🔍 Поиск работ

Исследование экспрессии генов JAK2 и CALR у пациентов с сочетанными соматическими мутациями при ХМО

Работа №23763

Тип работы

Главы к дипломным работам

Предмет

биология

Объем работы32
Год сдачи2016
Стоимость7300 руб.
ПУБЛИКУЕТСЯ ВПЕРВЫЕ
Просмотрено
316
Не подходит работа?

Узнай цену на написание


ВВЕДЕНИЕ 3
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 5
1. Обзор литературы 5
1.1 Хронические миелопролиферативные опухоли 5
1.1.1 Эссенциальная тромбоцитемия 6
1.1.2. Первичный миелофиброз 7
1.2 Кальретикулин, его структура и функции 10
2 Материалы и методы 15
2.1 Объект исследования 15
2.2 Выделение ДНК с использованием набора "ДНК-Сорб-В" 15
2.3 Проведение ПЦР с детекцией результата в режиме реального времени на приборе «iCycler iQ5» (BioRad). 17
2.4 Проведение электрофореза для выявления других типов мутаций в гене CALR 23
2.5 Статистический анализ 25
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 27
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

Хронические миелопролиферативные опухоли (ХМО) - это группа заболеваний, включающая несколько клональных Ph-негативных гематологических болезней. К самым частым миелопролиферативным заболеваниям относятся истинная полицитемия (ИП), эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ) и первичный миелофиброз (ПМФ). На сегодняшний день установлено наличие трех основных мутаций гемопоэтической стволовой клетки при этих патологиях: в гене янус-киназы (JAK2), в гене рецептора тромбоэтинового рецептора (MPL), в гене калиретикулина (CALR).
Встречаемость мутации JAK2 среди пациентов с ИП составляет 95%, с ЭТ - 50-70%, с ПМФ - 40-50%. Встречаемость мутации MPL среди пациентов с ПМФ и ЭТ составляет 8% и 10% соответственно. Встречаемость мутации CALR среди пациентов с ПМФ и ЭТ составляет 35% и 25% соответственно [1].
СALR является многофункциональным кальций-связывающим белком эндоплазматического ретикулума (ЭР) и принимает участие в формирование третичной структуры белков. В гене CALR встречается около 60 мутации, но выделяют 2 типа стандартных мутаций. При 1 типе происходит делеция 52 нуклеотидов, при 2 типе происходит инсерция 5 нуклеотидов, встречаемость этих двух мутаций составляет 88% от всех мутаций в гене CALR.
Поскольку роль мутаций в гене CALR в развитии ХМО была показана сравнительно недавно, то в России данный анализ только начинает использоваться в некоторых лабораториях, занимающихся анализом соматических мутаций при данных патологиях.
Мутации в гене CALR обуславливают развитие клинической картины ЭТ и ПМФ и предлагаются в качестве обязательного лабораторного теста для подтверждения диагноза. Немаловажное значение имеет количественное определение уровня аллельной нагрузки соматических мутаций в гене CALR - количества пораженных аллелей, выраженное в процентах. Уровень аллельной нагрузки может значимо отражать стадию развития, прогрессивность заболевания и эффективность терапии [2].
Исходя из вышесказанного, целью данной работы явилось исследование уровня аллельной нагрузки соматических мутаций в гене CALR у пациентов с ХМО.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
1. Исследовать пациентов с подозрением на ХМО на наличие мутаций в гене CALR.
2. Определить распространенность отдельных типов мутаций при ЭТ и ПМФ.
3. Определить уровень аллельной нагрузки соматических мутаций в гене CALR.
4. Сравнить содержание форменных элементов крови среди групп пациентов с различным типом исследуемых мутаций и аллельной нагрузкой в гене CALR.
Работа выполнялась в Красноярском филиале ФГБУ Гематологического научного центра Минздрава России.

Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Помощь в написании работ!
ДИПЛОМНЫЕ МАГИСТЕРСКИЕ ДИССЕРТАЦИИ
КУРСОВЫЕ СТАТЬИ ВКР

1. Klampfl, T. Somatic mutations of calreticulin in myeloproliferatie neoplasms / T. Klampfl, H. Gisslinger, A. S. Harutyunyan // The new England journal of medicine. - 2013. - № 369 (25). - P. 2379-2389.
2. Ning, L. Frequency and allele burden of CALR mutations in Chinese with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis without JAK2V617F or MPL mutations / L. Ning, Y. Qui-Mei, L. Jin-Lan // Leukemia Recearch. - 2015. - № 39. - P. 510-514.
3. Соколова, М. А. Современные представления о «классических» Ph- негативных хронических миелопролиферативных заболеваниях / М. А. Соколова. - 2 с.
4. Моисеев, С. И. Хронические миелопролиферативные заболевания. Классификация, диагностика и лечение / С. И. Моисеев, А. Ю. Зарицкий, Г. Н. Салогуб.- 2005. - 5 с.
5. Tefferi, A. Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasm: Tye 2008 World Health Organization criteria and point-of care diagnostic algotryms/ A. Tefferi, J. W. Vardiman // Leukemia.- 2008. - №22(1). - P. 14-22.
6. Абдулкадыров, К. М. Клиническая гематология: справочник / К. М. Абдулкадыров. - Санкт-Петербург: Питер Принт. - 2006. - 447 с.
7. Воробьев, А. И. Руководство по гематологии: учебник / А. И. Воробьев. - Москва: Ньюдиамед. - 2003. - Ч.3. - С. 9-15.
8. Абдулкадыров, К. М. Эссенциальная тромбоцитемия: современные представления о диагностике и лечении / К.М. Абдулкадыров, В. А. Шуваев, И. С. Мартынкевич // Вестник гематологии. - Санкт-Петербург, 2014. - №1. - 49 с.
9. Levine, R. L. New advances in the pathogenesis and therapy of essential thrombocythemia/ R. L. Levine, M. Heaney //Hematol. Am. Soc. Hematol. Educ. Program. - 2008. - № 5. - P. 76-82.
10. Nangalia, J. Somatic CALR Mutations in Myeloproliferative Neoplasms with Nonmutated JAK2 / J. Nangalia, C. E. Massie, E. J. Baxter et. al. // The new England journal of medicine. - 2013. - №369 (25). - 2391 p.
11. Tefferi, A. Proposals and rationale for revision of the World Health Organization diagnostic criteria for polycythemia vera, essential thrombocythemia, and primary myelofibrosis: recommendations from an ad hoc international expert panel / A. Tefferi, J. Thiele, A. Orazi et. al. // Blood. - 2007. - № 110 (4). - 1092 p.
12. Tefferi, A. An over view on CALR and CSF3R mutations and a proposal for revision of WHO diagnostic criteria for myeloproliferative neoplasms / A. Tefferi, J. Thiele, A. M. Vannucchi, T. Barbui// Leukemia. - 2014. - №28(7). - 1407 p.
13. Mesa R. How I treat symptomatic splenomegaly in patients with myelofibrosis / R. Mesa // Blood. - 2009. - № 113(22). - 400 p.
14. Абдулкадыров, К. М. Критерии диагностики и современные методы лечения первичного миелофиброза / К. М. Абдулкадыров, В. А. Шуваев, И. С. Мартынкевич // Вестник гематологии. - 2013. - №9(3). - P. 44-78.
15. Levine, R. L. Activating mutation in the tyrosine kinase JAK2 in polycythemia vera, essential thrombocythemia, and myeloid metaplasia with myelofibrosis / R. L. Levine, M. Wadleigh, J. Cools // Canser Cell. - № 7(4). - 97 p.
16. Vannucchi, A. M. Molecular pathophysiology of Philadelphia-negative myeloproliferative disorders: beyond JAK2 and MPL mutations / A. M. Vannucchi, P. Guglielmelli // Haematologica. - 2008. - №93(7). - 6 p.
17. Vardiman, J. W. The 2008 revision of the World Health Organization (WHO) classiffication of myeloid neoplasms and acute leukemia: rationale and important changes / J. W. Vardiman, J. Thiele, D. A. Arber // Blood. - 2009. - №114(5). - 51 p.
18. Michalak, M. Calreticulin: one protein, one gene, many funcctions / M. Michalak, E. F. Corbett, N. Mesaeli // Biochemical Journal. - 1999. - №2. - P. 281¬292.
19. Michalak, M. Ca2+signaling and calcium binding chaperones of the endoplasmic reticulum / M. Michalak, J. M. R. Parker, M. Opas // Cell Calcium. - 2002. - № 5. - P. 269-278.
