📄Работа №184704
Тема: Стабильность генома штаммов бактерий при регенерации после их долговременного хранения методом криоконсервации
Тип работы
Дипломные работы, ВКР
Предмет
биология
Объем:
68 листов
Год:
2023
Просмотров:
55
4680
руб.
🛒 Купить работу
Не подходит эта работа?
Закажите новую по вашим требованиям
Узнать цену на написание
Закажите новую по вашим требованиям
Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
📋 Содержание
Актуальность исследования 4
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 6
1. Важности сохранения штаммов бактерий для медицины и биотехнологии.. .6
1.1 Формирование баз данных 6
1.2 Базы данных микрооргнизмов 7
1.3 Депонирование 7
1.4 Биорепозиторий 8
2 Способы долгосрочного хранения штаммов микроорганизмов 10
2.1 Методы непродолжительного хранения 13
2.1.1 Субкультивирование, или метод перевиваемых культур 13
2.1.2 Хранение под минеральным маслом 14
2.1.3 Вода или водно-солевые растворы 14
2.1.4 Хранение замораживанием 15
2.1.5 Высушивание 15
2.2 Методы продолжительного хранения 16
2.2.1 Консервация путем жидкостной сушки (L-сушка) 17
2.2.2 Лиофилизация микроорганизмов 17
2.2.3 Консервация путем криогенного замораживания 19
2. Строение геномов бактерий: хромосома, хромиды, мобильные генетические
элементы, плазмиды, островки мобильности (ICE-элементы) 22
3.1 Бактериальная хромосома 23
3.2 Мобильные генетические элементы 23
3. 2. 1 Плазмиды 24
3. 2. 2 Инсерционные последовательности (IS-элементы) 30
3. 2. 3 Транспозоны (Tn) 30
3. 2. 4 Бактериофаги 34
3. 2. 4 Интегроны (In) 35
3. 2. 5 Геномные острова 37
3. 3 ICE-элементы 38
4. Изменчивость штаммов бактерий: внутренняя рекомбинационная активность
и горизонтальный перенос генов 40
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 46
2.2.1. Приготовление питательных сред для культивирования бактерий 46
2.2.2. Культивирование бактерий в жидких и твердых средах 47
2.2.3. Подготовка бактерий к криохранению 47
2.2.4. Оживление штаммов бактерий после криохранения 47
2.2.5. Выделение ДНК из бактерий 48
2.2.6. Постановка полимеразной цепной реакции 48
2.2.7. Приготовление 1% агарозного геля для электрофореза 49
2.2.8. Электрофорез в агарозном геле 49
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 50
ВЫВОДЫ 57
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 58
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 6
1. Важности сохранения штаммов бактерий для медицины и биотехнологии.. .6
1.1 Формирование баз данных 6
1.2 Базы данных микрооргнизмов 7
1.3 Депонирование 7
1.4 Биорепозиторий 8
2 Способы долгосрочного хранения штаммов микроорганизмов 10
2.1 Методы непродолжительного хранения 13
2.1.1 Субкультивирование, или метод перевиваемых культур 13
2.1.2 Хранение под минеральным маслом 14
2.1.3 Вода или водно-солевые растворы 14
2.1.4 Хранение замораживанием 15
2.1.5 Высушивание 15
2.2 Методы продолжительного хранения 16
2.2.1 Консервация путем жидкостной сушки (L-сушка) 17
2.2.2 Лиофилизация микроорганизмов 17
2.2.3 Консервация путем криогенного замораживания 19
2. Строение геномов бактерий: хромосома, хромиды, мобильные генетические
элементы, плазмиды, островки мобильности (ICE-элементы) 22
3.1 Бактериальная хромосома 23
3.2 Мобильные генетические элементы 23
3. 2. 1 Плазмиды 24
3. 2. 2 Инсерционные последовательности (IS-элементы) 30
3. 2. 3 Транспозоны (Tn) 30
3. 2. 4 Бактериофаги 34
3. 2. 4 Интегроны (In) 35
3. 2. 5 Геномные острова 37
3. 3 ICE-элементы 38
4. Изменчивость штаммов бактерий: внутренняя рекомбинационная активность
и горизонтальный перенос генов 40
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 46
2.2.1. Приготовление питательных сред для культивирования бактерий 46
2.2.2. Культивирование бактерий в жидких и твердых средах 47
2.2.3. Подготовка бактерий к криохранению 47
2.2.4. Оживление штаммов бактерий после криохранения 47
2.2.5. Выделение ДНК из бактерий 48
2.2.6. Постановка полимеразной цепной реакции 48
2.2.7. Приготовление 1% агарозного геля для электрофореза 49
2.2.8. Электрофорез в агарозном геле 49
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 50
ВЫВОДЫ 57
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 58
📖 Введение
Актуальность исследования
С развитием биотехнологической отрасли, медицины, сельского хозяйства, где постоянно происходит взаимодействие с разного рода бактериями, как полезными, так и патогенными, появляется острая необходимость в глубоком изучении этих объектов. Этот процесс часто бывает растянут во времени и течении этого времени необходимо сохранить изучаемые изоляты в неизменном состоянии, что является сложной задачей. Сложность заключается в том, что бактерии обладают чрезмерной изменчивостью благодаря внутренней рекомбинации генома и горизонтальному переносу генов. Именно из-за этого вначале зарождения микробиологии как науки происходила потеря фенотипических признаков у выделенных изолятов в течение определенного времени и это приводило к значительным проблемам. На сегодняшний день метод пассажей уже уходит в историю и на его место приходят более современные способы долго срочного хранения бактерий. Наиболее эффективным методом и используемым в настоящее время во всех банках хранения бактерий является способ криоконсервации, при котором культура микроорганизмов в смеси с криопротектором замораживается при низких температурах, имеющих значение ниже -72С. Считается что при таком способе в бактериях полностью ингибируются все процессы, в том числе и рекомбинационные, что приводит к сохранности и неизменности геномов бактерий, и соответственно к сохранению фенотипов микроорганизмов.
