ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Использование культур микроорганизмов и их продуктов метаболизма
для лечения микробных инфекций 7
1.2. Характеристика пробиотиков, обладающих антифунгальными свойствами 17
1.3. Виды Bacillus в качестве потенциальных кандидатов пробиотиков для
лечения грибковых инфекций 27
1.4. Антимикотики природного происхождения 29
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 31
2.1. Объекты исследования 31
2.2. Приготовление питательных сред для культивирования бактерий... .31
2.3. Методы исследования 33
2.3.1. Метод последовательных разведений суспензии бактерий 33
2.3.2. Посев суспензий на агаризованную питательную среду Сабуро.. ..34
2.3.3. Подсчет выросших колоний бактерий на чашках Петри 34
2.3.4. Приготовление сурфактанта 35
2.3.5. Обработка волос инфицированных микроспорией биосурфактантом
(в разведении 1:10, 1:100, 1:1000) 35
2.3.6. Оценка бактериальной активности биосурфактанта, полученного из
Bacillus altitudinis, на грибковую культуру Microsporum spp 36
ГЛАВА 3: РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 37
3.1. Результат последовательных разведений суспензии бактерий 37
3.2. Результат посева суспензий бактерий на агаризованную питательную
среду Сабуро 38
3.3. Результат определения количества колоний бактерий в исследуемых
разведениях 1:10, 1:100, 1:1000 39
3.4. Результаты приготовления биосурфактанта 41
3.5. Результаты обработки биосурфактантом (1:10, 1:100, 1:1000) волос,
инфицированных микроспорией 42
3.6. Результаты оценки бактериальной активности биосурфактанта,
полученного из Bacillus altitudinis, на грибковую культуру Microsporum spp 45
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 46
ВЫВОДЫ 47
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 48
Актуальность. Микроспория — инфекционное заболевание, протекающее с поражением кожи и ее придатков, вызываемое патогенными грибами рода Microsporum. В настоящее время
микроспория является самой распространенной инфекцией среди
дерматофитий и занимает второе место после микозов стоп. Заболеваемость микроспорией остается на относительно высоком уровне, что составляет в среднем 40,5 случая на 100 тыс. населения. Этому способствует ухудшение социально-экономической ситуации, экологической обстановки, рост числа бродячих животных и недостаточная работа ветеринарной и коммунальных служб города по их санации. В последние годы стали регистрироваться больные с хроническим течением заболевания на фоне тяжелых системных поражений (красная волчанка, гломерулонефрит, хронического кожно-слизистый кандидоз), а также иммунодефицитов и интоксикаций. Проблема терапии микроспории вызвана высокой устойчивостью возбудителей к большинству существующих антимикотических препаратов. Организация борьбы с микроспорией не только задача врача дерматовенеролога, но и проблема социальной значимости.
M. canis вызывает микроспорию у 90-97 % больных на территории России. M. canis, являясь зоофильным грибом, вызывает дерматофитозы у кошек, собак, обезьян, реже — у других животных. Основной источник заболевания — кошки (обычно котята), реже собаки. Чаще страдают дети до 15 лет. Взрослые же болеют редко, в основном — молодые женщины. Редкость заболевания микроспорией взрослых объясняется наличием в волосах взрослых людей фунгистатических органических кислот (в частности, ундициленовой кислоты). Заражение происходит при непосредственном контакте с больным животным или, предметами, инфицированными шерстью или чешуйками. Возникновение в ряде районов и городов очагов микроспории кошек и собак ведет к формированию эпидемических очагов среди детей. Возможна передача зоонозной микроспории и от заболевших членов семьи (5,5 %), что встречается достаточно редко. Следует подчеркнуть, что в подобных ситуациях наибольшей опасности заражения подвергаются женщины и дети младшего возраста, включая новорожденных. Помимо непосредственного переноса возбудителя от больного человека здоровому, возможно заражение микроспорией через различные предметы обихода. Заболеваемость зоонозной микроспорией не одинакова в течение года. Сезонные колебания связаны с приплодом у кошек, а также более частым контактом детей с животными в летний период. Подъем заболеваемости начинается в конце лета, когда в августе-сентябре дети возвращаются в город и осматриваются родителями и медработниками при поступлении их в школу и детские сады. Пик заболеваемости приходится на октябрь-ноябрь, а затем происходит ее снижение до минимума в марте-апреле.
Цель исследования. Выявить способность сурфактанта Bacillus altitudinis оказывать фунгистатический эффект на развитие грибковой инфекции Microsporum spp.
Задачи исследования:
1. Получить методом разведения градиент концентрации бактерий Bacillus altitudinis для исследования оптимальной концентрации, пригодной для эффективного лечения (1:10, 1:100, 1:1000).
2. Приготовить биосурфактанты из культуры бактерий в разведении 1:10, 1:100, 1:1000.
3. Провести инкубацию пораженных микроспорией волос в исследуемых концентрациях сурфактанта Bacillus altitudinis в течение 3¬х суток воздействия.
4. Проанализировать результаты структурных изменений инфицированных волос после воздействия препаратом сурфактантом - Bacillus altitudinis.
Биосурфактанты - это биологически синтезированная гетерогенная группа поверхностно-активных молекул, состоящая из гидрофильных и гидрофобных фрагментов.
Амфифильная природа биосурфактантов существенно способствует их способности снижать поверхностное и межфазное натяжение на стыке гетерогенной системы, отличающейся своей полярностью гидрофобных фрагментов и водородной связью. В последние годы микробные поверхностно-активные вещества привлекают большое внимание благодаря своим уникальным свойствам.
Такие свойства, как низкая токсичность, более высокая биодеградируемость, исключительная поверхностная активность в суровых условиях окружающей среды, низкое пенообразование, высокая эффективность и регенеративные свойства.
Таким образом, биосурфактанты являются отличными кандидатами для разработки новых профилактических и терапевтических препаратов, способных дополнить или заменить обычные антибиотики. Полученные биосурфактанты могут использоваться для длительного применения против различных этиологических антибиотикоустойчивых патогенов для профилактики/лечения инфекционных заболеваний в качестве альтернативы антибиотикам.
В нашем исследовании впервые сообщается о способности продуцировать биосурфактант новой ризосферной бактерии Bacillus altitudinis, обладающем фунгистатическим эффектом на грибковую культуру Microsporum spp..
Выводы
1. Фунгистатический эффект выявлен в суспензиях с количеством бактерий 1740 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) (разведение 1:10) и 920 КОЕ/мл (разведение 1:100). Разведение 1:1000 с количеством 40 КОЕ/мл не проявило антимикотического воздействия.
2. Биосурфактант в концентрации 1:10 проявил больший эффект на состояние инфицированных волос после 3-х суточной инкубации в растворе по сравнению с биосурфактантом в разведении 1:100. Биосурфактант, полученный из бактерии 1:1000, не оказал антимикотического воздействия.
3. Доказаны фунгистатические свойства биосурфактанта, полученного из Bacillus altitudinis, на культуру Microsporum spp.