20. Burns, K. Modulation of gene expression by calreticulin binding to the glucocorticoid receptor / K. Burns, B. Duggan, E. A. Atkinson // Nature. - 1994. - P. 476-480.
21. Martin, V. Identification by mutational analysis of amino acid recidues essential in the chaperone function of calreticulin / V. Martin, J. Groenendyk, S. S. Steiner // The Journal of Biological Chemistry. - 2006. - № 4. - P. 2338-2346.
22. Krause, K. Calreticulin / K. H. Krause, M. Michalak // Cell. - 1997. - № 4. - P. 439-443.
23. Baksh, S. Expression of calreticulin in Escherichia-coli and identification of its Ca2+binding domains / S. Baksh, M. Michalak // The Journal of Biological Chemistry. - 1991. - № 32. - P. 21458-21465.
24. Nakamura, K. Functional specialization of calreticulin domains / K. Nakamura, A. Zuppini, S. Arnaudeau // The Journal of Cell Biology. - 2001. - № 5. - P. 961-972.
25. Corbett, E. F. Ca2+regulation of interactions between endoplasmic reticulum chaperones / E. F. Corbett, K. Oikawa, P. Francois // The Journal of Biological Chemistry. - 1999. - № 10. - P. 6203-6211.
26. Michalak, M. Calreticulin / M. Michalak, R. E. Milner, K. Burns, M. Opas // Biochemical Journal. - 1992. - № 3. - P. 681- 692.
27. Labriola, C. A. Endoplasmic reticulum calcium regulates the retrotranslocation of Trypanosoma cruzi calreticulin to the cytosol / C. A. Labriola, I. L. Conte, M. L. Medus, A. J. Parodi // PLoS ONE. - 2010. - № 10. - 10 p.
28. Dedhar, S. Novel functions for calreticulin: interactions with integrins and modulation of gene expression? / S. Dedhar // Trends in Biochemical Sciences. - 1994. - № 7. - P. 269-271.
29. Zapun, A. Enhanced catalysis of ribonuclease B folding by the interaction of calnexin or calreticulin with ERp57 / A. Zapun, N. J. Darby, D. C. Tessier // The Journal of Biological Chemistry. - 1998. - № 11. - P. 6009-6012.
30. Rozzan, T. Molecular and cellular physiology of intracellular calcium stores / T. Rozzan, R. Ruzzuto, P. Volpe // Physiological Reviews. - 1994. - № 3. - P. 595-636.
31. Bastianutto, C. Overexpression of calreticulin increases the Ca2+ capacity of rapidly exchanging Ca2+stores and reveals aspects of their lumenal microenvironment and function / C. Bastianutto, E. Clementi, F. Codazzi // The Journal of Cell Biology. - 1995. - № 4. - P. 847-855.
32. Stanley, R. F. Molecular Mechanism of Mutant CALR-Mediated Transformation. / R. F. Stanley, U. Steidl // Cancer Discovery. - 2016. - № 6(4). - P. 344-346.
33. Ning, L. Frequency and allele burden of CALR mutations in Chinese with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis without JAK2V617F or MPL mutations / L. Ning, Y. Qui-Mei, L. Jin-Lan // Leukemia Recearch. - 2015. - № 39. - P. 510-514.
34. Vannucchi, A. M. Molecular pathophysiology of Philadelphia-negative myeloproliferative disorders: beyond JAK2 and MPL mutations / A. M. Vannucchi, P. Guglielmelli // Haematologica. - 2008. - №93(7). - 6 p.
35. Nangalia, J. Somatic CALR Mutations in Myeloproliferative Neoplasms with Nonmutated JAK2 / J. Nangalia, C. E. Massie, E. J. Baxter et. al. // The new England journal of medicine. - 2013. - №369 (25). - 2391 p.
36. Зорина, В. В. Основы ПЦР : методическое пособие / В. В. Зорина. - Москва : ДНК-Технология, 2012. - 116 c.
37. Андреева, А. П. ПЦР-анализ в научно-исследовательских лабораториях: учебное пособие / А. П. Андреева. - Караганда, 2012. - 98 c.
38. ПЦР "в реальном времени"/ Д. В. Ребриков [и др.]. - Москва : БИНОМ, Лаборатория знаний, 2009. - 223 с.
39. Mansier, O. JAK2V617F and CALR double mutations are more frequently encountered in patient with low JAK2V617F allelic burdens / O. Mansier, M. Migeon, G. Etienne // Leukemia Lymphoma. - 2015. - P. 10-13.

Работу высылаем на протяжении 30 минут после оплаты.




©2026 Cервис помощи студентам в выполнении работ
.