Реферат 2
ВВЕДЕНИЕ 5
1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 7
1.1 Растения в медицине 7
1.2 Метод сверхкритической флюидной экстракции 10
1.3 Маркеры провоспалительной и противовоспалительной
активности экстрактов 13
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 22
2.1 Исследуемые экстракты 22
2.2 Анализ состава 23
2.3 Изучение антибактериальной активности образцов СКФ-
экстрактов хвойных растений 25
2.4 Выделение моноцитов 25
2.5 Оценка жизнеспособности клеток 28
2.6 МТТ-тест 29
2.7 Резазурин-тест 31
2.8 Иммуноферментный анализ 33
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 38
3.1 Анализ состава 38
3.2 Изучение антибактериальной активности образцов СКФ-
экстрактов хвойных растений 38
3.3 Оценка жизнеспособности экстрактов 38
3.4 Оценка уровня продукции цитокинов 38
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 39
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
Система мононуклеарных фагоцитов, включающая циркулирующие моноциты, резидентные макрофаги и дендритные клетки, играет ключевую роль в воспалении и защите от патогенов и представляет собой привлекательную терапевтическую мишень. В связи с этим актуальной является необходимость изучения возможностей иммунокорригирующей терапии.
Известно, что длительное употребление синтетических лекарственных средств часто вызывает многочисленные побочные эффекты, а иногда и резистентность [1]. Растения, обогащенные вторичными метаболитами различных классов, являются вероятными источниками агентов, мобилизующих иммунитет.
Существуют эффективные методы извлечения необходимых компонентов из растений: экстракция по Сокслету, перколяция, мацерация, экстракция с помощью ультразвука [2]. Сверхкритическая флюидная экстракция с CO2 имеет ряд преимуществ: высокая производительность (по сравнению с традиционной жидкостной экстракцией); отсутствие следов растворителя в конечном продукте; экологичность; возможность настройки растворяющей способности, ограничения: извлечение гидрофильных
соединений.
В данной работе исследован состав экстрактов, полученных методом сверхкритической флюидной экстракции (СФЭ) на основе хвойных растений Juniperuspseudosabina, Larix gmelinii, Taxus cuspidata, их биосовместимость и ответ клеток иммунной системы.
Задачи работы:
1. Литературный обзор
2. Оценка влияния СКФ-экстрактов на жизнеспособность клеток иммунной системы.
3. Выбор оптимальных концентраций экстрактов для дальнейших исследований.
4. Исследование иммунного ответа.
5. Обработка и анализ полученных результатов.
В теоретической части приведен литературный обзор в которой представлены результаты исследований экстрактов некоторых видов рода можжевельник, лиственница, тис.
В рамках данного исследования проведена оценка антибактериальной активности экстрактов. Все представленные на исследование образцы экстрактов проявили незначительную антибактериальную активность в отношении грамотрицательной микрофлоры (Escherichia coli) (р <0,05). В отношении грамположительной микрофлоры (Staphylococcus aureus) активности не выявлено (отсутствуют зоны подавления). Контрольный образец также не проявил антибактериальной активности.
Оценка жизнеспособности клеток в присутствии СКФ-экстрактов Juniperus pseudosabina, Taxus cuspidata, Larix gmelinii с концентрацией 50,00; 25,00; 5,00 мг/мл показала, что образцы оказывают незначительное негативное влияние на жизнеспособность клеток.
Результаты исследования влияния экстрактов на продукцию провоспалительных цитокинов показали, что экстракты оказывают донорспецифичное влияние на продукцию провоспалительных цитокинов, следует отметить, что экстракт лиственницы с концентрацией 25 мкг/мл не оказывает значительного повышения концентрации исследуемых цитокинов (TNF-a, IL-6, IL-8, IL-10) для всех доноров и может быть рекомендован для исследования противовоспалительной активности, исследования в условиях in vivo.
Экстракты Juniperus pseudosabina, Taxus cuspidata, Larix gmelinii, полученные методом СФЭ, могут быть рекомендованы для дальнейших исследований как перспективные источники биоактивных соединений.
