ВВЕДЕНИЕ 4
1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 6
1.1. Значение клеток моноцитарно - макрофагальной линии в организме человека 6
1.2 Функциональная гетерогенность популяций моноцитов 8
1.3 Функциональный профиль воспалительных макрофагов 11
1.3.1 Макрофаги классически активированные М1 12
1.3.2 Макрофаги альтернативно активированные М2 13
1.4 Особенности моноцитов и макрофагов при онкологических
заболеваниях 15
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 19
2.1 Материалы исследования 19
2.2 Методы исследования 20
2.2.1 Проточная флуоресцентная сортировка моноцитов крови 20
2.2.2 Выделение тотальной РНК 22
2.2.3 Подготовка библиотек секвенирования 24
2.2.4 Массовое параллельное секвенирование 31
2.2.5 Биоинформатическая обработка данных массового параллельного
секвенирования 32
2.2.6 Магнитная сепарация CD14+ моноцитов 33
2.2.7 Обратная транскрипция 34
2.2.8 Количественная ПЦР в режиме реального времени 35
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 36
3.1 Транскриптомный профиль основных субпопуляций моноцитов 36
3.2 Особенности молекулярных путей классической субпопуляции
моноцитов при РМЖ 38
3.3 Выявление панели генов, ассоциированных с М1, либо М2 поляризацией циркулирующих моноцитов при РМЖ 40
ВЫВОДЫ 42
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 43
ПРИЛОЖЕНИЕ 49
Рак молочной железы (РМЖ) - это злокачественная опухоль, возникающая из ткани молочной железы, характеризующаяся довольно агрессивным ростом и способностью к активному метастазированию. РМЖ является одним из самых распространенных злокачественных процессов у женщин [1].
В настоящее время особый интерес вызывает изучение моноцитарно - макрофагальной системы при онкологических заболеваниях, РМЖ в частности. При этом опухолеассоциированные макрофаги (ОАМ) являются основными клетками врожденного иммунитета, которые регулируют взаимоотношения инфильтрирующих иммунокомпетентных клеток с опухолевыми, поддерживая пролиферацию опухолевых клеток [2], ангиогенез, инвазию опухолевых клеток, за счет которой происходит метастазирование [3]. Значительная часть ОАМ происходит из циркулирующих моноцитов. Моноциты, составляющие до 10 % от циркулирующих лейкоцитов крови, фенотипически и функционально неоднородны. Моноциты привлекаются в опухоль и под влиянием внутриопухолевых факторов, программируются в клетки, либо способствуют опухолевой прогрессии, либо препятствуют ей [4] Дифференцировка моноцитов в определенный тип клеток с противоопухолевой или иммуносупрессирующей активностью является критическим событием для клинического течения заболевания и возможности эффективной терапии с участием иммунной системы [1].
Исследование свойств моноцитов крови при онкологических заболеваниях поможет установить их связь с ОАМ, роль в патогенезе опухолевого заболевания и выявить мишени для новых иммунотерапевтических подходов.
Цель исследования: изучение транскриптомоного профиля моноцитов периферической крови у пациенток с РМЖ.
Задачи исследования:
1. Провести сравнительный анализ транскриптома основных субпопуляций циркулирующих моноцитов у пациенток с РМЖ и здоровых женщин.
2. Выявить активизированные и подавленные молекулярные пути, характерные для моноцитов при РМЖ.
3. Составить панель маркеров, характеризующих поляризацию моноцитов, в направлении противо - либо проопухолевой активности.
4. Провести валидацию полученной панели на независимой группе пациенток с РМЖ и здоровых женщин.
Работа проводилась в НИИ онкологии Томского НИМЦ, лаборатории молекулярной онкологии и иммунологии. Научный руководитель младший научный сотрудник лаборатории биологии опухолевой прогрессии НИИ онкологии Томского НИМЦ РАН Патышева Марина Ринатовна
1. Рак молочной железы оказывает влияние на транскриптомные особенности циркулирующих моноцитов, что находит выражение в изменении транскрипционного профиля клеток классической субпопуляции.
2. Общий профиль активации и угнетения молекулярных путей в моноцитах классической субпопуляции при раке молочной железы характерен для дифференцировки в макрофаги с проопухолевой активностью.
3. Дифференциально экспрессированные гены у больных раком молочной железы по сравнению со здоровыми донорами указывает на наличие функциональной предрасположенности моноцитов периферической крови к дифференцировке в проопухолевые макрофаги. При этом классическая субпопуляция является наиболее вероятным кандидатом для пополнения пула опухолеассоциированных макрофагов при РМЖ.
4. В моноцитах классической субпопуляции пациенток с раком молочной железы наблюдалось повышение экспрессии TNFSF8, GBP1, SIGLEC11 и IL1RAP, в большей мере характерных для М2 макрофагов. Экспрессия генов TGFb3, IL31RA, CD200R1, CRB2 в моноцитах классической субпопуляции у больных РМЖ была ниже по сравнению с группой контроля. Опираясь на литературные данные, полученная панель генов не позволяет однозначно говорить о функциональной поляризации в направлении проопухолевой дифференцировки макрофагов
