ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 6
1.1. Тканевая инженерия 6
1.2. Биоразлагаемые матриксы из ПГА 7
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 13
2.1. Характеристика используемых образцов ПГА 13
2.2. Получение и характеристика матриксов 13
2.3. Выделение и культивирование нервных клеток головного мозга крысы 13
2.4. Выделение и культивирование МСК 15
2.5. Культивирование фибробластов NIH 3T3 15
2.6. Исследование жизнеспособности клеточных линий на полимерных матриксах.
2.7. Культивирование ЭНК с использованием подложек 16
2.8. Статистическая обработка результатов 17
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ 16
3.1. Характеристика поверхности полученных матриксов 18
ВЫВОДЫ 38
ЛИТЕРАТУРА 39

Купить

Заболевания нервной системы являются серьезнейшей проблемой для человечества XXI века. Современный образ жизни негативно сказывается сначала именно на нервной системе, а затем нарушается работа остальных частей организма. Все заболевания нервной системы можно разделить на сосудистые, инфекционные, хронически прогрессирующие, наследственные и травматические патологии:
1. Сосудистые заболевания являются чрезвычайно распространенными и опасными. Они часто ведут к инвалидности или даже смерти больного. В эту группу входят нарушения мозгового кровообращения острого характера (инсульты) и хронически текущая сосудисто¬мозговая недостаточность, становящаяся причиной изменений со стороны мозга.
2. Инфекционные заболевания нервной системы развиваются вследствие патогенного воздействия различных вирусов, бактерий, грибков и паразитов. Страдает преимущественно головной мозг, а периферическая нервная система и спинной мозг поражаются реже. Распространенными заболеваниями этой группы являются энцефалиты, малярия, корь.
3. Хронически прогрессирующие заболевания возникают из-за специфического строения нервной системы и патогенного действия инфекций, интоксикации или обменных нарушений. Данная группа объединяет склероз, миастению и другие заболевания. Течение болезни обычно длительное, а поражение носит системный характер.
4. Наследственные заболевания нервной системы разделяют на хромосомные (клеточные) и геномные. Самым распространенным хромосомным заболеванием нервной системы является болезнь Дауна, а геномные патологии поражают чаще всего нервно¬мышечную систему.
5. Травматические повреждения нервной системы возникают вследствие травмы, ушиба или сдавливания головного, или спинного мозга.
В процессе развития заболевания, в первую очередь гибнут нервные клетки нервной системы, и это является причиной нарушения связи различных систем организма друг с другом. Причины заболеваний нервной системы можно классифицировать:
1. Различные инфекционные возбудители (грибки, паразиты, вирусы, кокки).
2. Плацентарная передача во время беременности (цитомегаловирус).
3. Ушибы, опухоли, сосудистые нарушения головного и спинного мозга.
4. Недостаточное питание, отсутствие витаминов, вследствие отравления химическими веществами.
Проблема заболеваемости очень остро стоит среди населения. Согласно статистике, около 40% трудоспособного населения России страдает от заболеваний периферической нервной системы, а в 2013 году заболевания нервной системы среди населения России составили 2364 случая, по 16,5 случаев на 1000 человек населения (согласно Федеральной службе государственной статистики).
Одним из современных способов лечения заболеваний нервной системы является тканевая инженерия - это комплекс наук, включающий в себя биологию, медицину и технические науки, изучающий создание in vitro эквивалентов тканей и органов, и использующий принцип трансплантации клеточной культуры на биосовместимом носителе.
Успехи регенеративной медицины показали возможность лечения ряда ранее неизлечимых заболеваний с помощью клеточный технологий, в том числе и заболеваний нервной системы, например, для лечения болезни Паркнсона (ScienceDaily; 2008) и восстановления периферической нервной системы (Steve Johnson; 2009)
Основным направлением регенеративной медицины является восстановление соматических органов. И если создание и трансплантация целого мозга является пока неразрешимой задачей, восстановление повреждений периферической нервной системы вполне возможно. В настоящее время исследуются разнообразные материалы, пригодные в качестве клеточных носителей для нейронов и нейроглиальных клеток, например гидрогелевые матриксы на основе полиакриловой кислоты (ПАК) (Фомина Г.А., Масгутов Р.Ф; 2007) и на основе композита хитозанф- глицерофосфат (Sungwoo Kim, Satoru K.; 2007).
Одним из подобных материалов являются полигидроксиалканоаты (ПГА) - природные полиэфиры бактериального происхождения. ПГА обладают хорошей биосовместимостью и биоразрушаемостью, а также, в зависимости от мономерного состава, большим спектром физико¬механических свойств. Известно несколько работ, в которых показана возможность культивирования нейрональных клеток на ПГА (Yu, Chen; 2009; Bian , Wang; 2008; Xu , Li; 2010; Novikova, Pettersson; 2007; Wang, Wang; 2009).
Исходя из этого, была сформулирована цель дипломной работы - получить и исследовать тканеинженерные раневые покрытия на основе полигидроксиалканоатов, исследовать влияние подложек на адгезию и пролиферацию нервных клеток, исследовать влияние ростовых факторов на пролиферацию нервных клеток.
Для достижения цели были сформулированы задачи:
1. Получить серию матриксов из 4-х компонентных полигидроксиалканоатов.
2. Отработать методики выделения и культивирования эмбриональных нервных клеток головного мозга крыс, провести сравнительное культивирование клеток с ростовыми факторами и в обычной культуральной среде.
3. Провести оценку жизнеспособности 3 клеточных линий на 4-компонентных ПГА разных составов.
4. Провести исследование влияния подложек на адгезию и пролиферацию нервных клеток, в сравнении с чистым полимером и культуральным пластиком.
Купить