ВВЕДЕНИЕ 2
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 5
1.1. Современные представления о сахарном диабете 5
1.2. Методы лечения сахарного диабета 11
1.3. Общая характеристика стволовых клеток и их применение 18
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 29
2.1. Характеристика тест-объекта 29
2.2. Выделение ядросодержащих клеток костного мозга 31
2.3. Получение культуры клеток костного 31
2.4. Измерение уровня глюкозы в крови крыс 32
2.5. Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови .. 33
2.6. Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови 34
2.7. Определение концентрации общего холестерина в сыворотке крови 34
2.8. Определение концентрации триглицеридов в сыворотке крови 35
2.9. Определение концентрации глюкозы в сыворотке крови 35
2.10. Измерение уровня инсулина в сыворотке крови крыс 36
2.11. Гистологический анализ поджелудочной железы 37
2.12. Статистическая обработка данных 37
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 39
3.1. Биохимические показатели и уровень инсулина в сыворотке крови крыс
при моделировании аллоксан-индуцированного сахарного диабета и его коррекции клетками костного мозга 39
3.2. Структура поджелудочной железы крыс при аллоксан-индуцированном
сахарном диабете и с коррекции клетками костного мозга 45
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 47
ВЫВОДЫ 48
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 49
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 50
Заболеваемость сахарным диабетом на земном шаре удваивается каждые 10-15 лет, приобретая характер инфекционной эпидемии. К концу 2015 года численность больных составляла 415 млн человек (Шестакова М.В. и соавт, 2017).
По данным Всемирной организации здравоохранения, в настоящее время в мире насчитывается 285 млн больных диабетом, а к 2025 году их количество составит 380 млн и 435 млн в 2030 году. При этом реальные темпы прироста заболеваемости значительно опережают прогнозы статистиков (Дедов И.И., 2010).
Большая социальная значимость данного заболевания состоит в том, что в связи с сосудистыми осложнениями микроангиопатии и макроангиопатии (поражение мелких и крупных сосудов), диабетической нефропатии и нейропатии, синдромом диабетической стопы, он приводит к ранней инвалидизации и летальности (Можейко Л.А., 2013; Macedo C.C. et ol., 2005). Осложнениями сахарного диабета являются ишемическая болезнь сердца, связанная с атеросклерозом артерий. Постоянное увеличение расходов, связанных с этим заболеванием, является тяжелым бременем для здравоохранения (Дедов И.И., 2011; Сунцов Ю.И. и соавт., 2017).
При лечении несложных форм инсулиннезависимого сахарного диабета часто может быть эффективно соблюдение диеты с ограничением жиров и углеводов и режим физической нагрузки (Петеркова В. А., 2017). При неэффективном таком лечении назначают перевальные сахаропонижающие средства.
Для лечения сахарного диабета I типа используется инсулинотерапия, что чревато развитием инсулинорезистенции, проявлением аллергических реакций и липодистрофией. Данный метод не в состоянии предотвратить прогрессирование осложнений сахарного диабета (Сунцов Ю.И., 2005). Трансплантация поджелудочной железы позволяет стойко стабилизировать уровень глюкозы у больных инсулинзависимым диабетом, но особая проблема пересадки заключается в отторжение организмом, пожизненным приемом пациента иммуносу- прессантов (Соколова И.Б., 2009).
Последние 30 лет ведется терапия данной патологии с помощью пересадки донорских островковых клеток поджелудочной железы. Данный метод лечения основан на возмещении количества 0-клеток у реципиента. Минусы данного метода - это нерешенность эстетических, юридических проблем использования человеческого фетального материала, а также опасность переноса инфекций от животного к человеку ксеногенного донорского материала (Прохоров А.В., 2005).
В связи с этим, очевидно, что необходимы разработки и дальнейшие мероприятия, направленные на снижение распространенности сахарного диабета и его осложнений.
Одним из актуальных направлений лечения разных заболеваний, в том числе сахарного диабета, как I и II типов, является использование клеточной терапии, которая предполагает использование стволовых клеток, в том числе, клеток костного мозга (Соколова И.Б., 2009; Эльбекьян К.С., 2011). К настоящему времени экспериментально доказаны иммуномодулирующие свойства мезенхимальных стволовых клеток, что делает его целесообразным при лечении аутоимунных заболеваний. Области применения клеточной терапии являются клеточная и тканевая инженерия, заместительная терапия, косметологические процедуры (Калинина Н.И., 2011; Махмат К. и соавт., 2017).
В последние десятилетия появились доказательства того, что физиологическое обновление и регенерация тканей в течение всей жизни животного и человека происходят благодаря стволовым клеткам. Важнейшей популяцией стволовых клеток взрослого организма являются мезенхимальные стволовые клетки (МСК) (Зафранская М.М., 2017). Впервые эти клетки были обнаружены и выделены из стромы костного мозга. Считалось, что МСК костного мозга служат источником для обновления и восстановления таких соединительных тканей, как костная, хрящевая и жировая. В настоящий момент аналоги МСК костного мозга обнаружены и во всех других тканях (Калинина Н.И. и соавт., 2011).
Исходя из вышесказанного, целью данной работы являлось оценить влияние клеток костного мозга при моделировании аллоксан-индуцированного сахарного диабета у лабораторных крыс.
В соответствии с поставленной целью, решались следующие задачи:
1) Изучить динамику уровня глюкозы в крови крыс в условиях модели аллоксанового диабета и после коррекции клетками костного мозга;
2) Определить активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, содержание общего холестерина, триглицеридов в сыворотке крови крыс после моделирования аллоксанового диабета и его коррекции клетками костного мозга;
3) Исследовать уровень инсулина в сыворотке крови крыс после моделирования аллоксанового диабета и его коррекции клетками костного мозга.
4) Провести гистологический анализ поджелудочной железы крыс после моделирования аллоксанового диабета и его коррекции клетками костного мозга.
Работа была выполнена на базе экспериментальной лаборатории биомедицинских технологий Филиала Томского научно-исследовательского института курортологии и физиотерапии Федерального государственного бюджетного учреждения «Сибирский федеральный научно-клинический центр федерального медико-биологического агентства» (руководитель лаборатории кандидат медицинских наук К. В. Зайцев) под руководством кандидата биологических наук А. А. Гостюхиной, и кандидата биологических наук Е. Ю. Федоруцевой.
Заключение содержит результаты интеллектуальной деятельности в научной сфере, было изъято из выпускной квалификационной работы в соответствии с пунктом 3.2. «Регламента размещения текстов выпускных квалификационных работ в электронной библиотеке Научной библиотеки НИ ТГУ» (Приказ №413/ОД от 24.05.2016 г.).
