Аннотация
Оглавление 5
Введение 7
Литературный обзор 10
1 Культуры клеток, тканей и органов растений 10
1.1 Каллусные культуры 10
1.2 Общая характеристика каллусных клеток 12
1.3 Морфология каллусных клеток 15
1.4 Методология получения каллусных культур 19
1.5 Влияние гормонального состава 22
1.6 Ботаническое описание Centaurea scabiosa L 27
1.6.1 Химический состав Centaurea scabiosa L 30
2 Материалы и методы 32
2.1 Объект исследования 32
2.2 Питательные среды 33
2.2.1 Среда Мурасиге-Скуга 34
2.3 Культивирование каллусной культуры Centaurea scabiosa L 36
2.3.1 Подготовка к субкультивированию 36
2.3.2 Пересадка каллусной культуры Centaurea scabiosa L 36
2.4 Изготовление временных давленных препаратов 36
2.5 Изготовление постоянных препаратов 38
Результаты 41
Выводы 46
Список использованных источников литературы
Культура растительных тканей является актуальной технологией для фундаментальной и практической науки. Во всех основных семействах высших растений поврежденная ткань восстанавливается с помощью недифференцированных каллусных клеток. Эти клетки можно культивировать in vitro и применять для целей биотехнологии. Клетка растения содержит всю генетическую информацию вида и может дать начало полноценному растению, поскольку она тотипотентна. Поэтому практически любая часть растения может быть использована для выращивания каллусных клеток. Таким образом, путем культивирования клеток и тканей растений можно получать целые растения или производить ценные растительные продукты. Поскольку все больше естественных ареалов растительных видов исчезает, методы культивирования in vitro клеток тканей растений могут сократить скорость исчезновения видов [49].
Преимуществами культуры тканей растений являются короткий цикл роста и высокая скорость воспроизводства; условия культивирования можно контролировать вручную; удобное управление, что способствует заводскому производству и автоматическому контролю. Благодаря этому культуры растительных клеток и тканей используются в производстве, включая быстрое размножение, селекцию саженцев, селекцию новых сортов, искусственные семена, получение ценных вторичных метаболитов и так далее [39].
Василёк шероховатый - многолетнее травянистое растение,
относящееся к роду сложноцветных. Распространен в основном в Европе, бывшем Советском Союзе (Кавказ и Средняя Азия, Сибирь и Дальний Восток), Северной Америке и др. [27]. Растение содержит сесквитерпеноид скабиозид, стероиды, каучук, полиацетиленовые органические соединения, кофейную кислоту, кумарины, дубильные вещества, флавоноиды, алкалоиды, моносахариды: D-глюкозу, арабинозу, рамнозу, фенолкарбоновые кислоты, хлорогеновую кислоту, прунизин. Благодаря такому богатому составу василек обладает целым спектром фармакологических свойств:
противовоспалительными, мочегонными, спазмолитическими, вяжущими, противосудорожными [3].
Василек был успешно введен в культуру in vitro на кафедре физиологии растений, биотехнологии и биоинформатики ТГУ На данный момент выделено несколько морфологически отличающихся линий культуры, в связи, с чем представляет интерес их гистологическое исследование. Процессы гистогенеза, предшествующие появлению точек роста в
недифференцированной ткани, начинаются с меристематического очага, в котором обнаруживаются биологические активные соединения, в частности, фенольные. Полученные данные о гистологическом строении культур могут быть использованы при изучении состава биологически активных соединений, а также способах повышения их содержания.
Цель: изучить цитотипы клеток каллуса двух линий Centaurea scabiosa L. на временных и постоянных гистологических препаратах.
Задачи:
1. Освоить методы культивирования каллусных культур C. scabiosa
L.
2. На основании выращенных культур изготовить постоянные и временные гистологические препараты.
3. Изучить и проанализировать препараты двух линий каллусной культуры Centaurea scabiosa L.
1. В результате проделанной работы были освоены методы культивирования каллусных культур C. scabiosa L.
2. Были освоены методы приготовления постоянных и временных препаратов из культур клеток и получены различные типы препаратов из каллусных культур C. scabiosa L.
3. Были проанализированы постоянные и временные препараты двух линий каллусной культуры Centaurea scabiosa L. Выявлены 2 типа клеток - меристемоподобные и паренхимоподобные (3 подтипа) в каждой линии, значимо отличающиеся по значениям ЯЦО. Также обнаружено значимое отличие клеточной линии 1 и 2 по значениям ЯЦО у клеток подтипа П1.
