РЕСТРИКЦИИ НА ОСНОВЕ КОМБИНАТОРНЫХ СВОЙСТВ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ

Работа №24862

Тип работы

Бакалаврская работа

Предмет

биология

Объем работы79
Год сдачи2016
Стоимость5600 руб.
ПУБЛИКУЕТСЯ ВПЕРВЫЕ
Просмотрено
250
Не подходит работа?

Узнай цену на написание


ВВЕДЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1 Характеристика и классификация сайтов рестрикции и рестриктаз 7
1.1 Рестриктаза 8
1.1.1 Рестриктаза второго типа 10
1.1.2 Изошизомеры 11
1.1.3 Неошизомеры 11
1.1.4 Изокаудомеры 11
1.1.5 Прототип 11
1.1.6 Звёздная активность 12
1.2 Сайт рестрикции 13
1.2.1 Палиндромные и непалиндромные последовательности 14
1.3 Метилирование 15
1.4 Клонирование и к чему оно ведет 17
1.5 Эволюция рестриктаз второго типа 20
2 Материалы и методы 21
2.1 База данных REBASE NEB 21
2.2 Метод оценивания «силы» дуплетов 21
2.3 RSSP сравнение двух последовательностей 26
2.4 Филогенетическое исследование рестриктаз и сайтов рестрикции 28
2.5 Расстояние Хэмминга, Левенштейна и Дамерау - Левенштейна 29
2.6 Определение частот замен нуклеотидов на основе геномов 10
штаммов Escherichia coli 30
3 Результаты 31
3.1 Палиндромные шестибуквенные последовательности 31
3.2 Непалиндромные шестибуквенные последовательности 37
3.3 Филогенетическое дерево шестибуквенных рестриктаз на основе
нуклеотидного состава и вычисление редакционного расстояния 40
3.4 Определение частот замен нуклеотидов на основе геномов 10
штаммов Escherichia coliи применение для вычисления редакционного расстояния филогенетически родственных рестриктаз 49
3.5 Филогенетическое дерево шестибуквенных рестриктаз на основе таксономии 57
4. Обсуждения 63
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 65
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 66
ПРИЛОЖЕНИЕ A 74
ПРИЛОЖЕНИЕ B 78


