СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 4
ВВЕДЕНИЕ 6
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 8
1.1. Актуальность 8
1.2. Распространённость дерматофитии, в частности заболевания трихофитии
и ее возбудителей. 11
1.3. Методы лабораторной диагностики, применяемые при а диагностике
дерматомикозов. 15
1.4. Рекомендованные методы лабораторной диагностики дерматофитозов
животных, утвержденый главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ 18 марта 2008 г. 20
1.5. Сравнительная оценка положительных и отрицательных сторон методов
лабораторной диагностики дерматофитов. 23
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
2.1. Методики проведения методов исследования дерматофитов 36
2.1.1. Микроскопия патологического материала и мацерация 36
2.1.2. Культивирование на питательной среде 37
2.1.3. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени 36
2.1.4. Статистический анализ 41
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 45
1.1 Анализ литературы по методам исследования дерматомикозов 45
1.2. Результаты лабораторной диагностики грибов: микроскопия и культивировании на питательных средах, метод ПЦР на основе электрофореза и ПЦР в реальном времени 50
1.3 Статистический анализ 57
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 64
ВЫВОДЫ 66
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 67
На сегодняшний день проблема грибковых заболеваний имеет большое значение. В эпидемиологической обстановке во всем мире из можно поставить в один ряд с вирусными и бактериальными агентами. В настоящее время известны более 180 видов болезнетворных грибов и 40 из них вызывают дерматомикозы. Главной проблемой грибковых заболеваний является сложность в их лечении, а при долгом пребывании их в организме возможны необратимые последствия: осложнение заболевания - переход в хроническую форму и повышение вероятности дополнительного инфицирования патогенами. Именно поэтому в наше время так важно быстро и точно выявить грибковое заболевание, ведь именно это и является одним из ключевых факторов в избавлении от чужеродного объекта. Сегодня самыми распространенными в применении диагностическими методами исследования при дерматомикозах являются культуральный метод и микроскопия бактериологического материала. Но стоит заметить, что данные методы достаточно прозаичными, так как во время микроскопии все зависит от односторонних ощущений исследователя, а метод культивирование очень трудоемкий, требует больших затрат времени на рост патогенных грибов. Также хочется заметить, что на данный момент обширно используется метод ПЦР, который в отличие от предыдущих методов, имеет высокую чувствительность и специфичность, что позволяет получить быструю и точную диагностику. Но данный метод нельзя считать идеальным. Экстремальная чувствительность ПЦР к загрязнению посторонними молекулами ДНК, они могут быть многократно копированы в процессе ПЦР, приводя к ложноположительному результату. Поэтому исходя из вышесказанного следует обратиться к методу ПЦР в реальном времени (qPCR), который может дать не только высокую специфичность и чувствительность, но также снизить риск получения ложноположительного результата.
Цель дипломной работы: дать оценку информативности применения полимеразной цепной реакции в реальном времени (qPCR) при лабораторной диагностике дерматомикозов.
Объект исследования:
Предмет исследования: Оценка эффективности выявления
дерматофитов на примере рода Trichophyton, вида Trichophyton verrucosum методом полимеразной цепной реакции в реальном времени по отношению к распространённым методам диагностики дерматофитов.
Задачи:
1. Провести анализ литературы.
2. Выявить возбудителя дерматомикозы с помощью регламентированных методов лабораторной диагностики (микроскопия патологического материала и культуральный метод), а также методом ПЦР в реальном времени.
3. Сравнить показатели чувствительности, специфичности и диагностической эффективности метода ПЦР в реальном времени и регламентированных методов лабораторной диагностики (микроскопия патологического материала и культуральный метод).
Микоз - одно из самых сложных для лечения заболеваний, и качество лечения во многом зависит от качества лабораторной диагностики.
В нашем исследовании полимеразная цепная реакция оказалась более полезной, чем микроскопия или культура на среде. Кроме того, полимеразная цепная реакция требует значительно меньше времени для получения результатов, чем культура. Микроскопия выполняется быстрее, чем полимеразная цепная реакция, но микроскопия не дает надежных предварительных результатов. Чувствительность полимеразной цепной реакции примерно на 10-17% выше, чем у других методов диагностики. Полимеразная цепная реакция так же обладает самой высокой специфичностью, на 9-18%выше, чему других методов, проанализированных здесь. Диагностическая достоверность метода полимеразной цепной реакции составляет 97,87%, что является самым высоким значением для этого показателя по сравнению с регламентированными методами. Прогностическая ценность положительного результата полимеразной цепной реакции на 4-9% выше, чем у других методов. Также прогностическая ценность отрицательного метода полимеразной цепной реакции на 16-31% выше, чем у регламентированных методов. Более того, отношение положительной (42,12) полимеразной цепной реакции к отрицательной (0,02) полимеразной цепной реакции значительно выше, чем у культурального метода и микроскопического исследования патологического материала.
Таким образом, молекулярно-генетические методы в лабораторной диагностике стригущего лишая и других поверхностных грибковых инфекций могут существенно дополнить, если не заменить, "золотой стандарт" в идентификации дерматофитов животных и могут быть использованы в ветеринарных клиниках и сельскохозяйственных предприятиях.
