Список использованных сокращений 3
Введение 4
Глава I. Литературный обзор 7
1. Рак молочной железы 7
2. Канцерогенез рака молочной железы 8
3. Молекулярные подтипы рака молочной железы 10
4. Микроокружение опухоли 11
5. Опухолеассоциированные макрофаги 13
6. Скавенджинг-функцияопухолеассоциированныхмакрофагов 17
7. Взаимодействие опухолеассоциированных макрофагов и химиотерапии .. 20
Глава II. Материалы и методы 24
2.1 Материалы 24
2.2 Методы 24
Глава III. Результаты исследования и их обсуждение 28
Выводы 45
Приложение 46
Список литературы 51
Химиотерапия является одним из основных методов лечения больных РМЖ [1]. Использование неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) при комбинированном лечении рака молочной железы обеспечивает возможность выполнения органосохранных операций, установления прогноза на основе патологического ответа, а также предоставление «второй возможности» пациентам, не отвечающим на лечение [2].
Известно, что опухоль-ассоциированные макрофаги (ОАМ) играют ключевую роль в росте и развитии опухоли [3]. ОАМ являются одним из основных типов иммунных клеток в опухоли и представляют собой многофункциональный компонент, обладающий высокой пластичностью в ответ на множество сигналов опухолевого микроокружения [4]. Макрофаги, ассоциированные с опухолью, способны высвобождать проангиогенные и пролимфангиогенные факторы, матриксные металлопротеиназы, различные факторы роста и другие факторы, облегчающие васкуляризацию опухоли, гематогенную диссеминацию и метастазирование [5].
ОАМ контролируют опухолевое микроокружение посредством не только выделения цитокинов, факторов роста, компонентов внеклеточного матрикса, но и путем удаления этих факторов с помощью скавенджер -рецепторов, которые они экспрессируют [6]. Скавенджер-рецепторы (SR) распознают и удаляют «нежелательные» вещества с помощью эндоцитоза [7]. Эти рецепторы выполняют различные функции, в числе которых, удаление патогенных микроорганизмов, адгезия клеток, транспорт лигандов, презентация антигенов и другие. Изучение эндоцитоза лигандов скавенджер -рецепторов представляет научный интерес в контексте влияния клиренса данных факторов , как формирование опухолевого микроокружения.
Данные многочисленных исследований свидетельствуют о том, что макрофаги, ассоциированные с опухолью, способны аккумулироваться в опухолях после химиотерапии и играть важную роль в развитии химиотерапевтической устойчивости и рецидиве опухоли [8]. Важно также отметить, что химиотерапия может способствовать перераспределению и привлечению новых субпопуляций макрофагов в опухолевую ткань, что, в свою очередь, может осложнять клиническое течение заболевания. Сопутствующие механизмы химиорезистентности включают в себя: секрецию факторов роста, поддерживающих рост и развитие опухоли; ингибирование путей передачи сигналов гибели клеток в опухолевых клетках; активацию реваскуляризации опухоли, а также индуцированную макрофагами супрессию Т -клеточного иммунитета [9].
Однако точный механизм действия химиотерапевтических препаратов на ОАМ, а также механизмы химиорезистентности, развивающиеся в результате взаимодействия химиотерапии и макрофагов все еще требуют тщательного изучения.
Данная работа выполнялась на базе Лаборатории трансляционной клеточной и молекулярной биомедицины ТГУ, а также на базе НИИ онкологии Томского НИМЦ.
Целью данного исследования являлось изучение влияния химиотерапевтического препарата цисплатина на скавенджинг функцию опухолеассоциированных макрофагов. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1) Количественное определение поглощения EGF и acLDL в модельных ОАМ под влиянием цисплатина.
2) Иммунофлюоресцентный анализ внутриклеточной ко-локализации EGF со стабилином-1 в EEA1-позитивных эндосомах модельных ОАМ под влиянием цисплатина.
3) Анализ экспрессии стабилина-1 в модельных ОАМ под влиянием цисплатина методом ПЦР в режиме реального времени.
4) Валидация результатов полнотранскриптомного секвенирования при помощи ПЦР в режиме реального времени на основе обнаруженных генов, вовлеченных в везикулярный транспорт.
Объектами для исследования послужили: ОАМ, выделенные из периферической крови человека и дифференцированные in vitro в присутствии супернатантов, полученных от опухолевых клеток линии MCF-7 (аденокарцинома молочной железы).
1) На модельной системе ОАМ рака молочной железы было показано, что химиотерапевтический агент цисплатин снижает опосредованный стабилином-1эндоцитозклассического лиганда скавенджер-рецепторов acLDL и опухолеспецифического лиганда эпидермального фактора роста (EGF), являющегося важным регулятором опухолевой прогрессии.
2) Было обнаружено, что цисплатин значительно подавляет скавенджинг-функцию в модельных ОАМ по механизму, независящему от регуляции экспрессии гена скавенджер-рецептора стабилина-1.
3) Было показано, что цисплатин вызывает нарушение процессов эндоцитоза посредством подавления процессов мембранного и внутриклеточного транспорта в ОАМ. Цисплатин снижал экспрессию генов, вовлеченных в эндосомальный транспорт.
4) Было выдвинуто предположение, что нарушение процессов эндоцитоза важных регуляторов опухолевого микроокружения, может приводить к дисбалансу про- и противоопухолевых факторов и химиорезистентности.
