РЕФЕРАТ 2
ВВЕДЕНИЕ 4
1. Обзор литературы 5
1.1. Культивирование микроорганизмов, синтезирующих
полигидроксиалканоаты 5
1.2. Синтез полигидроксиалканоатов 5
1.3. Основные виды полигидроксиалканоатов 6
1.4. Физико-химические свойства полигидроксиалканоатов 8
1.5. Влияние различных источников углерода на синтез ПГА, содержащих 4ГВ 10
2. Материалы и методы 13
2.1. Бактериальный штамм, среда и условия роста 13
2.2. Измерение параметров культивирования 13
2.3. Измерение содержания полимера 14
2.4. Измерение молекулярной массы 14
2.5. Измерение краевого угла смачивания 15
2.6. Измерение температуры плавления 15
ВЫВОДЫ 16
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 17
Полигидроксиалканоаты (ПГА) являются биополимерами, которые синтезируются многими микроорганизмами в специфических условиях несбалансированного роста, при избытке углеродного и энергетического субстрата в среде и дефиците минеральных элементов (азота, серы, фосфатов и др.), а также кислорода. В последние годы изучению ПГА уделяется огромное внимание благодаря их потенциальному применению в различных областях, так как по сравнению с обычными пластиками ПГА разрушаются в аэробных/ анаэробных условиях и являются биосовместимыми материалами, поэтому интерес к ним увеличивается [1].
Сополимерные ПГА различного химического состава более перспективны, чем гомополимер П(3ГБ), однако их получение - весьма сложная технологическая задача [2]. В питательную среду можно добавлять предшественники различных мономеров, таких как 3ГВ, 4ГБ и 4ГВ. Добавление данных предшественников (как показано в работах Huong et al.,2014, Muzaiyanah and Amirul, 2013, Ramachandran et al, 2011) значительно влияет на состав полимера и его физико-химические свойства. В этих работах была продемонстрирована возможность получения сополимеров П(3ГБ-со-4ГБ) при росте штамма Cupriavidus sp. USMAA1020 (DSM 19416) на олеиновой кислоте с предшественниками 4ГБ: у-бутиролактоном, 1,4-бутандиолом, 1,6 - гександиолом с высокими выходами биомассы и полимера и трехкомпонентных полимеров П(3ГБ-со-3ГВ-со-4ГБ) и П(3ГБ-со-3ГВ-со-4ГВ) бактериями Cupriavidus sp. USMAA2-4 при росте на олеиновой кислоте с предшественниками 4ГВ, 3ГВ и 4ГБ, соответственно, у-валеролактоне, 1- пентаноле и 1,4-бутандиоле [3]. 4-гидроксивалератсодержащие полимеры
принадлежат к классу термопластичных эластомеров. Это свидетельствует о том, что они обладают высокоэластичными свойствами и вязкостью и, следовательно, могут растягиваться до размеров, во много раз превышающих его начальную длину (эластомерная нить), и, что существенно, возвращаться к исходному размеру, когда нагрузка снята. К тому же, сополимеры, содержащие 4ГВ, являются термопластами. Это значит, что они имеют высокую температуру стеклования [4]. 4-гидроксивалератсодержащие сополимеры являются очень перспективными и могут широко использоваться в промышленности и регенеративной медицине. Из них можно производить различные упаковочные материалы, тару, бутылки и т. д. В медицине - это шовная нить, системы доставки лекарственных средств, скэффолды и т. д.
Цель: исследовать влияние у-валеролактона на рост Cupriavidus eutrophus В-10646, состав и свойства синтезированного полимера.
Задачи:
1. Исследовать влияние различных концентраций у-валеролактона на рост Cupriavidus eutrophusВ-10646 и синтез полимера.
2. Изучить физико-химические свойства синтезированных полимеров с различными включениями мономеров.
1. Исследован рост бактерий Cupriavidus eutrophus B-10646 и накопление полимера в периодической культуре при росте на фруктозе с добавлением у-валеролактона в концентрациях 1-3 г/л в начале культивирования и в фазу активного роста бактерий (24 час культивирования). Показано отсутствие ингибирующего влияния исследуемых концентраций добавленного на 24 ч культивирования у- валеролактона на рост бактерий и накопление полимера. Установлено, что полимер, синтезируемый бактериями помимо 3ГБ, содержит включения 3ГВ и 4ГВ.
2. Исследован рост бактерий Cupriavidus eutrophus B-10646 и накопление
полимера в периодической культуре при росте на фруктозе с периодичностью добавления у-валеролактона 8-16 ч. Показано
увеличение включения 3ГВ и 4ГВ с увеличением концентрации у- валеролактона. Максимальные включения 3ГВ и 4ГВ получены при концентрации у-валеролактона 5 г/л и составляли соответственно 5,56 и 1.85 мол.%.
3. Исследованы молекулярно-массовые характеристики и поверхностные свойства пленок, изготовленных из синтезированных полимеров различного состава. Отмечено снижение средневесовой и среднечисловой молекулярной массы у полимеров, содержащих 4ГВ. Показано, что с увеличением содержания 3ГВ и 4ГВ происходило значительное снижение дисперсионной составляющей по сравнению с пленками из П(3ГБ).
4. Показано, что при небольших (минорных) включениях 4ГВ (1,85%) значительно изменяются физико-химические свойства сополимеров, а именно, происходит снижение температуры плавления до 158°С по сравнению с П(3ГБ) - 178°С. Изменений в температуре деградации не обнаружено.
