Список сокращений и условных обозначений 3
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 7
1.1. Актуальность 7
1.2. Распространённость дерматофитии, в частности заболевания
трихофитии и ее возбудителей. 9
1.3. Методы лабораторной диагностики, применяемые при а
диагностике дерматомикозов. 13
1.4. Рекомендованные методы лабораторной диагностики дерматофитозов животных, утвержденый главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18 марта 2008 г. 17
1.5. Сравнительная оценка положительных и отрицательных сторон
методов лабораторной диагностики дерматофитов. 20
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 31
2.1. Методики проведения методов исследования дерматофитов 32
2.1.1. Микроскопия патологического материала и мацерация 32
2.1.2. Культивирование на питательной среде 33
2.1.3. Полимеразная цепная реакция 36
2.1.4. Статистический анализ 43
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 46
1.1. Анализ литературы по методам исследования трихофитии. 46
1.2. Результаты лабораторной диагностики грибов: микроскопия и
культивировании на питательных средах, а также методом ПЦР на основе электрофореза. 51
1.3. Статистический анализ полученных результатов. 59
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 65
ВЫВОДЫ 67
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 68
В настоящее время грибковые заболевания имеют достаточно высокое распространение. Они наряду с вирусными и бактериальными агентами занимают не последнее место в эпидемиологической обстановке во всем мире. На сегодняшний день известны более 180 видов болезнетворных грибов и из них около 40 вызывающие дерматомикозы. Грибковые заболевания с трудом поддаются терапии, а долгое их пребывание в теле носителя может привести к необратимым последствиям, осложнениям в виде хронической форме течения заболевания, а также дополнительного инфицирования патогенами. Поэтому на сегодняшний день вопрос о безошибочном и быстром выявлении грибковых заболеваний является актуальным, так как это один из основополагающих факторов в избавлении от чужеродного агента. На данный момент самыми распространёнными диагностическими методами исследования при дерматомикозах являются микроскопия патологического материала и культуральный метод. Тем не менее эти методы можно отнести к рутинным так как во время микроскопии многое зависит от субъективных ощущений исследователя, а культивирование достаточно трудоемкое занятие и имеет большие затраты времени на непосредственный рост грибов. Поэтому исходя из вышесказанного, обратимся к молекулярно¬генетическим методам для получения быстрой и точной диагностики, которые имеют высокую чувствительность и специфичность.
Цель дипломной работы: дать оценку информативности применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) при лабораторной диагностике зоонозной трихофитии.
Объект исследования: Дерматофиты рода Trichophyton, вида Trichophyton verrucosum.
Предмет исследования: Оценка эффективности выявления
дерматофитов рода Trichophyton, вида T. verrucosum методом полимеразной цепной реакции по отношению к распространённым методам диагностики дерматофитов.
Задачи:
1. Провести анализ литературы.
2. Выявить возбудителя трихофитии с помощью
регламентированных методов лабораторной диагностики (микроскопия патологического материала и культуральный метод), а также методом ПЦР.
3. Сравнить показатели чувствительности, специфичности и диагностической эффективности метода ПЦР и регламентированных методов лабораторной диагностики (микроскопия патологического материала и культуральный метод).
Грибковые заболевания относятся к числу трудноизлечимых болезней и качество терапии во многом зависит от качества лабораторной диагностики.
В работе мы убедились в том, что показатели информативности полимеразной цепной реакции превышает микроскопию и
культивирование на питательных средах. Также время, затраченное на получение результатов, полимеразная цепная реакция значительно меньше по сравнению с культивированием. Метод микроскопии по сравнению с полимеразной цепной реакцией выполняется быстрее, однако микроскопия не дает достоверный результат до вида. Показатель чувствительности полимеразной цепной реакции превышает другие методы диагностики примерно на 10-17%. Также по результатам исследования полимеразная цепная реакция имеет наивысший показатель специфичности, на 9-18% больше, чем показатели других методов, рассматриваемые в исследовательской работе. Диагностическая эффективность метода полимеразная цепная реакция составляет 97,87%, что является наивысшим значением этого показателя по сравнению с регламентированными методами. Показатель предсказательной ценности положительного результата полимеразной цепной реакции превышает другие методы на 4¬9%. Кроме того, предсказательная ценность отрицательного результата полимеразной цепной реакции выше регламентированных методов на 16¬31%. Также полимеразная цепная реакция имеет показатель отношения правдоподобия как положительных (42,12), так и отрицательных (0,02) результатов значительно превышающие показатели отношения правдоподобия метода культивирования и микроскопии патологического материала.
Так молекулярно-генетические методы лабораторной диагностики трихофитии и других поверхностных микозов могут существенно если не заменить, то дополнить «золотой стандарт» идентификации дерматофитов животных и использоваться в ветеринарных клиниках и сельскохозяйственных учреждениях.
