ВВЕДЕНИЕ 4
1 Литературный обзор 7
1.1 Морфологические характеристики плоскоклеточного рака 7
1.2 Внутриклеточные структуры плоскоклеточных карцином 9
1.3 Эпителиально-мезенхимальный переход 13
1.3.1 Snail 16
1.3 Vimentin 17
2 Материалы и методы 20
2.1 Материалы исследования 20
2.2 Методы исследования 20
2.2.1 Сбор и анализ материалов 20
2.2.2 Анализ морфологической гетерогенности плоскоклеточных карцином 21
2.2.3 Иммунофлюорисцентный анализ 21
2.2.4 Статистическая обработка 22
3 Результаты и обсуждения 23
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Опухоли головы и шеи (ОГШ) находятся на 6 месте по распространенности среди всех злокачественных новообразований человека (Jemal A. et al., 2011).
Основным морфологическим вариантом опухолей головы и шеи является плоскоклеточная карцинома. Так, частота встречаемости данного варианта достигает 44% при опухолях полости рта, 31% - при раке гортани, 25% - при карциномах различных отделов полости рта (Пачес А. И., 2000; Любаев В. Л. и др., 2006; Какурина Г. В. 2014). Несмотря на визуальную локализацию ОГШ, у 2/3 пациентов опухоли обнаруживаются на поздней стадии, в связи с чем в 80% случаев в регионарных лимфатических узлах шеи уже обнаруживаются метастазы (Lutzky V. P. et al., 2008; Friedl P., 2010). Многочисленные клинические данные свидетельствуют о том, что именно отдаленное и регионарное метастазирование является главной причиной высокой летальности и низкой общей выживаемости онкологических пациентов (Melle C. et al., 2003; Ferris R. L. et al., 2005; Любаев В. Л., и др., 2006; Demircan K. et al., 2009).
Известно, что чувствительность опухолевых клеток на внешние воздействия, в том числе химио- и лучевую терапию, значительно варьируют - как в пределах выборки, так и в пределах одной локализации, в связи с чем результаты лечения опухолей остаются неудовлетворительными. В настоящее время считается, что главным фактором неблагоприятного течения онкологических заболеваний является выраженная гетерогенность опухолевых клеток и наличие клонов с высоким метастатическим потенциалом (Gendena E. M. et al., 2003; Garavello W. et al., 2006; Какурина Г. В., 2014).
Опухолевой гетерогенностью называют совокупность показателей, демонстрирующих меж- и/или внутриопухолевые различия. К ним относят фенотипические, генетические, эпигенетические и другие характеристики, присущие отдельным клеткам или популяциям клеток (Michor F., 2010; Visvader J. E., 2011; Геращенко Т. С., 2013). Учет индивидуальной опухолевой гетерогенности в перспективе позволит врачам более точно выбирать тактику лечения пациентов и оценивать риски неблагоприятных исходов. В связи с этим, первой задачей данной работы является изучение значимости идентификации предложенных клеточных структур плоскоклеточного рака для определения течения и исходов заболевания, а также показателей выживаемости.
Второй задачей данного исследования было оценить метастатический потенциал выявленных клеточных структур на основе экспрессии клетками белков эпителиально-мезенхимального перехода.
Метастазирование является многоступенчатым процессом, включающим отделение опухолевых клеток от первичной опухоли, инвазию во внеклеточный матрикс, интравазацию в кровеносную и/или лимфатическую системы, экстравазацию в органы- мишени и формирование регионарных и/или отдаленных метастатических очагов (Makrilla N. et al. , 2009; Feng Y-M. , 2011).
Для успешного осуществления этапов инвазии и интравазации опухолевым клеткам необходимо изменить свой гистогенетический тип с эпителиального на мезенхимальный. При этом запускается механизм, известный как эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) - сложный многоступенчатый процесс, характеризующийся потерей эпителием его фенотипических особенностей и приобретение им свойств мезенхимальных клеток (Nieto M. A. et al. 2002; Nieto M. A., 2002; Radisky D. C., 2005; Василенко И. В. и др., 2009). В процессе ЭМП происходит экспрессия белков семейства SNAIL, в том числе Snail - транскрипционного белка- супрессора, подавляющего экспрессию эпителиальных маркеров и стимулирующего эпителиально-мезенхимальный переход клеток. Который характеризуется приобретением клетками способности к направленному движению по подложке и к инвазивному поведению, что было обнаружено при исследовании инвазии клеток через гель, состоящий из коллагена IV типа (Cano A. et al. , 2000).
Виментин - белок промежуточных филаментов, который экспрессируется преимущественно в мезенхимальных клетках соединительной ткани. В последнее время, виментин рассматривается как маркер ЭМП, наличие экспрессии которого на опухолевых клетках отражает финальную стадию опухолевой дедифференцировки, что связано с высоким уровнем инвазии.
Цель работы: определить содержание белков эпителиально-мезенхимального перехода (Snai1, vimentin) в клеточных структурах плоскоклеточных карцином головы и шеи разной степени дифференцировки, а также оценить связь клеточных структур с показателями выживаемости.
Задачи исследования:
1. Изучить ассоциацию морфологических клеточных структур с клинико¬
морфологическими данными.
3. Оценить экспрессию белков эпителиально-мезенхимального перехода (Snail
1, vimentin) в клеточных структурах плоскоклеточных карцином.
Работа выполнена на базе НИИ онкологии Томского НИМЦ в лаборатории онковирусологии под руководством старшего научного сотрудника, кандидата медицинских наук Бычкова Вячеслава Алексеевича.
1. Структуры IV типа в среднем в 5 раз чаще встречаются у пациентов с поздней стадией новообразования (T3-4), чем у пациентов с ранней стадией T1-2(38,6% vs 7,1%, соответственно). Структуры V типа, в среднем в 2 раза чаще встречаются в карциномах у пациентов с метастазами в лимфоузлах по сравнению с пациентами с интактными лимфоузлами (32.7% vs 67.6%, соответственно).
2. Выявленно резкое снижение общей выживаемости пациентов в случае диссеминации метастазов опухоли в лимфоузлы, а также при наличии в первичной опухоли низкодифференцированных структур (IV тип) или одиночно расположенных опухолевых клеток (V тип).
3. По мере снижения дифференцировки в ряду клеточных структур от I типа к IV наблюдается увеличение количества Snail- и Vimentin-позитивных клеток, что свидетельствует об активации эпителиально-мезенхимального перехода по мере дедифференцировки клеток.