На сегодняшний день актуальность сайтов рестрикции заметно упала, комплекс рестриктаз и сайтов рестрикции воспринимают как средство для молекулярных изысканий, но, по непонятным причинам, значимость самих сайтов не раскрыта до сих пор. Практически все манипуляции в генной инженерии и молекулярной биологии, в генетическом анализе и гомологичных областях невозможны без использования сайтов рестрикции и рестриктаз для разрезания последовательностей и внедрения других фрагментов генетической манипуляции.
Начало эпохи генетических манипуляций можно назвать во времена открытия сайтов рестрикции и рестриктаз, лекция о которых была прочитана 8 декабря 1978 года учеными Гамильтоном Смитом (Hamiltom Smith) и Дениэлем Натансом (Daniel Nathans) на вручении Нобелевской премии. В то время комплекс сайтов рестрикции и рестриктаз считали исключительно бактериальной функцией защиты от чужеродной ДНК путем измельчения этой самой плазмиды - кольцевого участка ДНК бактерий, которые они внедряют в чужеродные клетки для распространения своего влияния, - и ее полной инактивации. Дальнейшее изучение позволило применить данные системы в перечисленных выше отраслях и значительно продвинуло научный прогресс.
Рестриктазы быстро завоевали внимание в связи с возможностью лечения вируса иммунодефицита и некоторых других заболеваний, распространяющихся вирусами или бактериями. Исследования сайтов рестрикции позволяет проводить модификации организмов в отраслях, как генная инженерия, на счет особенностей функционирования комплексов рестриктаза - сайт рестрикции. Работы последних лет указывают на возможности регуляции этих процессов in vivo, за счет внедрения известных ныне генов рестриктаз и близких им белков для контроля над процессами. Однако, интерес, проявленный непосредственно к сайтам рестрикции, невелик - по сравнению с рестриктазами. Изучение закономерностей и свойств сайтов рестрикции может дать толчок в понимании механизмов узнавания и работы комплексов, возможности предсказания последовательностей.
Актуальность работы обусловлена как малой изученностью комбинаторных свойств сайтов рестрикции на основе их нуклеотидной последовательности, так и важностью задачи выявления связи структуры и функции на примере этих объектов, что позволит определять новые сайты рестрикции исключительно исходя из последовательностей уже известных. Дальнейшее моделирование сайтов рестрикции на основе их комбинаторных свойств может значительно упростить такие повседневно важные действия, как, например, секвенирование ДНК, ведь перед непосредственно секвенированием необходимо последовательность разрезать в определенных местах - сайтах.
Мы хотим определить почему некоторые палиндромные последовательности являются сайтами рестрикции, а иные палиндромные последовательности, хоть их и намного меньше, не являются таковыми. Проводимое сравнение непалиндромных и близких к ним палиндромных последовательностей с минимальным количеством изменений в нуклеотидном составе может привнести ясность к объяснению наличия непалиндромных сайтов рестрикции. Так же на данный момент не объяснима тенденция популярности CG-островов в сайтах рестрикции (палиндромы с аденозином и тимином встречаются много реже в списках сайтов рестрикции, чем последовательности с повышенным содержанием CG- отсровов). Это может быть связано с важностью разрезания кодирующих частей плазмид, в которых больше CG-островов, но применимо ли данное заключение к плазмидам бактериальным неизвестно.
Объектом выпускной бакалаврской работы являются известные на сегодняшний момент сайты рестрикции и соответствующие им рестриктазы.
Целью выпускной бакалаврской работы является изучение комбинаторных свойств олигонуклеотидов, входящих в состав палиндромных и непалиндромных сайтов рестрикции, не включающих в себя вырожденные основания.
Исходя их поставленной цели были определены следующие задачи:
1. Составление частотных словарей палиндромных и непалиндромных сайтов рестрикции;
2. Сравнительное изучение свойств палиндромных и непалиндромных последовательностей сайтов рестрикции без учета вырожденных оснований;
3. Выявление оптимальных цен модификаций для вычисления редакционного расстояния;
4. Реализация классификации сайтов рестрикции в зависимости от набора коротких нуклеотидных последовательностей и их комбинаторных свойств;
Работа выполнена на базе кафедры биофизики Института Фундаментальной Биологии и Биотехнологии Сибирского Федерального Университета

Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Помощь в написании работ!
ДИПЛОМНЫЕ МАГИСТЕРСКИЕ ДИССЕРТАЦИИ
КУРСОВЫЕ СТАТЬИ ВКР

В ходе работы был составлен частотный словарь палиндромных сайтов рестрикции, включающие в себя 110 последовательностей, 68 из которых вошла в финальный вариант словаря. Остальные последовательности, являясь изошизомерами прототипа, имеющие незначительные отличия от последних. В это словарь вошло 34 прототипа, 10 более изученных изошизомеров, заменивших малоизученные прототипы, и 14 неошизомеров. Был построен частотный словарь непалиндромных последовательностей, включающий в себя 22 последовательности, из которых 16 являются прототипами, 4 - изошизомерами и 2 - неошизомерами.
Сайты рестрикции были рассмотрены с точки зрения эволюции посредством построения филогенетического дерева, основанного на генах, кодирующих рестриктазы, и исходя из таксономии. Таксономические изыскания не привнесли ясности в работу.
Предложены оптимальные цены модификаций для попарного сравнения последовательностей бактериальной природы, исходя из данных вероятностей нуклеотидных замен в консервативных фрагментах десяти геномов кишечной палочки. Данный метод успешно применен к парам сайтов, сгруппировавшихся в филогенетическом исследовании.