1. Воинов, Н. А. Полигидроксиалканоаты - биоразрушаемые полимеры гидроксипроизводных алкановых кислот: синтез, свойства, области применения / Волова, Т. Г. // Journal of Siberian Federal University. Biology 2 (2015 8) 131-151.
2. Волова, T. Г. Высокомолекулярные соединения / Физико-химические свойства полигидроксиалканоатов различного химического строения / Структура и свойства / Жила, Н. О., Шишацкая, Е. И., Миронов, П. В. / Серия А / 2013 / том 55 / №7 / C. 775-786.
3. Жила, Н. О. Характеристика культуры Cupriavidus eutrophus В-10646, синтезирующей полигидроксиалканоаты при росте на сахарах и липидных субстратах / Волова Т. Г., Калачева Г. С. / Journal of Siberian Federal University. Biology 2 (2014 7) 161-173.
4. Gorenflo, V.; Schmack, G.; Vogel, R.; Steinbu" chel, A. Development of a Process for the Biotechnological Large-Scale Production of 4- Hydroxyvalerate-Containing Polyesters and Characterization of Their Physical and Mechanical Properties. Biomacromolecules 2001, 2, 45-57.
5. Волова T. Г. Разрушаемые микробные полигидроксиалканоаты в качестве технического аналога неразрушаемых полиолефинов / Journal of Siberian Federal University. Biology 2 (2015 8) 131-151.
6. Волова, Т.Г. Современные проблемы и методы биотехнологии [Электронный ресурс]: учеб.-метод. пособие для самостоят. работы [для студентов программы подг. 020400.68 «Биология»] / Сиб. федерал. ун-т ; сост.: Т. Г. Волова, Е. И. Шишацкая. - Красноярск : СФУ, 2013. - С. 73.
7. Волова Т.Г., Шишацкая Е.И. Штамм бактерий ВКПМ B-10646 - продуцент полигидроксиалканоатов и способ их получения. Патент РФ №. 2439143. Зарегистрирован 10.01.2012.
8. Волова Т.Г., Калачева Г.С., Константинова В.М. (1996) Способ получения гетерополимера Р-оксимасляной и Р-оксивалериановой кислот. Патент № 2051968.
9. Volova T. G., Kalacheva G.S., A. Steinbuchel. Biosynthesis of MultiComponent Polyhydroxyalkanoates by the Baterium Wautersia eutropha/ Macromol. Symp. /2008, 269, 1-7.
10.Sudesh, K. Synthesis, structure and properties of polyhydroxyalkanoates: biological polyesters / K. Sudesh., H. Abe, Y. Doi // Prog. Polym. Sci. - 2000. - 1503-1555 c.
11. Тагер А. А. Физико-химия полимеров/Тагер A.A. - Москва: Издательство «Химия». - 1968.-500С.
12. Barham P. J. et al. Crystallization and morphology of a bacterial thermoplastic: poly-3-hydroxybutyrate //Journal of Materials Science. - 1984. - T. 19. - №. 9. - С. 2781-2794;
13. Volova T.G. (2004) Polyhydroxyalkanoates - Plastic Materials of the 21st Century: production, properties, application. New York: Nova Science Pub., 282 p.
14.Senior, P. G. Polyhydroxybutyrate, a speciality polymer of microbial origin In / P. G. Senior, A. Dean, D. Ellwood, C. Evans, E. Horwood // eds. Continuous culture. - 1984. - V. 8. - P. 266-271.
15. Huong, K. H. Microbial-based synthesis of highly elastomeric biodegradable poly(3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate) thermoplastic / C. H. Teh, A. A. Amirul // Int J Biol Macromol. 2017 Aug;101:983-995.
16. Muzaiyanah, A. R. Studies on the Microbial Synthesis and Characterization of Polyhydroxyalkanoates Containing 4-Hydroxyvalerate Using y- Valerolactone / A. A. Amirul // Biochem Biotechnol (2013) 170:1194¬1215.
17. Martin, C. H. High-titer production of monomeric hydroxyvalerates from levulinic acid in Pseudomonas putida / K. L. J. Prather // Journal of Biotechnology 139 (2009) 61-67.
18.Schmac, G. Biotechnological Production and Characterization of Polyesters Containing 4-Hydroxyvaleric Acid and Medium-Chain-length Hydroxyalkanoic Acids / V. Gorenflo, A. Steinbuchel // Macromolecules 1998, 31, 644-649.
19. Valentin, H. E. Accumulation of Poly(3-hydroxybutyric acid-co-3-
hydroxyvaleric acid-co-4-hydroxyvaleric acid) by Mutants and
Recombinant Strains of Alcaligenes eutrophus / A. Steinbuchel // Journal of Environmental Polymer Degradation, Vol. 3, No. 3, 1995.
20. Жирнов, A.E. Структура полимеров [Электронный ресурс]:
Методическая разработка для теоретического курса и лабораторных работ по высокомолекулярным соединениям / Московский Государственный Университет имени М.В. Ломоносова, химический факультет, кафедра высокомолекулярных соединений; сост.: Жирнов А.Е., Аржаков М.С. - Москва, 2013. - С. 41.
21. Рафиков, С. Р. Методы определения молекулярных весов и полидисперсности высокомолекулярных соединений / Павлова, С. А., Твердохлебова, И. И./ М. - 1963. - C. 335.