Список использованных сокращений 3
Введение 4
1 Обзор литературы 8
1.1 Невынашивание беременности у человека 8
1.2 Формирование бластоцисты 10
1.3 Цитотрофобластическая инвазия 11
1.4 Ремоделирование спиральных артерий 12
1.5 Генетические механизмы трофобластической инвазии 14
1.6 Метилирование ДНК 16
1.7 Методы определения метилирования ДНК 18
1.8 Секвенирование нового поколения 20
2 Материалы и методы 23
2.1 Материалы 23
2.2 Методы 23
2.2.1 Выделение ДНК из ворсин хориона 23
2.2.2 Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови 24
2.2.3 Бисульфитная конверсия ДНК 25
2.2.4 Получение библиотек 26
2.2.5 Чистка ПЦР продукта с помощью сефадекса 27
2.2.6 Секвенирование полученных библиотек и биоинформатическая
обработка 27
Список используемой литературы
... отсутсвует 3 раздел
Первый триместр беременности (с 1-й по 13-ю неделю) является самым важным этапом в развитии и выживании эмбриона. Естественная гибель плода, или же самопроизвольный аборт, составляет 15 процентов от числа клинических зафиксированных случаев беременности. По оценкам, у человека 30 процентов зачатий теряются до имплантации и еще 30 процентов после имплантации, но до пропущенного менструального цикла, то есть на третьей или четвертой неделе беременности. Такие явления часто называют ранние репродуктивные потери. Их частота оценивается в 15 процентов зачатий со значительными вариациями в зависимости от возраста. Так, у женщин в возрасте от 20 до 24 лет ранние репродуктивные потери составляют примерно 10 процентов, а у женщин в возрасте от 40 до 44 лет данный показатель достигает 51 процент. Невынашивание беременности после I триместра беременности с 13 до 22 неделю происходит реже и составляет около 4-х процентов исходов беременности (Macklon et al., 2002).
Причины самопроизвольных абортов очень разнообразны: нарушения в репродуктивной системе матери, малоподвижные сперматозоиды отца, дисфункции эндокринной и иммунной систем, инфекции, передающиеся половым путем и хромосомные аномалии (Homer, 2019).
Кроме того, в основе некоторых случаев невынашивания беременности на ранних сроках могут лежать эпигенетические нарушения. Это связано с ключевым значением эпигенетической регуляции экспрессии генов в различных типах клеток в развитии организма (Yin et al., 2015). Одним из механизмов такой регуляции является метилирование ДНК - добавление метильной группы к углероду 5' цитозина, присутствующего в динуклеотидах CpG (Nakao, 2001)
Ретротранспозон LINE-1 (long interspersed nuclear element 1) является одной из последовательностей, регулируемой с помощью эпигенетических механизмов. Экспрессия LINE-1 постоянно поддерживается на определенном 4
уровне, а изменения его активности могут оказывать влияние на развитие различных аномалий во время гаметогенеза (Васильев и др. 2015). Промотор LINE-1 гиперметилирован в зрелых сперматозоидах, тогда как в ооцитах он гипометилирован на стадии диплотены, а на стадии овуляции ооциты имеют средний уровень метилирования промотора LINE-1 (Smith et al., 2012). Предполагается, что во время гаметогенеза или эмбриогенеза увеличение количества геномных вставок LINE-1 может нарушать работу одного или нескольких генов, критических для раннего эмбрионального развития, ведущее в последующем к выкидышу. Вставки ретротранспозона также могут вызывать хромосомные перестройки и изменение локального эпигенетического ландшафта. Такие явления могут приводить к нарушениям нормального развития эмбриона (Saleh et al., 2019).
Не менее 50 процентов всех клинически распознаваемых самопроизвольных абортов имеют хромосомными аномалиями. У живорожденных детей данные аномалии встречаются изредка. (Hassold et al., 1980). Одной из таких хромосомных аномалий является анеуплоидия. Не меньше, чем 5 процентов всех зафиксированных беременностей являются трисомными или моносомными. Большинство из них заканчиваются внутриутробно, что делает анеуплоидию основной известной причиной выкидыша, но некоторые (например, трисомия 21) совместимы с живорождением, что делает анеуплоидию основной причиной врожденных дефектов и умственной отсталости (Hassold et al., 2007).
...