1. Roberts RJ, Belfort M, Bestor T, Bhagwat AS, Bickle TA, Bitinaite J, Blumenthal RM, Degtyarev SKh, Dryden DTF, Dybvig K, Firman K, Gromova ES, Gumport RI, Halford SE, Hattman S, Heitman J, Hornby DP, Janulaitis A, jeltsch A, Josephsen J, Kiss A, Klaenhammer TR, Kobayashi I, Kong H, Kruger DH, Lacks S, Marinus MG, Miyahara M, Morgan RD, Murray NE, Nagaraja V, Piekarowicz A, Pingoud A, Raleigh E, Rao DN, Reich N, Repin VE, Selker EU, Shaw P-C, Stein DC, Stoddard BL, Szybalski W, Trautner TA, Van Etten JL, Vitor JMB, Wilson GG, Xu S. A nomenclature for restriction enzymes, DNA methyltransferases, homing endonucleases and their genes // Nucleic Acids Research. - 2003. - №31(7). - Pp.1805-1812; DOI: 10.1093/nar/gkg274;
2. Burckhardt J, Weisemann J, Hamilton DL and Yuan RJ. Complexes formed between the restriction endonuclease EcoK and heteroduplex DNA // J. Mol. Biol. - 1981. - №153. - Pp.425-440;
3. Smith HO. Nucleotide sequence specificity of restriction endonucleases // Science. - №205. -1979. - Pp.455-462;
4. Hadi SM, Bachi B, Iida S, Bickle TA. DNA recognition and cleavage by the EcoP15 restriction endonuclease // J. Mol. Biol. - 1983. - №165. - Pp.19-34;
5. Pingoud A, Wilson GG, Wende W. Type II restriction endonucleases - a historical perspective and more // Nucleic Acids Research. - 2014. - №42(12). - Pp.7489-7527;
6. Berezhnoy AY, Duplij SA. Dependence of nucleotide physical properties on their placement in codons and determinative degree // J Zhejiang Univ SCI - 2005. - №6B(10) - Pp.948-960;
7. Taylor JD, and Halford SE. Discrimination between DNA sequences by the EcoRV restriction endonuclease // Biochemistry. - 1989. - 28. - Pp.6198-6207;
8. Kessler Ch, Neumaier PS, Wolf W. Recognition sequences of restriction endonucleases and methylases - a review // Gene. 1985. -33. - Pp.1-102;
9. Bickle TA, Kruger DH. Biology of DNA Restriction // Microbiological Reviews. - 1993. - 57(2). - Pp.434-450;
10. Duncan BK, Miller JH. Mutagenic deamination of cytosine residues in DNA // Nature.- 1980. - 287 - Pp.560-561;
11. Kruger DH, Schroeder C, Santibanez-Koref M, Reuter M. Avoidance of DNA methylation: a virus-encoded methylase inhibitor and evidence for counterselection of methylase recognition sites in viral genomes // Cell Biophys. - 1989. - 15 - Pp.87-95;
12. Pein CD, Reuter M, Meisel A, Cech D, Kruger DH. Activation of restriction enzyme EcoRII does not depend on the cleavage of stimulator DNA // Nucleic Acids Res. - 1991. - 19. - Pp.5139-5142;
13. Nasri M, Thomas D. Relaxation of recognition sequence of specific endonuclease HindII // Nucleic Acid Res. - 1986. - 14(2). - Pp.811-821;
14. Alves J, Selent U, Wolfes H. Accuracy of the EcoRV restriction endonuclease: binding and cleavage studies with oligodeoxynucleotide substrates containing degenerate recognition sequences // Biochemistry.- 1995. - №34 - Pp.11191-11197;
15. Murray IA, Stickel ShK, Roberts RJ. Sequence-specific cleavage of RNA by Type II restriction enzymes // Nucleic Acids Research. - 2010. - 38(22). - Pp.8257¬8268;
16. Pingoud A. Spermidine increases the accuracy of type II restriction endonucleases. Suppression of cleavage at degenerate, non-symmetrical sites // Eur. J. Biochem. - 1985. - 147. - Pp.105-109;
17. Robinson CR, Sligar SG. Hydrostatic pressure reverses osmotic pressure effects on the specificity of EcoRI-DNA interactions // Biochemistry.- 1994. - 33. - Pp.3787-3793;
18. Vasu K, Nagamalleswari E, Zahran M, Imhof P, Xu S.Y, Zhu Z, Chan S.H. and Nagaraja V. Increasing cleavage specificity and activity of restriction endonuclease KpnI // Nucleic Acids Res. - 2013. - 41. - Pp.9812-9824;
