Аннотация
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫЙ ОБОЗНАЧЕНИЙ 4
ВВЕДЕНИЕ 5
1 Обзор литературы 7
1.1 Общие представления 7
1.2 Общие принципы лечения различных молекулярных подтипов РМЖ 8
1.2.1 Неоадъювантная (предоперационная) химиотерапия 9
1.2.2 Адъювантная (послеоперационная) химиотерапия 11
1.2.2 Гормонотерапия 11
1.3 Клинические маркеры ответа на неоадъювантную химиотерапию 12
1.4 Молекулярно-генетические маркеры ответа на НХТ 14
2 Материалы и методы 16
2.1 Работа с биопсией и операционным материалом 16
2.2 Работа с клеточными культурами 18
2.3 Оборудование 19
2.4 Статистическая обработка результатов 20
3 Результаты 21
3.1 Полногеномный микроматричный анализ 21
3.1.1 Описание CNA-ландшафта опухоли до лечения 21
3.1.2 Описание CNA-ландшафта опухоли после лечения 26
3.1.3 Анализ изменения CNA-ландшафта в процессе предоперационной
химиотерапии в зависимости от ответа на схемы НХТ и исхода лечения 27
3.1.4 Анализ распределения частот в зависимости от ответа на предоперационную химиотерапию с учетом применения различных схем НХТ до и после лечения .. 29
3.1.5 Анализ распределения частот CNA до и после лечения в зависимости от
исхода с учетом применения различных схем НХТ 34
3.2 Оценка показателей безметастатической выживаемости 38
3.3 Полнотранскриптомный микроматричный анализ 39
3.3.1 Оценка изменения экспрессионного ландшафта опухоли в зависимости от
применения различных стандартных схем НХТ 39
3.3.2 Оценка изменения экспрессионного ландшафта при применении различных
стандартных схем НХТ в зависимости от ответа на НХТ и статуса гематогенного метастазирования 42
3.3.2.1 Оценка экспрессионного ландшафта опухоли до проведения лечения зависимости от ответа на НХТ 42
3.3.2.2 Оценка экспрессионного ландшафта опухоли после проведения
лечения 46
3.3.2.3 Оценка экспрессионного ландшафта опухоли до проведения лечения в
зависимости от статуса гематогенного метастазирования 49
3.3.2.4 Оценка экспрессионного ландшафта опухоли после проведения
лечения в зависимости от статуса гематогенного метастазирования 51
3.3.3 Оценка изменения экспрессии генов, находящихся в регионах локализации
CNA-маркеров чувствительности к отдельным схемам НХТ 55
3.4 Работа с клеточными культурами 57
3.4.1 Полногеномный микроматричный анализ до и после воздействия
химиопрепаратами 57
3.4.2 Анализ регионов локализации CNA-маркеров чувствительности к
отдельным схемам НХТ 59
3.4.3 Полнотранскриптомный микроматричный анализ до и после воздействия
химиопрепаратами 61
4 Обсуждение результатов 64
ВЫВОДЫ 70
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 72
ПРИЛОЖЕНИЕ 81
Рак молочной железы во всем мире лидирует в структуре онкологической заболеваемости и смертности среди женщин [1]. На сегодняшний день предоперационная химиотерапия является стандартным методом лечения местно-распространенного рака молочной железы в попытке получить доступ к хирургическому вмешательству или улучшить показатели органосохраняющих операций [2]. Однако, различные морфологические подтипы РМЖ, и, более того, опухоли одного подтипа с различным статусом HER2, имеют некоторые отличия в назначении предоперационного лечения. Так, предоперационная химиотерапия является стандартом комплексного лечения для HER2- положительного (HER2+) РМЖ. При этом при построении тактики лечения опухолей с HER2- статусом, для которых химиочувствительность не так сильна, как при других клинических подтипах, может быть сложным. В отличие от других подтипов РМЖ, для HER2-негативного РМЖ, частота полного патоморфологического ответа (pCR) невысока, а наличие остаточного заболевания не имеет такого же прогностического значения [3]. В частности, показано, что частота pCR у пациентов с HR+/HER2- РМЖ составила всего 7,9% и оказалась значительно ниже, чем у пациентов с нелюминальными типами РМЖ (p<0,013) [4].
При этом сегодня золотого стандарта лечения первой линии для пациентов с HER2- отрицательным РМЖ по-прежнему не существует, не смотря на то, что для местно- рецидивирующего или метастатического НЕК2-отрицательного РМЖ доступно несколько методов лечения. Стоит отметить, что антрациклин- и таксан-содержащие схемы предоперационной химиотерпии, а также препараты платины, признаны наиболее эффективными и часто используемыми цитостатическими и цитотоксическими препаратами для лечения рака молочной железы в неоадъювантном режиме.
Для соблюдения руководящего принципа медицинской этики - избежание причинения вреда пациентам, наиболее сложной задачей является не только определение пациентов, которым химиотерапия может принести наибольшую пользу, но и использование системного режима, имеющий максимально возможный краткосрочный терапевтический индекс в сочетании с минимальным риском долговременной значительной токсичности, связанной с лечением. В связи с этим необходимо изучить специфику влияния различных режимов предоперационного лечения на генетический ландшафт опухоли, что может определить благоприятные результаты лечения и стимуляцию метастазирования.
Цель работы: изучение изменения генетического ландшафта опухоли молочной железы люминального В HER2-негативного подтипа под действием различных стандартных схем неоадъювантной химиотерапии для выявления предиктивных маркеров объективного ответа на применяемое лечение и прогностических маркеров возникновения гематогенного метастазирования.
Задачи:
1. Описать CNA-ландшафт опухоли молочной железы до лечения в зависимости от ответа на НХТ и основных клинико-морфологических параметров;
2. Идентифицировать CNA-маркеры чувствительности к отдельным схемам предоперационной химиотерапии опухоли молочной железы;
3. Оценить изменения CNA-генетического ландшафта опухоли молочной железы в процессе неоадъювантной химиотерапии в зависимости от ответа на предоперационное лечение и исхода для определения CNA-маркеров генетического ответа опухоли на схемы НХТ;
4. Оценить уровень экспрессии генов, находящихся в регионах локализации CNA- маркеров чувствительности к отдельным схемам предоперационной химиотерапии опухоли молочной железы;
5. Сравнить экспрессионный профиль опухоли молочной железы до и после проведения предоперационной химиотерапии в зависимости от клинического ответа на НХТ и статуса гематогенного метастазирования для выявления экспрессионных маркеров генетического ответа опухоли на различные схемы неоадъювантной химиотерапии;
6. Оценить изменения CNA-генетического ландшафта под действием различных химиопрепаратов на модели in vitro и определить статус выявленных CNA-маркеров чувствительности и генетического ответа опухоли при различных схемах предоперационного лечения.
