СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 3
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1 Условия формирования микробного консорциума ротовой полости 8
1.2 Краткая характеристика основных родов бактерий, грибов и простейших - представителей нормальной микрофлоры полости рта человека 13
1.3 Микробиологические и иммунопатогенетические основы развития
пародонтита. Механизм и этапы формирования зубных бляшек 25
1.4 Изменения в составе микрофлоры ротовой полости при пародонтите 28
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
2.1 Объект исследования и условия проведения эксперимента 35
2.2 Идентификация выделенных штаммов лактобактерий методом масс-спектрометрии 36
2.3 Анализ биопленок, формирующихся на инертных поверхностях 37
2.4 Исследование адгезивной способности изолятов лактобацилл к
буккальному эпителию 38
2.5 Определение антагонистических свойств Lactobacillusspp. к StapliylococcusaureusH Pseudomonasaeruginosa 39
2.6 Использование методов статистического анализа 40
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 41
3.1 Результаты бактериологического посева содержимого пародонтальных каналов пациентов 41
3.2 Идентификация выделенных штаммов Lactobacillusspp. 42
3.3 Адгезивная способность штаммов Lactobacillusspp. к буккальному
эпителию 45
3.4 Антагонистические свойства штаммов Lactobacillusspp. 47
3.5 Способность штаммов/actobacilliisspp.к биопленкообразованию 50
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 53
ВЫВОДЫ 54
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 55
Колонизационная резистентность - это совокупность механизмов, обеспечивающих способность микробиоты и макроорганизма в условиях кооперативного взаимодействия защищать определенную экологическую нишу от влияния патогенных микроорганизмов[45]. К таким механизмам относят: блокировку клеточных рецепторов тканей от посторонних микроорганизмов и конкурирования с ними за пищевые субстраты; стимуляцию подвижности эпителия слизистых оболочек; продукцию биологически активных субстанций (перекиси, бактериоцинов, лизоцима, антибиотикоподобных веществ), детоксикацию ксенобиотиков, активацию иммунного ответа макроорганизма).
Одним из распространенных последствий нарушения колонизационной резистентности слизистой оболочки полости рта (СОПР) является генерализованный пародонтит. Несмотря на огромное количество публикаций, разработок и патентов, проблема лечения заболеваний пародонта продолжает оставаться актуальной и является одной из самых сложных задач современной стоматологии. Ее важность подтверждается еще и тем, что количество лиц, страдающих генерализованным пародонтитом, неуклонно растет и данная патология теряет свои возрастные ограничения [46]. Причиной такой ситуации является ухудшение экологических, демографических, социальных факторов, что приводит к нарушениям иммунной системы организма и вызывает ослабление защитных барьеров слизистой оболочки ротовой полости. Снижение колонизационной резистентности СОПР, дисбаланс резидентной микробиоты экосистемы полости рта способствует развитию хронического генерализованного пародонтита[47].
Говоря о коррекции колонизационной резистентности, необходимо отметить, что одним из наиболее важных направлений является восстановление нормальной микробиоты и поддержание ее эффективного функционирования. Такое восстановление проводят с помощью применения пробиотиков, пребиотиков ииммуномодуляторов бактериального происхождения.
На сегодня пробиотические препараты рассматриваются как наиболее перспективные средства против антибиотикорезистентных субпопуляций патогенных бактерий. Микробиологические исследования подтверждают положительный эффект от включения пробиотиков в комплекс лечебных мероприятий у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом. Для коррекции дисбиотических состояний слизистых оболочек организма человека, в том числе и ротовой полости, чаще всего используют пробиотики на основе лактобацилл [29]. Этот факт подтверждает то, что именно молочнокислые бактерии играют первостепенную роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистых оболочек ротовой полости.
В связи с этим, целью работы стало изучение роли штаммов лактобацилл в поддержании колонизационной резистентности слизистой оболочки полости рта у пациентов с заболеваниями пародонта.
Задачи исследования:
1) Определить микробиоту содержимого пародонтальных
карманов больных с пародонтитом бактериологическим методом. Выделить чистые культуры Lactobacillus spp. и провести их видовую идентификацию методом масс-спектрометрии.
2) Исследовать адгезивную способность выделенных штаммов Lactobacillus spp. к буккальному эпителию;
3) Определить антагонистические свойства выделенных штаммов Lactobacillus spp. к Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa;
4) Изучить способность выделенных штаммов Lactobacillus spp. к образованию биопленок;
5) Анализ полученных данных, оценка перспективности
выделенных штаммов Lactobacillus spp. для создания пробиотических препаратов.
Научная новизна и теоретическая ценность.
В работе выделены и исследованы штаммы Lactobacillus spp. из содержимого пародонтальных карманов больных с пародонтитом легкой и средней степени тяжести, показана роль в колонизационной резистентности полости рта выделенных штаммов Lactobacillus spp.
Научно-практическая значимость.
Полученные штаммы Lactobacilus spp. обладают высокой адгезионной способностью и антагонистической активностью и могут быть определены как кандидаты для дальнейших исследований и создания эффективных новых пробиотиков при лечение пародонтита, а также в качестве вспомогательных препаратов для повышения эффективности лекарственной терапии и контроля стоматологических заболеваний, вызываемых условно-патогенными и патогенными микроорганизмами.