19. Bachellier S, Clement J-M, Hofnung M, Gilson E. Bacterial Interspersed Mosaic Elements (BIMEs) Are a Major Source of Sequence Polymorphism in Escherichia coli Intergenic Regions Including Specific Associations With a New Insertion Sequence // Genetics.- 1997. - 145(3). - Pp.551-562;
20. Kuroda-Kawaguchi T, Skaletsky H, Brown LG, Minx PG, Cordum HS, Waterston RH, Wilson RK, Silber S, Oates R, Rosen S, Page DC. The AZFc region of the Y chromosome features massive palindromes and uniform reccurent deletions in infertile men // Nature Genetics.- 2013. - 29(3). - Pp.279-86;
21. Duncan BK, Miller JH. Mutagenic deamination of cytosine residues in DNA // Nature.- 1980. - 287. - Pp.560-561;
22. Greene PJ, Gupta M, Boyer HW, Brown WE, Rosenberg JM. Sequence analysis of the DNA encoding the EcoRI endonuclease and methylase // J. Biol. Chem.- 1981. - 256. - Pp.2143-2153;
23. Newman AK, Rubin RA, Kim SH, Modrich P. DNA sequences of structural genes for EcoRI DNA restriction and modified enzymes // J. Biol. Chem.- 1981. - 256.-Pp.2131-2139;
24. Schoner B, Kelly S, Smith GO. The nucleotide sequence of the HhaII restriction and modification genes from Haemophilus haenolyticus. // Gene.- 1983. - 74.-Pp.227-236;
25. Mann MB, Rao RN, Smith HO. Cloning of restriction and modification genes in E. coli: the HhaII system from Haemophilus haemolyticus // Gene.- 1978. - 3.- Pp.97-112;
26. Kosykh VG, Solonin AS, Buryanov YI, Bayev AA. Overproduction of the EcoRII endonuclease and methylase by Escherichia coli strains carrying recombinant plasmids constructed in vitro // Biocheim. Biophys. Acta. - 1981. - 655. - Pp.102-106;
27. Kosykh VG, Buryanov YI, Bayer AA. Molecular cloning of the EcoRII endonuclease and methylase genes // Mol. Gen. Genet. - 1980. - 178. - Pp.717-718;
28. Greene PJ, Boyer HW. Genetic and molecular analysis of the EcoRI restriction and modification system // Fed. Proc.- 1981. - №40. - Pp.293.
29. Walder RY, Hartley JL, Donelson JE, Walder JA. Cloning and expression of the PstI restriction-modification system in Escherichia coli // Proc. Natl. Acad. U.S.A. - 1981. - 78. - Pp.1503-1507;
30. Walder RY, Walder JA, Donelson JE. The organization and complete DNA sequence of the PstI restriction-modification system // J. Biol. Chem.- 1984. - 259. - Pp.8015-8026;
31. Theriault G, Roy PH, Howard KA, Benner JS, Brooks JS, Waters AF, Gingeras TR. Nucleotide sequence of the PaeR7 restriction/modification system and partial characterization of its protein products // Nucleic Acids Res. - 1985. - 13. - Pp.8441-8461;
32. Gingeras TR, Brooks JE. Cloned restriction/modification system from Pseudomonas aeruginosa // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 1983. - 80. Pp.402-406;
33. Theriault G, Roy PH. Cloning of Pseudomonas plasmid pMG7 and its restriction-modification system in Escherichia coli // Gene. - 1982. - 19. - Pp.355-359;
34. Bougueleret L, Tenchini ML, Botterman J, Zabeau M. Overproduction of the EcoRV endonuclease and methylase // Nucleic Acids Res. - 1985. - 13. - Pp.3823¬3839;
35. Bougueleret L, Schwarzstein M, Tsugita A, Zabeau M. Characterization of the genes coding for the EcoRV restriction and modification system of Escherichia coli. Nucleic Acids Res. - 1984. - 12. - Pp.3659-3677;
36. Blumenthal RM, Gregory SA, Cooperider JS. Cloning of a restriction-modification system from Proteus vulgaris and its use in analyzing a methylase-sensitive phenotype in Escherichia coli // J. Bacteriol. - 1985. - 164. - Pp.501-509;
37. Kiss A, Posfai G, Keller CC, Venetianer P, Roberts RJ. Nucleotide sequence of the BsuRI restriction-modification system // Nucleic Acids Res. - 1985. - 13. - Pp.6403-6420;
