БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ КРЫС ПРИ КОРРЕКЦИИ ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА С ПОМОЩЬЮ ИМПЛАНТАЦИИ БИОИНЖЕНЕРНЫХ КОНСТРУКЦИЙ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ 3
ВВЕДЕНИЕ 4
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Токсические поражения печени. Токсический гепатит 7
1.2 Четырёххлористый углерод и его токсическое воздействие на печень и систему
крови 11
1.3 Общая характеристика стволовых клеток и их применение 15
1.4 Общая характеристика биоматериалов 17
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 20
2.1 Характеристика тест-объекта 20
2.2 Моделирование токсического гепатита 21
2.3 Характеристика матриксов из полимолочной кислоты 21
2.4 Выделение ядросодержащих клеток костного мозга и определение общего
количества миелокариоцитов 23
2.5 Получение культуры мезенхимальных стволовых клеток 23
2.6 Культивирование мезенхимальных стволовых клеток на трехмерном полимерном
матриксе 24
2.7 Проведение операций по имплантации биоинженерного матрикса 24
2.8 Биохимический анализ крови 24
2.8.1 Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови 25
2.8.2 Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови 25
2.8.3 Определение концентрации общего билирубина в сыворотке крови 26
2.8.5 Определение концентрации прямого билирубина в сыворотке крови 26
2.8.5 Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови 26
2.8.6 Определение концентрации молочной кислоты в сыворотке крови 27
2.9 Статистическая обработка результатов 27
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 28
ВЫВОДЫ 34
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 35
Купить

В производственных процессах используется много химических веществ, биологическое действие которых чрезвычайно разнообразно. В группу промышленных ядов относят большое число химических веществ и их соединений, используемых в производстве: кислоты, газы, углеводороды, фенолы, спирты и гликоли, эфиры, кетоны, альдегиды, цианиды и нитросоединения и др. Данные вещества вызывают отравления вследствие воздействия промышленных ядов на предприятии, в лабораториях при авариях или при грубом нарушении техники безопасности при работе с вредными веществами (Седов С.К. и соавт., 2009).
Продукты химического производства также широко распространены в быту, что влечёт за собой появление тяжелых и даже смертельных отравлений при неправильном или небрежном отношении с ними, вызывает токсические поражения многих органов. К веществам, имеющим широкое применение, следует также отнести лекарственные средства (особенно антибиотики), которые, не являясь естественными для организма соединениями, при некорректном использовании могут нанести организму существенный вред (Xiaoyan Lu et al., 2014).
В связи с антропогенной деятельностью токсические агенты всё чаще попадают в продукты питания, разрабатываются новые средства бытового назначения; стоит также отметить усилившуюся лекарственную нагрузку. Главным объектом токсического воздействия является печень, потому что она функционально расположена на границе абсорбции и системной циркуляции веществ и ответственна за их метаболизм и элиминацию. Альтернативное действие токсинов на микросомальную систему печени с образованием свободных радикалов лежит в основе патогенеза токсического поражения печени (токсического гепатита) и приводит к выраженным функциональным и структурным изменениям гепатоцитов (Семёнов Д.Е. и соавт., 2012).
В связи с большой распространённостью токсического гепатита представляется целесообразным поиск наиболее эффективных методов его лечения. Одним из методов является применение различных лекарств: растительных экстрактов (Poojari R. et al., 2009), бета-адреноблокаторов для предотвращения внутренних кровотечений и других осложнений (Hamdy N., El-Demerdash E., 2012), препаратов на основе естественных антиоксидантов, которые могут противодействовать пагубному влиянию токсических агентов, нейтрализуя свободные радикалы или корректируя воспалительную реакцию (Семёнов Д.Е. и соавт., 2012).
Существуют также и физиотерапевтические методы лечения. Выраженное корригирующее действие оказывает наложение сапропеля на область проекции печени в сочетании с воздействием магнитного поля (Глушакова Е.С., 2005).
В настоящее время активно развивается регенеративная медицина, которая занимается восстановлением повреждённых тканей и органов при помощи стволовых клеток. Достигнуты большие успехи в области лечения дефектов кожи, хряща, кости, роговицы и многих других тканей и органов. Использование стволовых клеток предполагает либо их трансплантацию путём прямой инъекции, либо выращивание на специальных биоинженерных каркасах (скеффолдах) (Кокорев О.В. и соавт., 2012). Последнее неразрывно связано с созданием новых нетоксичных материалов, способных безопасно деградировать в организме и не вызывать аллергических реакций и отторжения (Больбасов Е.Н. и соавт., 2013).
Для клинической практики большие перспективы открывает использование эмбриональных стволовых клеток, однако их широкому использованию препятствуют этические моменты и проблемы гистосовместимости. Поэтому наибольший интерес сегодня представляют гемопоэтические и мезенхимальные стволовые клетки (МСК) (Пальцев М.А., 2009). Последние привлекают всё больше внимания благодаря своей мультипотентности, пластичности, простоте получения и использования, а также способности прикрепляться к твёрдой поверхности и расти in vitro (Попов Б.В., 2010).
Последнее свойство МСК распластываться на твёрдой поверхности с успехом применяется для культивирования этих клеток. Культивирование можно производить на специальных материалах - матриксах, созданных из органических биодеградируемых веществ - полилактидов, гиалуроновой кислоты и т.д. Новым направлением является создание трёхмерных структур, имеющих высокое отношение к площади к объёму, что имитирует межклеточное волокнистое вещество различных тканей (Хлусов И.А. и соавт., 2013).
Клеточные технологии достаточно широко используются при заболеваниях печени; как правило, они представляют собой пересадку гепатоцитов (вплоть до целых сегментов) - как зрелых клеток, так и стволовых (Сергеева А.С. и соавт., 2005). Также получены результаты при внутрибрюшинном введении гемопоэтических стволовых клеток при хронических гепатитах (Киясов А.П. и соавт., 2008). На сегодняшний день представляет интерес коррекция как токсических гепатитов, так и других повреждений печени с помощью стволовых клеток, культивируемых на биодеградирующих конструкциях; преимуществом данного метода является локальное приложение клеточной культуры, что может оказаться более эффективным по сравнению с введением клеток в кровоток, где они разносятся по всему организму.
Цель работы: оценить биохимические показатели крови крыс при коррекции токсического гепатита с помощью биоинженерных конструкций, несущих клеточный материал.
Задачи:
1. Оценить биохимические показатели крови у крыс в норме и в условиях токсического гепатита в разные сроки.
2. Оценить биохимические показатели крови у крыс с коррекцией токсического гепатита в разные сроки.
Работа выполнена на базе экспериментальной лаборатории биомедицинских технологий Филиала Томского научно-исследовательского института курортологии и физиотерапии Федерального государственного бюджетного учреждения «Сибирский федеральный научно-клинический центр федерального медико-биологического агентства», под руководством научного сотрудника Гостюхиной А.А.
Купить