Цель исследования.
Выявить влияние способа криохранения на внутреннюю рекомбинационную активность бактерий, ведущую к изменению их фенотипа.
Задачи исследования.
1. Получить флуоресцентно меченные лабораторные штаммы E.coli XL-Blue и дикие штаммы клубеньковых бактерий R.leguminosarum ГЛ3, R.leguminosarum ГЛ9 Sinorhizobium meliloti Mlu10 путем трансформации их плазмидным вектором, несущим гены флуоресцентных белков.
2. С использованием маркированных штаммов E.coli, выявить стабильность мобильной части генома бактерий при обычном культивировании на питательных средах.
3. Провести анализ влияния способа долгосрочного хранения на потери фенотипических признаков, детерминированных на плазмиде.
С развитием биотехнологической отрасли, медицины, сельского хозяйства, где постоянно происходит взаимодействие с разного рода бактериями, как полезными, так и патогенными, появляется острая необходимость в глубоком изучении этих объектов. Этот процесс часто бывает растянут во времени и течении этого времени необходимо сохранить изучаемые изоляты в неизменном состоянии, что является сложной задачей. Сложность заключается в том, что бактерии обладают чрезмерной изменчивостью благодаря внутренней рекомбинации генома и горизонтальному переносу генов. Именно из-за этого вначале зарождения микробиологии как науки происходила потеря фенотипических признаков у выделенных изолятов в течение определенного времени и это приводило к значительным проблемам. На сегодняшний день метод пассажей уже уходит в историю и на его место приходят более современные способы долго срочного хранения бактерий. Наиболее эффективным методом и используемым в настоящее время во всех банках хранения бактерий является способ криоконсервации, при котором культура микроорганизмов в смеси с криопротектором замораживается при низких температурах, имеющих значение ниже -72С. Считается что при таком способе в бактериях полностью ингибируются все процессы, в том числе и рекомбинационные, что приводит к сохранности и неизменности геномов бактерий, и соответственно к сохранению фенотипов микроорганизмов.
Цель исследования.
Выявить влияние способа криохранения на внутреннюю рекомбинационную активность бактерий, ведущую к изменению их фенотипа.
Задачи исследования.
1. Получить флуоресцентно меченные лабораторные штаммы E.coli XL-Blue и дикие штаммы клубеньковых бактерий R.leguminosarum ГЛ3, R.leguminosarum ГЛ9 Sinorhizobium meliloti Mlu10 путем трансформации их плазмидным вектором, несущим гены флуоресцентных белков.
2. С использованием маркированных штаммов E.coli, выявить стабильность мобильной части генома бактерий при обычном культивировании на питательных средах.
3. Провести анализ влияния способа долгосрочного хранения на потери фенотипических признаков, детерминированных на плазмиде.
✅ Заключение
1. Показано, что при регенерации после криоконсервации у бактерий возможно изменение фенотипических проявлений в следствии изменений в геноме
2. Основной причиной потери маркерных признаков является элиминация плазмиды
3. Выявлено, что изменения в геноме бактерий происходит на ряду с элиминацией плазмид также за счет рекомбинационных процессов, приводящих к потере только одного из маркеров.
2. Основной причиной потери маркерных признаков является элиминация плазмиды
3. Выявлено, что изменения в геноме бактерий происходит на ряду с элиминацией плазмид также за счет рекомбинационных процессов, приводящих к потере только одного из маркеров.
ИЛИ
Поиск аналога
📕 Список литературы
🖼 Скриншоты
🛒 Оформить заказ
⚡ Работу высылаем в течении 5 минут после оплаты.