38. Borck K, Beggs JD, Brammar WJ, Hopkins AS, Murray NE. The construction in vitro of transducing derivatives of phage lambda // Mol. Gen. Genet. - 1976. - 146. - Pp.199-207;
39. Szomolanyi I, Kiss A, Venetianer P. Cloning the modification methylase gene of Bacillus sphaericus R in Escherichia coli // Gene. - 1980. - 10. - Pp.219-225;
40. Lunnen KD, Barsomian JM, Camp RR, Card CO, Chen SZ, Croft R, Looney MC, Meda MM, Moran LS, Nwankwo DO. Cloning Type II restriction and modification genes // Gene. -1988. - 74. - Pp.25-32;
41. Howard KA, Card C, Benner JS, Callahan HL, Maunus R, Silber K, Wilson G, Brooks JE. Cloning the DdeI restriction-modification system using a two-step method // Nucleic Acids Res. - 1986. - 14. - Pp.7939-7951;
42. Brooks JE, Benner JS, Heiter DF, Silber KR, Sznyter LA, Jager-Quinton T, Moran LS, Slatko BE, Wilson GG, Nwankwo DO. Cloning the BamHI restriction modification system // Nucleic Acids Res.- 1989. - 17. - Pp.979-997;
43. Anton BP, Heiter DF, Benner JS, Hess EJ, Greenough L, Moran LS, Slatko BE, Brooks JE. Cloning and characterization of the BglII restriction-modification system reveals a possible evolutionary footprint // Gene. - 1997. - 187. - Pp.19-27;
44. Williams K, Savageau MA, Blumenthal RM. A bistable hysteretic switch in an activator-repressor regulated restriction-modification system // Nucleic Acids Res.- 2013. - 41. - Pp.6045-6057;
45. Bogdanova E, Zakharova M, Streeter S, Taylor J, Heyduk T, Kneale G, Severinov K. Transcription regulation of restriction-modification system Esp1396I // Nucleic Acids Res.- 2009. - 37. - Pp.3354-3366;
46. Bogdanova E, Djordjevic M, Papapanagiotou I, Heyduk T, Kneale G, Severinov K. Transcription regulation of the type II restriction-modification system AhdI // Nucleic Acids Res.- 2008. - 36. - Pp.1429-1442;
47. Knowle D, Lintner RE, Touma YM, Blumenthal RM. Nature of the promoter activated by C.PvuII, an unusual regulatory protein conserved among restriction-modification systems // J. Bacteriol.- 2005. - 187. - Pp.488-497;
48. Blumenthal RM. E. coli can restrict methylated DNA and may skew genomic libraries // Trends Biotechnol.- 2005. - 4. - Pp.302-305;
49. Raleigh EA, Wilson G. Escherichia coli K-12 restricts DNA containing 5- methylcytosine // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.- 1986. - 83. - Pp.9070-9074;
50. Noyer-Weidner,M., Diaz,R. and Reiners,L. Cytosine-specific DNA modification interferes with plasmid establishment in Escherichia coli K12: involvement of rgl B // Mol. Gen. Genet.- 1986. - 205. - Pp.469-475;
51. Revel HR, Luria SE. DNA-glucosylation in T-even phage: genetic determination and role in phage-host interaction // Annu. Rev. Genet.- 1970. - 4. - Pp.177-192;
52. Raleigh EA, Murray NE, Revel H, Blumenthal RM, Westaway D, Reith AD, Rigby PWJ, Elhai J, Hanahan D. McrA and McrB restriction phenotypes of some E. coli strains and implications for gene cloning // Nucleic Acids Res.- 1988. - 15. - Pp.1563¬1575;
53. Bujnicki JM, Radlinska M, Rychlewski L. Atomic model of the 5- methylcytosine-speci c restriction enzyme McrA reveals an atypical zinc nger and structural similarity to beta beta alpha-Me endonucleases // Mol. Microbiol.- 2000. - 37. - Pp.1280-1281;
54. Ramalingam R, Prasad R, Shivapriya R, and Dharmalingam K. Molecular cloning and sequencing of McrA locus and identi cation of McrA protein in Escherichia coli // J. Biosci.- 1992. - 17. - Pp.217-232;
55. Hiom K, Sedgwick SG. Cloning and structural characterization of the mcrA locus of Escherichia coli // J. Bacteriol.- 1991. - 173. - Pp.7368-7373;
