Список сокращений и условных обозначений 3
ВВЕДЕНИЕ 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Характеристика бактерий рода Mycobacterium 6
1.2. Туберкулезные микобактерии 9
1.3. Нетуберкулезные микобактерии 11
1.4. Микобактериозы 13
1.5. Диагностика микобактериозов 16
1.6. Распространённость микобактериозов 17
1.7. Микроскопический метод 21
1.8. Культуральный метод 22
1.9. Системы BACTEC 23
1.10. Биологическая проба 24
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 26
2.1. Взятие биоматериала 26
2.2. Обработка нативного клинического материала 28
2.3. Выделение ДНК 28
2.4. Методика проведения ПЦР 32
2.5. Электрофорез ДНК 36
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 38
3.1. ПЦР диагностика бактерий вида Mycobacterium tuberculosis 38
3.2. ПЦР диагностика Нетуберкулезных Mycobacterium spp 52
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 56
ВЫВОДЫ 57
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 58
Актуальность исследования. В настоящее время в мире резко возросло количество заболеваний, которые связывают с потенциально патогенными микроорганизмами рода Mycobacterium, но отличающимися по своим характеристикам от Mycobacterium tuberculosis. Такие бактерии принято называть атипичными или нетуберкулезными микобактериями, а вызываемые ими заболевания микобактериозами.
Нетуберкулезные микобактерии повсеместно распространены в окружающей среде (в почве, воде и воздухе) и рассматриваются как сапрофиты или условно-патогенные, относящиеся к группе грамположительных, кислотоустойчивых, неспорообразующих бактерий, представителей рода Mycobacterium. В группу НТМБ входят более 200 видов, из которых около 50 являются возбудителями микобактериозов, клинически и рентгенологически схожих с туберкулезом.
Клиническими проявлениями нетуберкулезных микобактериозов являются патологические изменения в легких, лимфатических узлах, желудочно-кишечном тракте, коже, мягких тканях, костях, суставах. В силу схожести клинической картины с микобактериозами туберкулезного комплекса, нетуберкулезные микобактериозы часто принимаются за различные формы туберкулезного поражения дыхательной и других систем организма, что осложняет их диагностику.
Еще одной причиной затруднения в определении возбудителя, является большое разнообразие видов, которые могут приводить к сходным заболеваниям, но при этом требовать различные методы лечения, что делает микробиологическую диагностику важной. Благодаря структурным особенностям, микобактерии устойчивы ко многим антибиотикам, поэтому требуется длительное лечение комбинацией нескольких антимикробных молекул, выбор которых основан на видовой идентификации и результатах тестирования чувствительности к антибиотикам.
Учитывая важную этиологическую роль условно-патогенных нетуберкулезных микобактерий, неспецифические клинические проявления указывают на необходимость нахождений новых методов идентификации микобактерий и в разработки новых тест-систем.
Цель исследования. Разработка метода детекции в клиническом материале нетуберкулезных микобактерий для дифференциальной диагностики вызываемых ими заболеваний от туберкулеза.
Задачи исследования:
??. Анализ литературных данных, сравнительная оценка частоты встречаемости отдельных видов атипичных Mycobacterium spp. в клинических образцах и ретроспективная характеристика
эпидемиологических особенностей, связанных с ними заболеваний.
??. Экспериментальная оценка информативности метода
молекулярно-генетической детекции туберкулезных микобактерий в исследуемых образцах.
??. Отработка условий молекулярно-генетической детекции
нетуберкулезных микобактерий в исследуемых образцах.
Неоспорим тот факт, что микобактерии представляют большой риск для здоровья человека. На сегодняшний день существует множество штаммов микобактерий, вызывающих микобактериозы различной степени тяжести. Появление мутаций в геноме микобактерий, приводит к расширению их видов, что увеличивает частоту и распространенность микобактериозов. Глобальное ухудшение экологии на планете в будущем может привести к увеличению количества аутоиммунных заболеваний, что в свою очередь сопутствует распространению различных микобактериозов
Достижения в области методов визуализации и микробиологии, в частности молекулярного метода, значительно расширили наше понимание этого заболевания, но остается много неопределенностей, особенно в эпидемиологии и клинической статистике.
Правильная идентификация видов микобактерий становится все более важной по мере появления данных об относительной предрасположенности к различным нетуберкулезным заболеваниям легких.
