Аннотация 2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 7
ВВЕДЕНИЕ 9
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12
1.1 Лимфоциты, созревание и дифференцировка 12
1.2 CDS+T-лимфоциты и их роль в противоопухолевом иммунитете 19
1.3 Клеточные механизмы ускользания опухоли от иммунологического
надзора 22
1.4 Репрограммирование CDS+T-лимфоцитов - новый подход в терапии .. 27
1.5 Классификация рака лёгкого 31
1.6 Современные принципы и методы лечения немелкоклеточного рака
лёгкого 32
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 34
2.1 Культура клеток карциномы лёгкого Льюис 34
2.2 Выделение мононуклеарных клеток из костного мозга 34
2.3. Выделение мононуклеарных клеток из селезёнки 34
2.4 Магнитная сепарация CDS+Т-лимфоцитов 35
2.5 Репрограммирование CDS+Т-лимфоцитов 35
2.6 Определение цитотоксичности и апоптоза CDS+Т-лимфоцитов in vitro37
2.7 Статистическая обработка данных 37
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 39
3.1 Анализ цитотоксического эффекта CDS+T-лимфоцитов костного мозга и селезёнки мышей линии C57BL/6 при совместном культивировании с
клетками карциномы лёгкого Льюис 39
3.2 Исследование апоптоза CDS+Т-лимфоцитов в культуре клеток карциномы лёгкого Льюис 45
ВЫВОДЫ 49
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАНЬЕ ИСТОЧНИКОВ И ЛИТЕРАТУРЫ 50
По мере развития технологий основная причина смерти людей сместилась с инфекционных заболеваний на хронические, а рак стал одним из основных видов хронических заболеваний, представляющих серьезную опасность для здоровья населения [1]. Среди злокачественных опухолей заболеваемость раком легкого занимает второе место, а смертность от него - первое, и почти 85% случаев рака легкого приходится на немелкоклеточный рак легкого [2]. Поэтому поиск эффективного лечения немелкоклеточного рака легкого с каждым годом становится всё более актуальным. Современные методы лечения немелкоклеточного рака легкого включают в основном хирургию, химиотерапию, лучевую терапию, таргетную терапию и иммунотерапию. К сожалению, у большинства пациентов диагностируется прогрессирующий рак легкого, а 5-летняя относительная выживаемость пациентов 57%, при диагностировании метастатический рак легкого - 6% [3]. С появлением таргетной терапии прогноз пациентов с НМРЛ (NSCLC) значительно улучшился [4], но несмотря на результаты таргетной терапии, лекарственная устойчивость неизбежна [5].
За последние годы разработки в иммунотерапии позволяют бороться с опухолевыми клетками посредством собственной же иммунной системы, что впоследствии может привести к более высокой выживаемости на различных стадиях болезни, простоте использования и снижению себестоимости.
CDS+Т-лимфоциты играют ключевую роль в противоопухолевом иммунном ответе. Пациенты с раком легкого часто страдают дисфункцией Т- лимфоцитов и низким количеством Т-клеток. Истощение эффекторных Т- лимфоцитов во многом ограничивает эффективность терапии. Для повышения противоопухолевой активности Т-лимфоцитов используют различные подходы. Наиболее изученным на данный момент является механизм действия ингибиторов MEK1/2, основанный на изменении метаболизма Т-лимфоцитов путем модулирования метаболического пути MAPK/ERK1/2 [6]. Восстановление цитотоксической функции Т-лимфоцитов также связано с сигнальным путем PD-1/PD-L1. Показано, что ингибирование PD-1 восстанавливает эффекторную функцию Т-лимфоцитов и тем самым защищает Т-лимфоциты от иммунодепрессивного действия раковых клеток [7].
С указанных позиций несомненный теоретический и практический интерес представляет изучение терапевтической целесообразности использования ингибирования MEK для репрограммирования Т-лимфоцитов для использования в клеточной терапии карциномы лёгкого Льюис in vitro. При этом потенциальными мишенями для репрограммированных Т- лимфоцитов выступят стволовые опухолевые клетки. В целях защиты Т- лимфоцитов от иммуносупрессирующего действия опухоли дополнительно предлагается использовать ингибиторы иммунных контрольных точек и блокировать сигнальный путь PD-1/PD-L-1.
Это направление перспективно и положительные результаты позволят продвинутся в разработке трудно поддающихся лечению опухолей лёгких, в том числе и мелкоклеточного рака лёгкого.
Исходя из этого целью данной работы является оценка целесообразности использования репрограммированных Т -лимфоцитов костного мозга и селезёнки при терапии карциномы лёгкого Льюис in vitro.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Исследовать цитотоксический эффект наивных CD8+T-
лимфоцитов костного мозга и селезёнки мышей линии C57BL/6
2. Изучить роль репрограммирования на цитотоксический эффект CDS+T-лимфоцитов костного мозга и селезёнки мышей линии C57BL/6
3. Оценить апоптотическое воздействие клеток карциномы лёгкого Льюис на CD8+T-лимфоциты костного мозга и селезёнки мышей линии C57BL/6
Дипломная работа была выполнена в лаборатории регенеративной фармакологии НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга ТНИМЦ под руководством научного сотрудника, д.м.н. Наталии Николаевны Ермаковой и на кафедре физиологии человека и животных под руководством доцента, к.б.н. Елены Юрьевны Федоруцевой.
1) Цитотоксическая активность и апоптотическая устойчивость наивных CDS+T-лимфоцитов костного мозга выше, чем у наивных CDS+T- лимфоцитов селезёнки.
2) Репрограммированные CDS+Т-лимфоциты в культуре карциномы лёгкого Льюис демонстрируют значительно большую цитотоксическую активность, чем наивные и обученные CDS+Т-лимфоциты. Процедура истощения репрограммированных CDS+Т-лимфоцитов не оказывает влияние на апоптоз опухолевых клеток.
3) Репрограммированные CDS+Т-лимфоциты демонстрируют
большую устойчивость к цитотоксическому действию клеток карциномы лёгкого Льюис, чем наивные, обученные, обученные и истощённые, репрограммированные и истощённые CDS+Т-лимфоциты.