56. Bujnicki JM, Rychlewski L. Identification of a PD(D/E)XK-like domain with a novel conguration of the endonuclease active site in the methyl-directed restriction enzyme Mrr and its homologs // Gene. - 2001. - 267. - Pp.183-191;
57. Waite-Rees PA, Keating CJ, Moran LS, Slatko BE, Hornstra LJ, Benner JS. Characterization and expression of the Escherichia coli Mrr restriction system // J. Bacteriol.-1991. - 173. - Pp.5207-5219;
58. Heitman J, Model P. Site-specific methylases induce the SOS DNA repair response in Escherichia coli // J. Bacteriol.- 1987. - 169. - Pp.3243-3250;
59. Zheng Y, Cohen-Karni D, Xu D, Chin HG, Wilson G, Pradhan S, Roberts RJ. A unique family of Mrr-like modification-dependent restriction endonucleases // Nucleic Acids Res.- 2010. - 38. - Pp.5527-5534;
60. Borgaro JG, Zhu Z. Characterization of the 5-hydroxymethylcytosine- specific DNA restriction endonucleases // Nucleic Acids Res.- 2013. - 41. - Pp.4198¬4206;
61. Wang H, Guan S, Quimby A, Cohen-Karni D, Pradhan S, Wilson G, Roberts RJ, Zhu Z, Zheng Y. Comparative characterization of the PvuRts1I family of restriction enzymes and their application in mapping genomic 5-hydroxymethylcytosine // Nucleic Acids Res.- 2011. - 39. - Pp.9294-9305;
62. Szwagierczak A, Brachmann A, Schmidt CS, Bultmann S, Leonhardt H, Spada F. Characterization of PvuRts1I endonuclease as a tool to investigate genomic 5- hydroxymethylcytosine // Nucleic Acids Res.- 2011. - 39. - Pp.5149-5156;
63. Janosi L, Yonemitsu H, Hong H, Kaji A. Molecular cloning and expression of a novel hydroxymethylcytosine-specific restriction enzyme (PvuRts1I) modulated by glucosylation of DNA // J. Mol. Biol.- 1994. - 242. - Pp.45-61;
64. Bair CL, Black LW. A Type IV modification dependent restriction nuclease that targets glucosylated hydroxymethyl cytosine modified DNAs // J. Mol. Biol.- 2007. - 366. - Pp.768-778;
65. Tarasova GV, Nayakshina TN, Degtyarev SK. Substrate specificity of new methyl-directed DNA endonuclease GlaI // BMC Mol. Biol.- 2008. - 9. - Pp.7;
66. Walder RY, Langtimm CJ, Catterjee R, Walder JA. Cloning of the MspI modification enzyme // J. Biol. Chem.- 1983. - 258. - Pp.1235-1241;
67. Kiss A, Baldauf F. Molecular cloning and expression in Escherichia coli of two modification methylase genes of Bacillus subtilis // Gene. - 1983. - 21. - Pp.111¬119;
68. Janulaitis A, Povilionis P, Sasnauskas K. Cloning of the modification methylase gene of Bacillus centrosporus in Escherichia coli // Gene. - 1982. - 20. - Pp.197-204;
69. Mann MB. In: Chirikjian,J.G. (ed). Restriction Endonucleases. // Vol. 1. - Elsevier North. Holland. - Pp.229-237;
70. Aiken C, Milarski-Brown K, Gumport RI. RsrI and EcoRI are two different restriction endonucleases that recognize the same DNA sequence // Fed. Proc.- 1986. - 45. - Pp.1914;
71. Nolling J, de Vos WM. Characterization of the archaeal, plasmid-encoded type II restriction-modi cation system MthTI from Methanobacterium thermoformicicum THF: homology to the bacterial NgoPII system from Neisseria gonorrhoeae // J. Bacteriol.- 1992. - 174. - Pp.5719-5726;
72. Withers BE, Ambroso LA, Dunbar JC. Structure and evolution of the XcyI restriction-modification system // Nucleic Acids Res.- 1992. - 20. - Pp.6267-6273;
73. Tamura K, Nei M. Estimation of the number of nucleotide substitution in the control region of mitochondrial DNA in humans and chimpanzees // Molecular Biology and Evolution.- 1993. - 10. - Pp.512-526;


Работу высылаем на протяжении 30 минут после оплаты.




©2025 Cервис помощи студентам в выполнении работ
.