Характер колонизационной резистентности слизистой оболочки ротовой полости является одним из ведущих физиологических и патогенетически значимых факторов формирования и прогрессирования стоматологических заболеваний. При нарушениях в системе местного иммунитета полости рта и чрезмерном обсеменении условно-патогенными микроорганизмами, на фоне подавления роста и процессов жизнедеятельности резидентной микрофлоры, возникает риск поражений твердых тканей зубов, пародонта, СОПР.С целью назначения правильного лечения стоматологических больных и коррекции возникших дисбиотических состояний ротовой полости, очень важно понимать причины появления и развития дисбаланса, а также разобраться в механизмах его возникновения. Для этого же, в свою очередь, необходимо детально изучить те биологические свойства резидентной микрофлоры, которые имеют первостепенное значение в поддержании колонизационной резистентности.
По результатам исследования была изучена роль штаммов Lactobacillus spp., выделенных из пародонтальных карманов пациентов с пародонтитом, в поддержании колонизационной резистентности слизистой оболочки полости рта у данной группы стоматологических больных. Исследование позволило оценить способность 9 выделенных штаммов Lactobacillus spp., а именно видов L.casei и L.fermentum проявлять антимикробную активность по отношению к условно-патогенным культурам P. aeruginosa и S'. aureus, адгезивную способность к буккальным эпителиоцитам человека и способность к образованию биопленок, что определяет колонизационную резистентность слизистой оболочки ротовой полости.
1. Автандилов Г. А., Воронов И. А., Лебеденко И. Ю.
Стафилококки в ротовой полости и их роль в биодеструкции съемных неметаллических протезов // Российский стоматологический журнал. - 2015. - №1. - С. 14-20.
2. Балмасова И. П., Царев В. Н., Янушевич О. О., Маев И. В., Мкртумян А. М., Арутюнов С. Д. Микроэкология пародонта. Взаимосвязь локальных и системных эффектов. - М.: Практическая медицина. - 2020. - 148 с.
3. Борисов Л. Б. Медицинскаямикробиология,
вирусология,иммунология / Л. Б. Борисов. - 5-е изд., испр. - Москва : ООО «Мед.информ. аг-во», 2016. - 792 с.
4. Давыдова М. М., Плахтий Л. Я., Царев В. Н. Методы микробиологического анализа, применяемые в стоматологии // Микробиология, вирусология и иммунология полости рта: учебник / под ред. В. Н. Царева. - М.: Гэотар-Медиа. - 2013. - С. 223-268.
5. Зверев В. В. Медицинскаямикробиология, вирусология и иммунология. Атлас-руководство : учеб. пособие для студ. высш. мед. учеб.заведений / В. В. Зверев, А. С. Быков. - Москва : Мед. информ. аг- во,2018. - 416 с.
6. Зеленова Е. Г., Заславская М. И., Салина Е. В., Рассанов С. П. Микрофлора полости рта: норма и патология: учебное пособие. - Н.Н.: НГМА, 2014. - 158 с.
7. Ипполитов Е. В., Николаева Е. Н., Царев В. Н.
Биопленкаполостирта - индукторысигнальных систем
врожденногоиммунитета. // Стоматология. - 2017. - Т. 96, №4. - С. 58-62.
8. Назарчук О. А., Фаустова М. О. Биопленкообразующие свойства клинических штаммов грамположительных микроорганизмов //BiomedicalandBiosocialAnthropology. - 2017. - №29. - P 6-9.
9. Правосудова Н. А. Микробиологияполостирта : учеб.-метод. пособие для студ. мед. вузов / Н. А. Правосудова, В. Л. Мельников. - Пенза :ПГУ, 2011. - 89 с.
10. Рисованная О. Н., Лалиева З. В. Изучение микробного пейзажа десневой борозды в зависимости от клинического состояния тканей пародонта и уровня эмоционального напряжения // Проблемы стоматологии. - 2019. - Т.15, №2. - С. 135-140.
11. Романова Р О., Кашлевская М. Е., Левенков Д. С., Исянов Р В., Каторгин М. С. Особенности формирования микробной биопленки при воспалительных заболеваниях пародонта // Медицина и здравоохранение. - 2022. - №1. - С. 19-22.
12. Слажнева Е. С. Елизова Л. А., Лобода Е. С., Орехова Л. Ю. АтрушкевичВ. Г. Новые возможности в визуализации поддесневой микробной биопленки с помощью сканирующей электронной микроскопии // медицинский вестник Северного Кавказа. - 2020. - 15 (4). - С. 544-548.
13. Янковский Д. С. Интегральная роль
симбиотическоймикрофлоры в физиологиичеловека / Д.С. Янковский, В.П. Широбоков,Г.С. Дымент. - К. : ТОВ «Рута-Турс», 2011. - 169 с.
14. Alimbekov N. S., Digel I., Yerezhepov A. Y., Shardarbek R. S., Wu X., Zha J. Nutritional fctors influencing microbiota-mediated colonization resistance of the oral cavity: A literature review // Front Nutr. - 2022. - Vol. 20 (9).
15. Ananthanarayan. TextbookofMicrobiology. - 9th ed. / Ananthanarayan, Paniker. - OrientBlackswan, 2013. - 657 p... 54